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       【关键词】  囊含
       摘要：目的改进经带宁胶囊含量测定的方法。方法在原高效液相色谱(HPLC)法的基础上，采用流动相溶解对照品和提取样品以及提取方法的改变，并与原方法进行比较。结果采用20 μl定量环进样，色谱峰峰形好，减少进样误差，使积分更准确，并且降低检验成本。结论改进后的方法操作简单，重现性好，测定结果准确可靠，更有利于产品质量的控制。
       关键词：经带宁胶囊；岩白菜素；高效液相色谱
                                                                       
　　经带宁胶囊为苗族药，现已收载于《国家中成药标准汇编中成药地方标准上升国家标准部分》（外科、妇科分册）里，其所含的岩白菜素采用RPHPLC法进行测定。笔者在测定该药含量时发现重现性小，且对色谱柱污染极大，故对此进行改进。通过实验，改用流动相稀释对照品、提取供试品且用20 μl定量环进样，结果准确可靠，重现性好。现报道如下。
       　　1 仪器与试剂
       美国Waters1525高效液相色谱仪、Waters2487双波长紫外检测器、WatersBreeze色谱工作站、Waters symmetr C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）色谱柱，Diamonsil C18（5 μm，200 mm×4.6 mm）色谱柱，HPLC保护柱（Security Guard），CH250型超声波清洗机（北京创新德超声电子研究所），AB265S电子分析天平（METTLER TOLEDO），台式离心机（上海手术器械厂）。经带宁胶囊由贵州世禧制药厂提供，岩白菜素对照品（批号：1532200001）由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，水为纯净水（经减压过滤脱气）。
       　　2 实验方法和结果 
       2.1 色谱条件［1］原方法实验条件不变。 流动相：甲醇水（25∶75），流速1.0 ml・min1，检测波长275 nm，柱温：室温。
       2.2　对照品溶液的制备 精密称取岩白菜素对照品①0.010 13 g，②0.010 06 g，分别置100 ml的容量瓶中，分别向①②两份对照品里加入流动相和甲醇使溶解，并稀释至刻度，即得对照品溶液①②。
       2.3 供试品溶液的制备 精密称取供试品分A，B，C，D四组，每组4份，每份约1 g，分别置具塞三脚烧瓶中，精密加甲醇（A，B）和流动相(C，D)各25 ml，称定重量。A，C超声2 min，取出放冷，称定重量，分别用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得；B，D超声30 min，取出，放置过夜，称定重量，分别用相应溶剂补足减失的重量，离心3 000 r/min，取上清液，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得。
       2.4 对照品溶剂的考察 分别精密吸取对照品溶液①②各5，10，20 μl注入液相色谱仪。记录得色谱图，见图1～2。
       从色谱图可知：用流动相比用纯甲醇溶解对照品的色谱图更理想，定量更准确。同时其它色谱条件不便，改用不同的色谱柱也得到以上相同的结论。说明用流动相甲醇-水（25∶75）做溶媒比用纯甲醇做溶媒更理想。
       2.5 线性关系的考察
       称取岩白菜素对照品适量，加流动相定量稀释得岩白菜素对照品浓度为：25，50，100，200，400 μg・ml1系列浓度标准溶液，分别精密吸取以上标准溶液各20μl注入液相色谱仪分析，测定峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X）作线性回归，得回归方程Y=28 432X+7 249（r=0.999 8）。
       2.6 供试品前处理方法的考察
       分别测定2.3项下的供试品溶液A，B，C，D 测定。结果见表1。表1  不同处理方法处理后的含量测定结果 （略）                               
　
　　从以上数据可看出用流动相做溶媒与用纯甲醇做溶媒提取，岩白菜素含量无明显差别，但是超声30 min后放置过夜比只超声2 h的岩白菜素含量稍高，因此采用流动相做溶媒,超声30min,静置过夜的方法不论是从定量的准确性，还是从成本节约上考虑，均比其它方法较优越。供试品溶液的制备方法采用“取装量差异下的内容物，研细，取1 g，精密称定，精密加流动相25 ml，称定重量，超声30 min，取出，放置过夜，称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，离心（3 000 r/min），取上清液，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得”。
       2.7  精密度和重复性实验
       精密吸取取线性关系考察项下的0.1 mg・ml1的对照品溶液20μl注入液相色谱仪重复测定，岩白菜素含量的相对偏差为RSD=0.7%（n=6）。对同一样品重复进样20 μl测定，岩白菜素含量的相对偏差为RSD=0.9%（n=6）。
       2.8 回收率实验
       采用加样回收法，称取已知含量的经带宁胶囊供试品，加入岩白菜素对照品，照2.6项下确定的供试品制备方法制备，HPLC法测定。结果见表2。表2　加样回收率结果（略）                                             
　　2.9 稳定性取含量测定项的样品液，隔1.5 h进样测定，连续考察9 h，结果样品液9 h内稳定，RSD=1.3%（n=7）。
       2.10 样品含量测定样品含量测定。结果见表3。表3　样品含量结果（略）
       　　3 讨论
       经带宁胶囊采用原方法测定含量时发现，样品对色谱柱污染较严重，一颗新的色谱柱最多对供试品溶液进样20次，且色谱柱柱效大大降低，并且每一次都比上一次有所降低，以至使定量的重复性很差；在对对照品进行测定时发现柱效与进样体积有关，并且影响特别大；样品超声时间太长，不利于超声波清洗机的维护保养原则。
       针对以上问题，通过实验发现往样品的纯甲醇提取液里逐渐加入水，溶液由澄清的淡褐色液体变为淡黄色的浑浊液体（沉淀产生），这就是污染色谱柱的根本原因，也是使柱效降低的主要原因。
       改进后的方法与原方法相比：色谱峰峰形更好,因可用定量环（20 μl）进样，所以定量更准确，同时降低了成本，有利于操作，从而显示出该法有较大的优越性。
       　参考文献：
       ［1］国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编中成药地方标准上升国家标准部分（外科、妇科分册）［S］.2002：435.
       作者简介：薛朝金(1975)，男(汉族)，贵州人，现任贵州省毕节地区药品检验所中药师，学士学位，主要从事中药材及中成药检验工作.
       (贵州省毕节地区药品检验所551700)
       收稿日期：20050324