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       【关键词】  高效液相色谱法
        摘要：目的建立降脂减肥颗粒中葛根素的含量测定方法。方法采用Shim-pack（岛津）ODS C柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇0.1%磷酸（25.3∶74.7），流速为0.9 mg/ml，检测波长为250 nm。结果葛根素在0.114 0～0.570 0范围内线性关系良好，r=0.999 6，平均回收率为98.7%，RSD为0.67%。结论此测定方法准确，重现性好，可作为制剂的质量控制方法。
        关键词：降脂减肥颗粒；  葛根素；  高效液相色谱法
        Determination of Puerarin in Jiangzhijianfei Granule by HPLC
        LIN Shaohua1, HE Yufang2, NAN Minlun2, WANG Tiezhu2， ZHAO Quancheng2
        (1.Base Construction Office of Modern Traditional Chinese Drug & Bio-pharmacy of Jilin Province, Changchun 130041,China; 2.Jilin Natural Medicine and Technology Co.，Ltd., Changchun 130021,China)
        Abstract:ObjectiveTo establish the HPLC method for the determination of puerarin in Jiangzhijianfei granule.MethodsThe chromatographic conditions included:The column is Shim-pack ODS C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm),the mobile phase is methol- water H3PO4 ,the detection wavelength is 250 nm and the column temperature is room temperature.ResultsThe linear range of puerarin was 0.114 0～0.570 0 μg, r=0.999 6.The average recovery of puerarin was 98.7% with RSD 0.67%. ConclusionThe mothod is accurate and can be used as a determination of puerarin in Jiangzhijianfei granule.
        Key words:Jiangzhijianfei granule；  Puerarin；  HPLC
        降脂减肥颗粒是在原部颁标准17册收载的药物降脂减肥片基础上开发而成的中药、天然药物9类新药，由何首乌、三七、葛根、菟丝子、枸杞子、松花粉 、丹参、大黄、泽泻、茵陈等中药组成。该药具有滋补肝肾，养益精血，扶正固本，通络定痛，健脾豁痰，明目生津，润肠通便等作用，用于各型高脂血症，心脑血管硬化，单纯性肥胖，习惯性便秘，痔疮出血等症。其中葛根系方中主药，为常用中药，系豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根。在原降脂减肥片标准中没有收载方中药味的含量测定，现有的文献中也没有对方中葛根素进行含量测定的研究。本实验利用HPLC法，在有关文献的基础上［1，2］，对降脂减肥颗粒中葛根素的含量进行了测定，并对该方法进行考察，结果表明该方法可以控制复方制剂的质量。
           1  仪器与试药
        高效液相色谱仪：岛津LC―10AT高效液相色谱仪，日本岛津公司生产， SPD―10A紫外检测器，手动进样；KQ―250型超声波处理器（功率 250W、频率 20kHz）；电子天平（德国赛多利斯公司BP211D）。葛根素对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号为0752－200108；降脂减肥颗粒为通化鸿宝药业有限公司提供。甲醇为色谱纯(Fisher Chemicals，批号为040126)，水为超纯水，其它试剂皆为分析纯。
           2  实验方法
        2.1  对照品溶液的制备　精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每毫升含葛根素0.03 mg的溶液，即得。
        2.2  供试品溶液的制备取本品20 g，研细，取1 g，精密称定，加入30%乙醇30 ml，置具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，以30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
        2.3  含量测定色谱条件与系统适应性实验 Shimpack（岛津） ODS C18柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm），进样量：10 μl；流动相为甲醇0.1%磷酸（25.3∶74.7），流速为0.9 mg/ml，检测波长为250 nm，柱温为室温。在上述色谱条件下，对降脂减肥颗粒进行测定，测定后按外标法计算。对照品、样品、阴性对照及溶剂色谱图见图1～4。结果表明，葛根素与杂质峰没有重叠，分离效果好（分离度为3.15），理论塔板数以芍药苷计为5 630（n=5），RSD=0.9%。
        图1  葛根素对照品图谱
        图2  降脂减肥颗粒样品图谱
        图3  阴性对照图谱
        图4  溶剂图谱
           3  实验结果
        3.1  线性关系考察精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每毫升含葛根素0.028 5 mg的溶液。精密吸取此溶液4，8，12，16，20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值对进样量进行回归，得回归方程为：Y=2 490 376.5X+19 847.9，r=0.999 6。葛根素在0.114 0～0.570 0 μg内线性关系良好。
        3.2  精密度实验按2.2方法制备供试品溶液，连续进行5次测定，葛根素的RSD为0.53%，表明其精密度良好。
        3.3  稳定性实验取同一供试品溶液，室温放置，在0，2，4，6，8 h分别进样，测定峰面积，其葛根素的RSD为0.24%，表明供试品溶液中葛根素在8 h内稳定。
        3.4  重现性实验对同一批样品分别称取5份，按照2.2方法操作，按2.3色谱条件测定，测定其葛根素的RSD为1.05%，表明重现性良好。
        3.5  回收率实验精密称取已知葛根素含量的样品，分别精密加入葛根素对照品，按2.2方法制备待测液，按2.3色谱条件测定。结果见表1。
        表1  葛根素回收率样品称（略）
        3.6  样品的含量测定按2.2方法制备样品，按2.3色谱条件对3批样品进行含量测定。结果见表2。
        表2  3批样品含量测定序号（略）
           4  讨论
        4.1  处方中含量测定药味选择何首乌为方中的主要药味，其含有的蒽醌类化合物为其降血脂的主要有效成分，此类成分主要有大黄素，大黄酸等，而处方中大黄亦含有大黄素，大黄酸，若以大黄素或大黄酸含量作为本品质量控制的指标，专属性不强，即难以确定是哪味药材含有的有效成分，故本品质量标准中，未对大黄素或大黄酸含量进行测定。葛根亦为方中的主要药味，具有解肌、退热、生津等多种功效，主要含有黄酮类化合物，其中葛根素能使动脉内皮细胞羟脯氨酸代谢缓慢，使内壁的胶原纤维含量相对减少，有利于防止血小板粘附、聚集及血栓形成，故葛根素是葛根发挥药理作用的主要有效成分。在本品质量标准中，采用高效液相色谱法测定制剂中葛根素的含量，并以此作为质量控制的指标之一。实验结果表明，此法操作简便，重现性好。
        4.2  供试品溶液提取方法的考察根据葛根素的溶解性及参考《中国药典》葛根含量测定项下方法，选用30%乙醇为溶媒，制得供试品溶液。据文献报道制备供试品溶液的方法有回流提取和超声提取，本实验选择了超声提取的方法，简便可行。
           参考文献：
        ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：273.
        ［2］  杨翠微，张俊玮.HPLC测定参苏丸中葛根素的含量［J］.湖南中医药导报，2000，6(16):36.
        (1.吉林省现代中药及生物制药基地，吉林 长春  130041；
     2.吉林天药科技有限公司，吉林 长春  130021)