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       【关键词】  中药
       摘要：目的优选苦参中氧化苦参碱的提取工艺。方法比较多种提取工艺。如水煎法、渗滤法、乙醇回流法，应用正交设计筛选苦参碱的提取工艺，采用高效液相色谱法测定该成分含量，作为评价指标。结果最佳工艺为渗滤法。最佳条件是：加10倍量65%乙醇浸泡24 h后渗滤，流速为5 ml/min，氧化苦参碱含量与提取率均较高。结论优选得到的工艺简便易行，稳定性好。
       关键词：苦参；氧化苦参碱；正交设计；提取工艺
       Study on Different Extraction Process of Oxymatrine in Radix Sophorae Flavescentis and Optimization
       TAN Guilian, QIN Bangcai
       (1.Department of Pharmacy, Capital University of Medical Sciences,Shunyi, Beijing 101300, China; 2.Danjiangkou Hospital of TCM, Danjiangkou, Hubei 442700, China )
       Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction process of oxymatrine in Radix Sophorae Flavescentis.MethodsSeveral extraction processes were used,such as decocting method,the refluxing method,leakaging method.The optimum extraction was investigated by the orthogonal design, oxymatrine was determined by HPLC.ResultsThe optimum extraction conditions were 10 fold of 65% ethanol,marinating 24 hours and the velocity of flow was 5ml/min.The content of oxymatrine and extraction and extraction rate were fairly high.ConclusionThis optimized method is simple,stable and efficient.
       Key words:Radix Sophorae Flavescentis; Oxymatrine; Orthogonal design;Extraction process
       中药苦参是豆科植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根，有清热燥湿，杀虫，利尿之功效。苦参在临床用于杀虫，治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。药理实验证明，苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。苦参中主要生物碱有：苦参碱、氧化苦参碱、槐定、槐果碱。氧化苦参碱有抗癌，抗衰老作用，为了充分利用药材资源，减少浪费，确保临床疗效，本文以氧化苦参碱为考察对象，对苦参的不同提取工艺进行比较，优选出氧化苦参碱的最佳提取工艺。
       　　1 仪器与试药
       岛津LC―3AD型泵；岛津SPD―6A型检测器；苦参饮片(购于同仁堂药店，为豆科植物苦参的干燥根)；氧化苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯；水为注射用水；其余试药均为分析纯。
       　2 方法及结果
       2.1 色谱条件色谱柱：TSKgel ODS80Ts(4.6 mm×15 cm,5μm);柱温：50℃；流动相：含0.042 mol/LSDS的1/15 mol/L磷酸与1/15 mol/L磷酸二氢钾(pH2.0)溶液；乙腈(740∶260)；流速：1.0 ml/min；检测波长：207 nm。其色谱见图1。
       2.2标准溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品2 mg于5 ml容量瓶中，分别用乙腈无水乙醇(8∶1)溶解并定容，混匀，即得标准溶液。
       2.3  样品溶液的制备精密称取苦参粉末(过40目筛)0.25 g，置于10 ml具塞试管中，精密加入氯仿10 ml，与氨水0.1 ml，密塞，超声波振荡提取，45 min过滤，精密吸取滤液7.5 ml，通过氧化铝柱，先用氯仿10 ml洗脱，再用氯仿甲醇(7∶3)10 ml洗脱，合并洗脱液，挥去溶剂，残渣用乙腈无水乙醇(8∶1)溶解并定容5.0 ml，即为供试品溶液。
       2.4 氧化苦参碱含量测定
       2.4.1  线性关系分别吸取上述的标准溶液2.0，4.0，6.0，8.0 μl进样，按上述色谱条件测定峰面积，以氧化苦参碱的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归线方程为Y=15 482X5 333， r=0.999 2,结果表明氧化生物碱在10.42～208.41 μg之间范围内呈良好的线性关系。
       2.4.2  精密度实验精密吸取同一供试品10次，进样测定，平均氧化苦参碱峰面积346.58，RSD为1.82%。
       2.4.3 回收率实验精密称取已知含量的浸提物1 g，分成5份，每份约0.2 g，精密称量，分别加入在2.2中制备的氧化苦参碱对照品溶液0.5 ml,按照供试品溶液的制备方法进行制备，测定氧化苦参碱的含量，平均回收率为98.71%，RSD为2.14%。
       2.5 氧化苦参碱提取工艺优选
       2.5.1 苦参提取水煎法：称取苦参粉末10 g，水煎2次，均加水100 ml/次，并煎煮1 h，并合并滤液，静置过滤，滤液浓缩至50 ml。
乙醇回流法：称取苦参粉末10 g，用100 ml 95%乙醇回流提取氧化苦参碱6 h，滤液回收乙醇并浓缩至50 ml。
       渗滤法：称取苦参粉末10 g，加100 ml 95%乙醇浸泡24 h后进行渗滤，渗滤流速为5 ml/min，渗滤液减压回收乙醇浓缩至50 ml。
       2.5.2 提取方法的比较取在2.3中制备的供试品溶液5～10 μl，按2.1条件测定氧化苦参碱含量，测得苦参中氧化苦参碱的含量为1.47%，分别对3种不同方法的浸提物进行含量测定，关于苦参中氧化苦参碱的含量进行比较，结果表明，渗滤法所得浸提物中，氧化苦参碱含量明显高于水煎法和乙醇回流法，故认为渗滤法为氧化苦参碱的最佳提取方法。表1 3种提取方法的结果比较（略）
       2.5.3 苦参渗滤提取最佳工艺确定正交设计表：根据氧化苦参碱的理化性质，考虑到渗滤过程中的浸泡时间，乙醇浓度，溶剂用量，流速等因素对提取的影响，每个因素选择三个水平，以L9(34)正交表进行实验研究，从而优选最佳提取工艺。表2 正交设计因素水平（略）
       实验方法及实验数据：准确称取苦参粉末10 g，分别根据正交设计因素水平表的实验条件进行试验，制备苦参提取液，浓缩转移至100 ml容量瓶中，用乙腈无水乙醇(8∶1)定容，混匀。精密取1 ml至50 ml容量瓶中，用乙腈无水乙醇(8∶1)定容，混匀。按2.1项下条件测定氧化苦参碱的含量，并计算，结果见正交设计表。
       结果分析：根据各因素的影响来看，其影响大小顺序是B>C>A>D，即乙醇浓度>溶剂用量>浸泡时间>流速。因此，可推倒出最佳工艺为A1B2C3D2。即加10倍量65%乙醇浸泡24 h渗滤，流速为5 ml/min。从方差分析可知因素B具有显著性影响。表3 正交设计及结果试管（略）
       　3 讨论
       以氧化苦参碱在提取物中的含量为考评指标，实验结果表明苦参优选的最佳提取工艺是加10倍量65%乙醇浸泡24 h后渗滤，流速为5 ml/min。用此工艺提取氧化苦参碱得率高。
       作者简介：谭桂莲(1965)，女(汉族)，北京人，现任首都医科大学药学系助理实验师，学士学位，主要从事实验教学工作.
       (1.首都医科大学，北京 顺义101300；2.湖北省丹江口市中医医院442700)
       收稿日期：20050310