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       【关键词】  三七
       摘要：目的观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中TGFβ1及IL1的影响，探讨三七总皂苷抗肝纤维化可能的免疫学机理。方法用CCl4复制小鼠中毒性肝纤维化模型，同时给与三七总皂苷治疗，酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定血清中TGFβ1及IL1的水平，并行肝脏病理组织切片检测。结果三七总皂苷能显著降低肝纤维化小鼠血清中TGFβl及IL1的水平，减轻肝纤维化程度。结论三七总皂苷具有抗肝纤维化作用，其机理可能与降低血清中TGβp1及IL1的水平有关。
       关键词：三七总皂苷；肝纤维化；转化生长因子β1；白介素1；小鼠
         
　　Effects of Panax notoginseng Saponins on TGFβ1 and IL1 in Mice Serum with Liver Fibrosis
       YU Wangui, ZHANG Hengwen, HE Shangrong, YAN Nianchun
       (College of Medical Science，Yangtze University,Jingzhou, Hubei 434000,China)
       Abstract:Objective To observe effects of Panax notoginseng saponins(PNS)on TGFβ1 and IL1 of serum in mice with 1iver fibrosis.MethodsThe model of CCl4 induced liver fibrosis was established in mice and   they were treated with PNS.Serum 1evel of TGFβ1 and IL1 were determined and observed tissue patho1ogy.ResultsIt significantly decreased 1evel of TGFβ1 and IL1 in serum with PNS treatment，and the 1iver  fibrosis was improved.Conclusion PNS has reversal effects on mice with hepatic  fibrosis，it may be correlated with drop serum level of TGFβl and IL1.
       Key words:Panax notoginseng Saponins；Hepatic fibrosis；TGFβ1; IL1；Mice
       中医认为肝纤维化主要是气滞血瘀所致，因此采用活血化瘀药物治疗。三七既有滋补强壮之功，又是活血化瘀之主药。已有研究表明，三七总皂苷对CCl4诱发小鼠血清谷丙转氨酶的升高有明显的抑制作用，还能抑制成纤维细胞、肝星状细胞增殖及细胞内外工型胶原的生成等［1，2］。转化生长因子β1(TGFβ1)及白介素1(IL1)是肝纤维化形成过程中的二个重要的细胞因子，具有活化贮脂细胞(FSC)使其转化为成纤维母细胞(MFb)，导致细胞外基质(ECM)异常沉积的特性，参与纤维化形成［3，4］。本实验在用四氯化碳复制小鼠中毒性肝纤维化模型基础上，测定血清中TGFβl及ILl的水平。观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中TGFβ1及IL1的影响，探讨三七总皂苷抗肝纤维化可能的免疫学机理。
       1 材料
       1.1 动物
       昆明种小鼠42只，雌雄各半，体重20～22 g，由广州军区陆军总医院动物中心提供。
       1.2 药物三七总皂苷由湖北中医药学院中药系提供，纯度＞95%。
       1.3 试剂IL1试剂盒购自北京邦定泰克生物有限公司，TGFβ1试剂盒购由上海森雄公司提供。20%的CCl4橄榄油溶液配制：取四氯化碳（分析醇）20 ml加橄榄油（化学醇）80 ml混合而成。四氯化碳由重庆东方试剂厂出品，橄榄油由上海化学试剂站分装厂出品。
       1.4 主要仪器酶标仪（MK3型，Labxystem Dragon公司生产）；SHZ82型水浴箱为江苏省太仓医疗器械厂产品。
       　　2 方法
       2.1造模与分组实验共设为3组：空白对照组(对照组，n=12)：颈部皮下注射橄榄油5 ml/kg，5 d 1次，正常饮水，饲与全价颗粒饲料。肝纤维化模型组(模型组，n=12)：颈部皮下注射20%的CCl4橄榄油溶液5 ml/kg，1次/5 d，直到实验结束，共持续6周［5］，正常饮水，饲与全价颗粒饲料。三七治疗组(治疗组，n=12)：在预实验取得最佳剂量后，造模的同时给予三七总皂苷皮下注射，30 mg/kg,1次/d，其余同肝纤维化模型组。
       2.2 观察指标及其测定方法
       2.2.1 对小鼠一般情况及体重的观察每天观察小鼠的一般症状，饮食变化，行为及毛发变化。
       2.2.2 TGFβ1、ILl的检测 实验结束后，各组小鼠断头取血，分离出血清，酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定血清中TGFβ1及IL1的水平，具体操作均按试剂盒说明。
       2.2.3 病理形态学观察 
       常规HE染色观察肝组织学变化，将肝纤维化分为0～4级［6］,0级：无纤维化；I级：纤维结缔组织仅局限于汇管区或汇管区扩大，有向小许发展的趋势；Ⅱ级：纤维结缔组织增生进入肝小叶2/3并有与工级同样的改变；Ⅲ级：纤维结缔组织进入肝小叶达中央静脉周围；Ⅳ级：纤维结缔组织在全小叶多处弥漫性增生，假小叶形成，并有与Ⅲ级同样的改变。
       2.3统计学处理肝纤维化分级结果比较采用等级资料的秩和检验，两均数比较采用t检验。P<0.05为有统计学意义。
       　　3 结果
       3.1 小鼠一般情况
       对照组处死前均存活，每只体重增加(9.6±3.4)g，模型组死亡4只，至6周末处死前，每只体重增加(2.6±2.0)g，显著低于对照组(P＜0.01)。三七治疗组实验中死亡1只，每只体重增加(6.6±2.8)g，显著高于模型组(P<0.01)。死亡者未列入统计。
       3.2  各组小鼠肝组织病理学变化模型组肝细胞有较广泛的点状坏死，伴炎症细胞浸润，肝细胞增生较为明显，汇管区结缔组织增生。治疗组，肝组织切片检测可见修复的肝细胞索，炎症细胞浸润轻于模型组。见表1。表1 各组小鼠肝纤维化病理学分级及评分（略）
       3.3各组小鼠血清中TGFβ1，IL1的水平模型组小鼠血清TGFβ1，IL1显著地高于对照组，治疗组小鼠血清TGFβ1，IL1显著地低于模型组。见表2。表2各组小鼠血清中TGFβ1，IL1测定结果 （略） 
       4 讨论
 
　　本研究以CCl4复制小鼠肝纤维化动物模型，使肝细胞发生变性坏死，通过炎症肝脏结缔组织增生，分割肝小叶，最后导致肝硬变。肝纤维化的实质是由于胶原和其他细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡，导致ECM在肝内过量沉积［6］。
       ECM的沉积和降解间的平衡由多种细胞因子调控，其中TGFβ1及IL1的调控作用尤为关键。TGFβ1在肝纤维化中的主要作用是促进ECM合成并抑制其降解，也有间接促HSC增殖作用［3］。肝纤维化患者TGFβ1水平升高，其升高与肝纤维化严重程度一致［4］。IL1主要由单核巨噬细胞分泌，作用于人的贮脂细胞、纤维母细胞、增加胶原合成，  Dolar等［7］检查了43例慢性病毒性肝炎患者和肝硬化患者血清II1水平，发现其与肝纤维化程度呈正相关。Aanstssalos等还发现IL1可加强TGFβ1的合成与释放，诱导粘附分子及其受体表达。根据中医辨证，结缔组织增生性疾病(包括肝纤维化和肝硬化)与血瘀证相关，而活血化瘀药物对此类疾病有独特的功效。  在肝纤维化的治疗中，目前以活血化瘀及益气活血法应用得最为广泛。三七是经典的止血活血良药。临床观察发现，三七有利胆退黄、降酶等作用，可提高慢性肝病患者的血浆白蛋白［7］。
       药理研究证实，三七对动物实验性急性肝损伤有明显的防治作用，其有效成分三七总皂苷是缺血再灌注损伤的有效保护药物［8］，且对CCL4诱发小鼠血清谷丙转氨酶的升高有明显的抑制作用，还能抑制成纤维细胞、肝星状细胞殖及细胞内外Ⅰ型胶原的生成等［1，2］，但其对肝纤维的防治免疫学机理研究报道甚少。
 
　　本研究结果表明，模型组小鼠肝细胞有较广泛的点状坏死，伴炎症细胞浸润，肝细胞增生较为明显，汇管区结缔组织增生，提示小鼠肝纤维化模型是可靠的。模型组小鼠血清TGFβl、IL1显著升高，与有关文献报道相一致。而三七总皂苷治疗组能显著降低肝纤维化小鼠血清中TGFβl及IL1的水平，减轻肝纤维化程度。病理观察提示三七总皂苷可明显地拟制肝组织中成纤维细胞及胶原纤维增生，说明三七确能抑制肝脏胶原纤维合成与沉积，具有抗肝纤维化作用，且血清学指标变化与形态学改变相吻合。本研究表明，三七总皂苷具有抗肝纤维化作用，其机理可能与降低血清中TGFβ1及IL1的水平有关。
       　　参考文献：
       ［1］熊磊，刘平，谭英姿，等.三七总苷对肝星状细胞增殖及胶原生成的影响［J］.中西医结合肝病杂志，1999,9(3)：19.
       ［2］宋烈昌，刘杰，藏其中，等.三七总皂苷对四氯化碳中毒小鼠DNA和蛋白质代谢的影响［J］.药学通报，1982,17(2)：3.
       ［3］AlcoladoR，Arthur MJP, Iredale P.Pathogenesis of liver fibrosis［J］.ClinSci l997,92：103.
       ［4］ 高玉洁，杨志才，王玉芳，等.转化生长因子和肿瘤坏死因子在肝纤维化中的表达［J］.肝脏,2004,9(2)：111.
       ［5］程明亮，刘三都.肝纤维化的基础研究与临床［M］.北京：人民卫生出版社，1996：293.
       ［6］Hayasaka Saisho.Serum markers as tools to monitor liver fibrosis［J］.Digestion,1998,59(4)：381.
       ［7］陶文生，韩淑芳.三七有利胆、退黄、降酶等作用［J］.中医杂志，1994,35(2)：71.
       ［8］梁力建，何强，吕明德，等.三七总皂苷对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用［J］.新消化病学杂志，1997,5(7)：419.
                                                                
　　作者简介：余万桂(1969)，女(汉族)，湖北荆州人，现任长江大学医学院生理学副教授，硕士学位，主要从事消化道神经免疫的教学与研究工作.
       (长江大学医学院，湖北 荆州434000)
       收稿日期：20050315