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       【关键词】  高效液相色谱法
       摘要：目的 研究双黄连含片中黄芩苷和汉黄芩素的含量测定。方法采用高效液相色谱法进行测定。ODS（C18）柱，乙腈0.6%磷酸（45∶55）为流动相，流量为1.0 ml/min，检测波长为277 nm。结果黄芩苷和汉黄芩素在0.105～0.52 μg和0.03～0.15 μg之间线性关系良好,相关系数r=0.999 8,回收率为100.69%和98.8%,RSD为1.75%和1.01%。结论该法灵敏、简便、准确，可用于该制剂的测定和质量控制指标。
       关键词：双黄连含片；黄芩苷；汉黄芩素；高效液相色谱法
       Determination of Baicalin and Wogonin in ShuangHuangLian Buccal Tablets by HPLC
       SONG Weizhong1, LIU Wei1, MA Kai2
       (1.Henan University,Kaifeng 475001, China; 2.Henan Academy of Chinese Traditional Medicine, Zhengzhou 450004, China)
       Abstract:ObjectiveTo develop an assay for the quantitative determination of baicalin and wogonin in Shuang HuangLian Buccal Tablets. MethodsHPLC method was selected to determine the content.ODS column(C18) was used.The mobile phase consisted of acetoniterile0.6% phosphoric acid (45∶55) with the flow rate at 1.0 ml/min and the UV detection wavelength was at 277 nm.ResultsThe linearity was obtained over the range of 0.105～0.52 μg and 0.03～0.15 μg (r=0.999 8).The average recovery was 100.69% and 98.8%,with RSD=1.75% and 1.01%.ConclusionThe results showed that this method is sensitive,simple,sepecific and accurate for the determination of baicalin and wogonin in ShuangHuangLian Buccal Tablets.
       Key words:ShuangHuangLian Buccal Tablets; Baicalin; Wogonin; HPLC
                                                                                  　　双黄连含片是由黄芩、金银花、连翘三味中药精制而成。其服用方便、效果好，具有辛凉解表，利咽解毒之功效，主要用于流感风热引起的发热、咳嗽及咽痛等。为更好地控制双黄连制剂黄芩中中主要有效成分黄芩苷和汉黄芩素含量，本实验采用HPLC法测定了双黄连含片中其含量。现将结果报道如下。
       　　1仪器、试药与试剂
       高效液相色谱仪(日本岛津CLASSVP10AVP)，KT350W超声提取器,ODS柱（C18），黄芩苷和汉黄芩素对照品（中国药品生物制品检定所），双黄连含片(河南大学药物研究所)，其它试剂均为分析纯。
       　2 方法与结果
       2.1  色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，乙腈0.6%磷酸（45∶55）为流动相，流量为1.0　ml/min，检测波长为277　nm，进样量10　μl,理论板数按黄芩苷和汉黄芩素峰计算应不低于2 000。
       2.2 对照品溶液的制备精密称定对照品黄芩苷和汉黄芩素一定量,加甲醇制成1 ml含20.8 μg和6 μg的混合溶液,即得。
       2.3 供试品溶液的制备取本品10片，研细，取细粉约0.5g ，精密称定，置100 ml锥形瓶中，加50%的甲醇80 ml，超声处理10 min，加50%的甲醇稀释至刻度，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 ml，置10 ml量瓶中，加50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
       2.4 阴性对照溶液的制备按处方比例称取黄芩外的其它药材，同法制成阴性对照溶液。
       2.5线性关系实验精密称取黄芩苷和汉黄芩素对照品，用甲醇溶解，制成制成1 ml含20.8 μg和6 μg的对照品溶液，分别进样5，10，15，20，25 μl。进行测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，求得黄芩苷回归方程为y＝3.331 87×106x－22 706.6;R＝0.999 8, 汉黄芩素回归方程为y＝1.432 44×104x－42.235 7，R＝0.999 8，黄芩苷和汉黄芩素在0.105～0.520 μg和0.03～0.15 μg之间线性关系良好。
       2.6精密度与稳定性实验 按样品测定方式对同一供试品洛液重复测定5次，得黄芩苷和汉黄芩素的平均峰面积为8.599，RSD＝0.8％。再分别于0.5，1，2，4及24 h测定，结果表明在测定条件下，于24 h内测定结果稳定，RSD为0.85％和0.72%。
       2.7 空白实验取不含黄芩的空白片，按样品测定法测定，结果在含黄芩苷和汉黄芩素对照品吸收峰位置处无干扰。
       2.8 重复性实验按照“样品测定”项下的方法，对同一样品进行多次测定，黄芩苷和汉黄芩素平均含量为 37.1 mg，2.90 mg，结果RSD=1.94%和1.76%（n=5）。
       2.9 加样回收率实验取本品10片，研细，取细粉约0.5 g，精密称定，置100 ml锥形瓶中，精密加入一定量的黄芩苷和汉黄芩素对照品，自样品测定中方法依法测定，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验 （略）
       由以上实验结果可知，平均回收率为100.69%和98.8%,RSD为1.75%和1.01%。
       2.10   样品测定按2.3方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定3批样品中黄芩苷和汉黄芩素的含量。 测定结果见表2。表2  黄芩苷和汉黄芩素的测定结果 （略）                                                 
　　3 讨论
       3.1 本文对双黄连含片中主药黄芩的主要有效成分黄芩苷和汉黄芩素建立了含量测定方法，结果可靠，对完善双黄连含片制剂的质量标准有一定意义。
       3.2  流动相系统分别采用乙晴0.6%磷酸（45∶55），甲醇0.6%磷酸（50∶50），乙晴0.6%磷酸（50∶50）为流动相，以第1种方法色谱峰得到很好分离 ，其它两种方法分离效果均不佳。
       作者简介：宋卫中(1970)，男(汉族)，河南开封人，现任河南大学讲师，学士学位，主要从事生药的教学与科研工作.
　　
　　(1.河南大学，河南 开封475001；2.河南中医研究院，河南 郑州 450004)
       收稿日期：20050618