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       【关键词】  人参
       摘要：目的研究人参皂苷CK对 CCl4致慢性肝损伤的影响。方法 用CCl4致大鼠慢性肝损伤模型，观察人参皂苷CK（0.3，1，3 mg/kg）对大鼠血清天冬氨酸转氨酶( aspartate transaminase, ALT)、丙氨酸转氨酶( alanine transaminase, AST) 、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)及透明质酸（hyaluronic acid，HA）、Ⅲ型前胶原（pre-collagen Ⅲ, PCⅢ）的影响，并对肝脏组织进行病理学观察。结果人参皂苷CK小剂量（0.3 mg/kg）能降低血清转氨酶ALT，AST水平，增加血清SOD的含量，降低MDA含量；CK中、高剂量无明显作用。CK各剂量组血清HA、PCⅢ和肝组织病理未见明显改变。结论CK低剂量对CCl4致慢性肝损伤具有一定的保护作用，其作用可能与抗氧化有关。
       关键词：人参皂苷CK；肝损伤；谷丙转氨酶；谷草转氨酶；超氧化物歧化酶
       Effect of Compound K on Chronic Hepatic Injury Induced by Carbon Tetrachloride （CCl4 ） in Rats
       ZHANG Leiming, FU Fenghua*, WANG Tian, HAN Bing, ZHU Mei
       (School of Pharmacy, Yantai University, Yantai, Shandong 264005, China)
       Abstract:ObjectiveTo observe the effect of Compound K on chronic hepatic injury induced by CCl4 in rats.MethodsIn male Wistar rats hepatic chronic injury was induced by the subcutaneous administration of CCl4 twice a week for six weeks. Then rats were given Compound K at dose of 0.3, 1 or 3 mg/kg respectively for a further four weeks. At the end the biochemical parameters associated with hepatic injury were determined, and the histopathology of liver was observed.ResultsCompared with the model group, activities of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) were significantly reduced by Compound K at dose of 0.3 mg/kg, accompanied with that the amount of superoxide dismutase (SOD) markedly increased and malondialdehyde(MDA) reduced obviously, while no significant changes in the amount of hyaluronic acid (HA) and procollagen III (PCIII) or histopathology were observed.ConclusionCompound K at low dose could protect liver from injury induced by CCl4, which may be associated with its antioxidation effect.
       Key words:Ginsenoside compound K;Hepatic injury; Alanine aminotransferase;     Aspartate aminotransferase; Superoxide dismutase
       人参皂苷为人参的主要活性成分，具有抗炎［1］、抗肿瘤［2］等药理活性。这些药理活性已被阐明是人参皂苷在肠道细菌的作用下发生生物转化生成次级代谢产物的生物效应［3～5］。CK是人参皂苷在肠道的主要代谢产物，近年来研究发现其具有抗肿瘤等生物学活性，然而其在肝损伤的保护方面至今未见报道。因此，本实验采用CCl4致大鼠慢性肝损伤模型，观察人参皂苷CK对慢性肝损伤的影响。
       1 材料与方法
       1.1 动物Wistar大鼠，雄性，体重150～180 g，山东省天然药物工程技术研究中心提供，动物合格证号：鲁动质字200106005号。
       1.2 药品与试剂CK：山东省天然药物工程技术研究中心提供。复方鳖甲软肝片：内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司生产（批号：20031001）。ALT、AST检测试剂盒：中生北控生物科技股份有限公司生产（批号：010331/020101）；SOD，MDA检测试剂盒：南京建成生物工程研究所生产（批号：20050126/20050117）；HA、PCⅢ酶标检测试剂盒：上海海研医学生物技术中心提供。
       1.3　造模及用药将60只大鼠随机分为正常对照组、肝损伤模型组、复方鳖甲软肝片治疗组、CK小剂量治疗组、CK中剂量治疗组、CK大剂量治疗组，每组10只，共6组。将CCl4与精制花生油按2∶3比例配成40%油剂CCl4，除正常组外其余各组按CCl4 3 ml/kg皮下注射（首次加倍），正常对照组则以同样的方法注射等量的精制花生油，每周2次，持续造模6周，然后灌服相应药物或溶媒，复方鳖甲软肝片组给予复方鳖甲软肝片0.54 g/kg； CK小剂量组给予CK 0.3 mg/kg，CK中剂量组给予CK 1 mg/kg， CK大剂量组给予CK 3 mg/kg；正常对照组和肝损伤模型组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠。1次/d，共4周。末次给药24 h后麻醉大鼠，腹主动脉取血，离心分离血清，20℃保存备用。取肝脏标本，10%中性甲醛溶液中固定。
       1.4 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清转氨酶ALT，AST的影响按照试剂盒说明以全自动生化分析仪测定。
       1.5CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清SOD，MDA的影响按照试剂盒说明以比色法测定。
       1.6 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清HA，PCⅢ的影响按照试剂盒说明以比色法测定。
       1.7 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化的影响将固定好的肝脏脱水、包埋，HE染色，光镜观察。
       1.8 统计学处理 结果用±s表示，组间比较采用ttest检验。
       　　2结果
       2.1 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清转氨酶ALT、AST的影响与正常组比较，模型组大鼠血清ALT、AST水平均显著升高（P<0.05或P<0.01），CK小剂量组的血清ALT（P<0.05）、AST（P<0.01）水平均显著下降，而中、大剂量未见明显改变。见表1。表1 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST的影响(略)
       2.2 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清SOD、MDA的影响 与正常组比较，模型组大鼠血清SOD水平显著降低（P<0.01）,MDA水平显著升高（P<0.01）；与模型组相比，CK小剂量组血清SOD水平显著升高（P<0.01）, MDA水平显著降低（P<0.01），而中、大剂量未见明显改变。见表2。表2 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清SOD、MDA的影响(来)
       2.3 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清HA、PCⅢ的影响与正常组比较，模型对照组大鼠血清中HA，PCⅢ含量均显著升高（P<0.05，P<0.01）；CK除小剂量可降低HA外，均对HA，PCⅢ无明显影响；复方鳖甲软肝片组血清中HA，PCⅢ水平则明显降低（P<0.05）。见表3。表3 CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠血清HA、PCⅢ的影响（略）
       2.4  CK对CCl4致慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化的影响HE常规染色肝组织切片显示，正常组大鼠肝细胞未见变性与坏死，肝内未见纤维组织增生，汇管区不扩大，小叶结构清晰，肝组织结构正常。模型组可见肝细胞肿胀、变性，炎性细胞浸润，肝小叶间有胶原束增生。CK各剂量组与模型组相比未见明显改变，复方鳖甲软肝片组肝纤维化增生程度较模型组有所减轻。
       　　3 讨论
       实验结果显示，大鼠皮下注射40%CCl4 花生油6周后，血清ALT、AST、HA、PCⅢ水平均显著升高，提示肝脏发生严重损伤。组织病理学检查可见肝细胞肿胀、变性，炎性细胞浸润，肝小叶间有胶原束增生，出现了典型的慢性肝损伤表现，说明本实验造模是成功的。
       复方鳖甲软肝片是目前比较公认的抗肝纤维化药物，从本实验中可以看出其能明显降低HA，PCⅢ水平（P<0.05），减轻大鼠肝纤维化增生程度，而CK对HA，PCⅢ未见明显降低作用。另一方面CK小剂量组的ALT（P<0.05），AST（P<0.01）水平均显著下降。以上提示CK对肝纤维化形成无明显影响（这从组织病理学检查中也得到了验证），但能起到保肝的作用。进而我们实验中又发现CK小剂量组血清SOD水平显著升高（P<0.01）, MDA水平显著降低（P<0.01），而SOD活力的高低间接反映了机体清除自由基的能力，MDA水平常常可反映机体内脂质过氧化的程度，由此提示CK降低转氨酶作用可能与SOD有关。SOD活力的升高有效的防止了细胞膜的脂质过氧化。至于CK中、大剂量保肝效果不明显，推测可能与剂量增大，CK本身对肝脏产生毒性有关。CK对肝脏作用的量效关系及机理还值得进一步研究。
       　参考文献：
       ［1］Wu JY, Gardner BH, Murphy CI, et al. Saponin adjuvant enhancement of antigenspecific immune responses to an experimental HIV1 vaccine［J］. Journal of Immunology，1992，148:1519.
       ［2］Mochizuki M, Yoo CY, Matsuzawa K, et al. Inhibitory effect of tumor metastasis in mice by saponins, ginsenoside Rb2,20(R)and 20(S) ginsenoside Rg3, of red ginseng［J］.Biological and Pharmaceutical Bulletin，1995，18:1197.
       ［3］Hasegawa H, Sung JH, Benno Y. Role of human intestinal Prevotella oris in hydrolyzing Ginseng saponins［J］. Planta Medica，1997，63:436.
       ［4］Bae EA, park SY, Kim DH. Constitutive βglucosidases hydrolyzing ginsenoside Rb1 and Rb2 from human intestinal bacteria［J］. Biological and  Pharmaceutical Bulletin，2000，23:1481.
       ［5］Bae EA, Han MY, Choo MK, et al. Metabolism of 20(S)and 20(R) ginsenoside Rg3 by human intestinal bacteria and its relation to in vitro biological activities［J］. Biological and  Pharmaceutical Bulletin，2002，25:58.
       作者简介：张雷明(1976)，男(汉族)，山东邹平人，现任烟台大学药学院助教，硕士学位，主要从事免疫药理研究工作.
       通讯作者简介：傅风华(1963)，男(汉族)，山东边州人，现任烟台大学药学院教授，硕士学位，主要从事生化药理研究工作.
       (烟台大学药学院，山东 烟台264005)
       收稿日期：20050324；