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       【关键词】  高效液相色谱
        摘要：目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定绿原酸含量的方法，控制健脑补肾丸的质量。方法采用HPLC法，色谱柱：Prodigy ODS3 C18(250  nm×4.6  nm，5  μm)，流动相：乙腈0.4%磷酸溶液（13∶87），检测波长：327  nm。结果绿原酸在202.4~708.4 μg间有良好的线性关系（r = 0.998 9），回收率为99.06%，RSD=1.01%。结论 首次建立的高效液相色谱法测定健脑补肾丸中绿原酸含量的方法简便，快速准确，灵敏度高，适用于健脑补肾丸的质量控制。 
        关键词：高效液相色谱法；  健脑补肾丸；  绿原酸
        Determination of Chlorogenic Acid in Jiannao Bushen Pills by HPLC
        JIN Weirong1，GAO Guojing1， TENG Jianbei1
   
    （1. Liaocheng Institute for the Control of Pharmaceutical in Shandong Province，Liaocheng 252000，China; 2. Pharmacy  College of Guangxi Traditional Chinese Medical College，Nanning  530001，China）
        Abstract：ObjectiveThe HPLC method was established for the chlorogenic acid quantitative in order to control the quality of Jiannao Bushen Wan.MethodsProdigy ODS3 C18(250  nm×4.6  nm，5μm); column temperature:23℃; mobile phase: a mixture of acetonitrilel and 0.1% phosphoric acid (13∶87); flow rate:1.0  ml・min1; detection wavelength:327  nm; aliquot injected into the HPLC system:10 μl.ResultsThe linear range of the chlorogenic acid was 202.4~708.4 μg and  the recovery of the assay was 99.06% with the RSD=1.01%.ConclusionThis method was found to be simple，rapid，sensitive and accurate for determination of chlorogenic acid in Jiannao Bushen Wan. At the same time, the method can be used to control the quality of Jiannao Bushen Wan.
        Key words：HPLC;   Jiannao Bushen Pills;   Chlorogenic acid
        健脑补肾丸由人参、鹿茸、肉桂、金银花、白芍等20余味中药组成的丸剂，系《卫生部药品标准・中药成方制剂》第16册标准收载品种，具有健脑补肾、益气健脾之功效。本药品组方复杂，加之现行质量标准过于简单，其仅有的显微鉴别，远不能满足其内在质量控制的要求，通过测定其组方中金银花中绿原酸的含量，可有效地控制本品的内在质量。通过文献检索，目前尚未发现有关的研究报道。本文在多次实验的基础上，首次建立了用高效液相色谱法测定健脑补肾丸中绿原酸含量的方法。
           1  仪器与材料
        1.1  仪器美国TSP公司Spectra series P200高效液相色谱仪、Spectra SERIES UV100紫外―可见检测器；KT―300V型超声波仪（山东济宁中冠超声波有限公司）。
        1.2   材料健脑补肾丸（山东华威药业有限公司），绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所 )；甲醇（色谱纯）；0.45μm微孔滤膜，高纯水；磷酸（分析纯）；其它试剂均为分析纯。
           2  方法
        2.1  供试品溶液的制备根据绿原酸的性质及金银花含量测定方法［1］，进行供试品溶液的制备：取健脑补肾丸适量，研细，取2  g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25  ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5  ml，置25  ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
        2.2  对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品10.12  mg，置250  ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
        2.3  色谱条件色谱柱 Prodigy ODS3 C18(250  nm×4.6  nm，5 μm)，柱温 23℃；流动相为乙腈0.4%磷酸溶液（13∶87）；流速 1.0 ml・min1；检测波长 327  nm；进样量为10 μl。
           3  结果
        3.1   标准曲线的制备精密吸取绿原酸对照品溶液（40.48 μg・ml1）5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5 μl，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，结果见图1~3。其回归方程为：Y=-21 349.78+3 215.17X，r =0.998 9。
        图1  绿原酸对照品图谱
        图2  健脑补肾丸样品图谱
        图3  健脑补肾丸阴性对照（缺金银花）图谱
        表1  绿原酸线性范围进样量(略)
        3.2  稳定性实验精密吸取绿原酸对照品溶液（40.48 μg・ml1）10 μl，注入液相色谱仪中，每隔30  min测定1次，RSD=0.83%。结果见表2。
        表2  稳定性实验时间（路）
           
    3.3  精密度实验精密吸取绿原酸对照品溶液（40.48 μg・ml1）10μl，连续进样5次，按上述相同条件测定，峰面积积分值为：127 109.5,129 8972.2，1 289 625.4，1 300 659.1，1 279 207.3，RSD=0.87%。
        3.4  重复性实验按上述相同条件对同一批健脑补肾丸（山东华威药业有限公司，20040813）样品测定5次，结果绿原酸含量（mg/g）分别为1.35，1.39，1.33，1.36，1.35，RSD=1.62%。
        3.5  加样回收率实验取本品粉末约2 g，精密称定，加入一定量的绿原酸对照品，按“2.1”项下方法提取，制备供试品溶液，按上述条件进行测定。结果见表3。
        表3  加样回收率实验样品（略）
            
    3.6  样品测定取3批健脑补肾丸（山东华威药业有限公司20040813，20040316，20041030），按上述条件测定，结果见表5。故可暂定本品每克含金银花以绿原酸（chlorogenic acid）计，不得少于1.30  mg。
        表5   样品测定结果批（略）
           4  讨论
        健脑补肾丸是由人参、金银花等12余味中药组成，组方复杂，质量难以控制，通过测定其组方中的金银花中绿原酸含量，可进一步完善其质量标准，有利于加强质量控制。
           参考文献：
        ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：177.
        (1.山东省聊城市药品检验所   252000；  2.广西中医学院药学院，广西 南宁  530001）