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       【关键词】  抗病毒
       摘要：目的筛选芩连抗病毒胶囊醇提和水提最佳工艺。方法采用正交实验法对芩连抗病毒胶囊提取工艺进行考察，分别以组方中的黄芩苷和盐酸小檗碱的含量为指标进行测定。结果醇提工艺以10倍量70%的乙醇提取3次,1 h/次；水提工艺以10倍量水，煎煮2次，2 h/次所得到的黄芩苷和盐酸小檗碱的含量最高。结论此工艺对黄芩苷和盐酸小檗碱的提取率高，稳定性好，适合工业化生产。
       关键词：黄芩苷；盐酸小檗碱；提取工艺
       Study on Extraction Processes of Qinlian Antivirus Capsule
       CHEN Hongbao1, LIANG Shengwang2
       (1.Henan Zhongjing Sanitarian Medical Co.Ltd., Zhengzhou, Henan 450001, China; 2.Henan College of TCM, Zhengzhou,Henan 450008, China)
       Abstract:ObjectiveTo determine the optimum condition of extraction processes of Qinlian Antivirus Capsule.MethodsThe extraction processes were studied with the potentiametric method and the contents of baicalin and berberine hytrochloride as the markers.ResultsThe contents of baicalin and berberine hytrochloride were the highest when the following extraction condition was used:extracting with 70% alcohol and 10 times solvent for an hour a time and the process was repeated three times,and the extraction process of water is that 10 times solvent ,boiling twice ,2 hours per-time.ConclusionThe contents of baicalin and berberine hytrochloride are high and the stability is good when this extraction process is used. This extraction process is suitable for industrial production.
       Key words:Baicalin; Berberine hytrochloride; Extraction process
       芩连抗病毒胶囊由黄芩、黄连、桔梗、牛蒡子等组成。具有清瘟解毒之功效，用于外感时疫或外感风热引起的头疼身痛，恶寒发热，喉痛咳嗽，痄腮红肿等诸症。黄芩苷和盐酸小檗碱分别是方中君药和臣药的主要有效成分［1～3］，故本实验以黄芩苷和盐酸小檗碱的含量为指标采用正交实验法对醇提工艺和水提工艺进行考察，以确定芩连抗病毒胶囊的最佳提取工艺。
       　1 仪器与试药
       高效液相色谱仪(美国安捷伦1100)；Extend ODS C18色谱柱 (大连依利特)；微量进样器（HAMITON COMPANY）；岛津CS9301双波长薄层扫描仪；KQ3200DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；定量毛细管（美国Drummond Co.）。液相用试剂均为色谱纯；薄层用试剂均为分析纯。试验用药材购自郑州市神州大药房，经鉴定，符合《中国药典》规定。
       　2 醇提工艺考察及结果
       2.1色谱条件［4］用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水磷酸（47∶53∶0.2）为流动相；检测波长280 nm；柱温室温。
       2.2 对照品溶液的制备取黄芩苷对照品加甲醇制成每毫升含60 μg的溶液作为对照品溶液。
       2.3 线性化范围考察精密称取减压干燥后的黄芩苷对照品，用甲醇溶解制成每毫升含黄芩苷149.3 μg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取黄芩苷对照品溶液2，4，6，8，10 μl注入液相色谱仪，按以上条件进行测定。结果见表1。表1  黄芩苷线性化范围实验（略）
       其回归方程为y=122.85+3.077 7x，r=0.999 6黄芩苷在0.298 6～1.493 μg之间呈一通过原点的直线。
       2.4  精密度实验精密吸取同一对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上条件进行测定。结果见表2。表2 精密度实验（略）
       结果表明：黄芩苷精密度良好，符合定量分析要求。
       2.5 据资料表明［5］处方中黄芩，桔梗，牛蒡子，甘草四味药物中的主要成分均为苷类化合物，且为其活性成分。因为苷类化合物在含水醇的溶解性较好，为了有效提取此类化合物，以保证药效，同时也为了减少药物服用量，故对以上几味药物采用不同浓度的乙醇来提取。
       2.6 正交实验设计与结果考虑加醇量、乙醇浓度、提取时间及提取次数，其因素水平表见表3。表3 黄芩、桔梗、牛蒡子、甘草乙醇提取因素水平（略）
       2.7  黄芩苷含量测定取乙醇提取液适量作为供试品溶液；参照《中国药典》2000年版Ⅰ部黄芩药材含量测定项下色谱条件，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水磷酸（47∶53∶0.2）为流动相；检测波长280 nm，照高效液相色谱法［4］测定，分别精密吸取对照品溶液10 μl和供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表4，方差分析见表5。表4  正交实验设计及结果实验（略）表5 方差分析方差来源 （略）                                      
　　2.8 样品测定精密称定3批一定量药样，照优化条件提取：加70%的乙醇10倍量提取3次,1 h/次，提取液作为供试品溶液按照2.7项下黄芩苷的含量测定方法测定，得黄芩苷相当于药材含量分别为10.522％，10.308％，10.617％，RSD=1.51％。
       　　3 水提工艺考察及结果
       3.1 工艺条件筛选据研究资料表明，处方中黄连主要含生物碱类化合物，以小檗碱含量最高，同时小檗碱也为其主要有效成分，小檗碱在热水中溶解度较好；方中石膏为矿物药，其主要成分为CaSO4・10H2O，根据传统中药理论，石膏以久煎入药，故把黄连，石膏采用水煎煮的方法提取，在煎煮过程中，采用正交实验法来筛选最佳工艺，其影响因素主要有：加水量、煎煮次数、煎煮时间等，因素水平见表6。表6  黄连、石膏共水煎煮因素水平（略）
                                     
　　3.2 盐酸小檗碱含量测定［4］精密量取各正交组取提取液适量，加盐酸甲醇（1∶100）稀释作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品加甲醇制成1 ml含0.5 mg的溶液作为对照品溶液；参照《中国药典》2000年版Ⅰ部黄连药材含量测定项下测定方法，分别吸取供试品溶液6 μl，对照品溶液2 μl和4 μl，交叉点于同一硅胶G板上，以苯醋酸乙酯异丙醇甲醇水（６∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开剂，另槽加入等体积浓氨试液，预平衡15 min，展开，取出，挥干，照薄层色谱法进行荧光扫描，激发波长λ=348 nm，测定供试品与对照品荧光强度的积分值，计算，即得。测定结果见表7，方差分析见表8。表7  正交实验设计及结果实验（略） 表8 方差分析方差来源 （略）  
       3.3 基于上述正交实验各影响因素没有显著性差异由直观分析可知煎煮时间和加水量影响因素较大，故拟以煎煮时间和加水量做两因素两水平正交实验，考察指标为小檗碱百分含量。因素水平见表9，正交实验结果见表10。表9  因素水平水平（略）表10 正交实验结果实验（略）
                         
　　3.4 样品测定精密称取3批一定量药样，照优化条件提取：加10倍量水，煎煮2次，2 h/次；提取液按照3.2项下盐酸小檗碱含量测定法进行测定，分别得盐酸小檗碱相当于药材含量为5.464%,5.378%，5.527%，RSD=1.37％。
       　　4 结果分析及讨论
       4.1 表5方差分析表明，因素A，B，C，D对实验结果的影响都非常显著。根据正交实验结果，选取显著因素的最好水平，得到醇提最佳工艺条件为，A2B3C2D3,即以10倍量70%的乙醇提取3次，1 h/次。3批验证试验结果表明，该工艺稳定可行。
       4.2 表8方差分析表明，因素A、B、C均不具有显著性，但由直观分析可知，煎煮时间和加水量对实验结果有较大影响，煎煮次数对实验结果影响较小，故以煎煮时间和加水量做两因素两水平正交实验对水提工艺继续进行考察，考察指标为小檗碱百分含量。由表10结果直观分析表明，因素A对实验结果的影响较因素B大，结合两次的正交实验的结果，确定最佳水提工艺为：10倍量水，煎煮2次，2 h/次。3批验证实验结果表明，该工艺稳定可行。
       　　参考文献：
       ［1］贺海平，梁宁生.002黄芩药理研究的新进展［J］.国外医学・中医中药分册，2000，22（1）：14.
       ［2］瞿佐发.黄芩的药理作用及临床应用［J］.时珍国医国药，2002，13（5）：316.
       ［3］耿东升，刘发.小檗碱药理作用研究进展［J］.人民军医药学专刊，1997，13（1）：24.
       ［4］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：248，附录ⅥD，ⅥB.
       ［5］郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用［M］.北京：学苑出版社，1998：3943.
       基金项目：河南省重大科技攻关项目(No.0423036200)
       作者简介：陈洪宝(1970)，男(汉族)，河南郑州人，现任河南仲景保健药业有限公司主管中药师，执业药师，学士学位，主要从事新药开发和科研管理工作.
       (1.河南仲景保健药业有限公司，河南 郑州450001；2.河南中医学院，河南 郑州450008)
       收稿日期：20050331；