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       【关键词】  天山
        摘要：目的从天山大黄中提取多糖，并测定其含量。方法运用超声技术用水提醇沉法提取天山大黄多糖，用酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果多糖含量8.756%，平均回收率为100.6%，RSD=0.66%（n=5）。结论首次运用超声技术从天山大黄中提取出多糖，反应速度加快，收率提高。
        关键词：  超声技术；  天山大黄；  多糖；  提取 ；  含量测定
        Extraction and Content Determination of Polysaccharide from Rheum wittrochii L. by Ultrasonic Technology
        ZHAO Wenbin, CHENG Yuhuai
        (Pharmacy College of Shihezi University，Shihezi  832002,China)
        Abstract：ObjectivePolysaccharides was  extracted  from  Rheum wittrochii L. by ultrasonic method, and the content was determined. MethodsPolysaccharides was extracted by Ultrasonic method, and the content was determined by spectrophotometer.ResultsThe polysaccharides content of  Rheum wittrochii L. is 8.756%，recovery rate is 100.6%。ConclusionIt is the first time to extract polysaccharides from Rheum wittrochii L.by ultrasonic method. Ultrasonic extraction was a better method for polysaccharides of Rheum wittrochii L.
        Key words：Ultrasonic technology；  Rheum wittrochii L；  Polysaccharide；  Extraction；  Content determination
        天山大黄（Rheum wittrochii L.），主要生长在天山山脉，为新疆特有大黄品种。维吾尔语译音“热万”。维吾尔族民间用于治疗血小板减少症、闭经、痢疾、通淋不利等症［1］。药理研究表明，天山大黄多糖具有抗病毒、抗肿瘤、抗乙肝等作用。为了给该药材的进一步研究和合理利用提供基础资料，本研究运用超声技术从天山大黄中提取多糖［2］，并测定其含量［3］。现将结果报道如下。
           1  仪器、试剂及样品
        1.1  仪器岛津UV2401PC紫外可见分光光度计， DL360超声波仪（35kHz，浙江象山县石浦海天电子仪器厂），TG328B分析天平， DZKWC电子恒温水浴（北京光明医疗仪器厂）， R201旋转蒸发器（上海申胜生物技术有限公司），索氏提取器 。
        1.2  材料与试剂(+)葡萄糖（AR）105℃干燥恒重、苯酚（AR）、硫酸（AR）均为分析纯。天山大黄：采自天山北坡海拔2 000米左右的新疆沙湾县林场内，经石河子大学生物学院何敬琨教授鉴定为Rheum wittrochii  L.。秋后采挖，洗净，切片晾干，破碎后备用。
           2  方法与结果
        2.1  标准曲线的绘制
        2.1.1  标准葡萄糖溶液的配制精确称取干燥恒重的葡萄糖25.2 mg，加适量水溶解，转移至250 ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8μg・ml1标准葡萄糖溶液备用。
        2.1.2  5%苯酚试剂的配制取苯酚100 g，加铝片0.1 g和NaHCO30.05 g，蒸馏，收集182℃馏份，称取7.5 g，加水150 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
        2.1.3  标准曲线绘制精确量取葡萄糖标准溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 ml置干燥试管中，分别加水使成1.0 ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6 ml，摇匀，然后加浓H2SO47.0 ml，充分摇匀，室温放置25 min，同时做一空白，在510 nm处有最大吸收，绘制标准曲线，回归方程：A=0.056 54C+5.47×104，r=0.999 8。在10～70 μg・ml-1的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。
        2.2  多糖的提取及精制称取天山大黄样粉100 g，置500 ml烧瓶中，用石油醚(60～90 ℃)水浴回流脱脂2次，2 h/次。残渣挥干溶剂后，置锥形瓶中，分别加水至50，100，150 ml，于35kHz超声提取30，40，50  min后过滤，减压浓缩至25  ml，加入0.1%活性炭，脱色，过滤，滤液加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，得天山大黄多糖，60℃ 烘干备用。以100 ml，40min的多糖量最多。
        2.3  换算因素测定精确称取60℃干燥恒重的天山大黄多糖20 mg，水溶解后定容到100   ml容量瓶中，摇匀，做为多糖储备液。精确量取此液0.2 ml，加水至1 ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按公式f = W/CD计算换算因素，得f=3.73。式中，W为多糖重量(μg)，C为多糖液中葡萄糖的重量（μg），D为多糖的稀释倍数。
        2.4  样品测定分别精确称取天山大黄粉末0.20 g，用80%乙醇浸泡过夜，与多糖的提取及精制项相同的方法提取，定容于250 ml容量瓶为样品液。精确吸取样品液1 ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按公式：多糖含量%=CDf/W ×100计算含量，分别为8.695%，8.721%，8.747%，8.800%，8.817%，平均含量为8.756%，S=0.000 51,RSD=0.59%(n=5)。
        2.5  方法学考察
        2.5.1  回收率测定精确称取天山大黄粉末0.15 g，精密加入多糖7 mg，与多糖的提取及精制项相同的方法提取，于250 ml容量瓶中定容。精确移取1 ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按样品测定同样的方法进行测定。计算多糖含量，分别为99.90%，100.0%，100.5%，101.1%，101.4%，平均回收率为100.6%，S=0.006 6，RSD=0.66%（n=5）。
        2.5.2  精密度精密吸取供试品溶液1.0 ml共５份，分别置10 ml容量瓶中，按标准曲线的制定项下相同的方法显色测定(每隔20 min测1次，连续5次)。通过标准曲线，计算出样品多糖的含量。分别为8.705%，8.732%，8.740%，8.793%，8.819%，平均值为8.758％，S=0.000 47，RSD=0.54%(n=5)，精密度良好。
        2.5.3  重复性称取天山大黄样品5份，分别与多糖的提取及精制项相同的方法提取，依法测定，其含量结果分别为8.711%，8.729%，8.737%，8.790%，8.808%,平均值为8.755％，S=0.000 42，RSD=0.48%(n=5)。
        2.5.4  稳定性实验用硫酸苯酚法测定同一样品液在不同时间吸收度，吸收度值至少在48 h内不变。
        2.6  常规法提取  取天山大黄样粉5份，每份约0.2 g，精密称定，置索氏提取器中，用石油醚(60～90 ℃)水浴回流脱脂2次，2 h/次。残渣挥干溶剂后，置锥形瓶中，加85%的乙醇50 ml，浸泡12 h，恒温80℃水浴加热回流分别提取4，6，8，10，12 h。过滤，减压浓缩至25 ml，加入0.1%活性炭，脱色，过滤，滤液加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，得天山大黄多糖，于250 ml容量瓶中定容。精确移取1 ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按样品测定同样的方法进行测定。多糖含量分别为6.875%，6.913%，7.142%，6.957%，6.731%，平均值为6.924%。
           3  讨论
        天山大黄多糖具有多种生物活性，能激活免疫细胞，提高机体的免疫功能，对正常细胞没有毒副作用，在抗肿瘤、抗病毒等药物研究中，多糖类药物的研制已成为当今世界新药的发展方向之一。多糖的研究发展很快，但研究层次及技术水平都还较低。超声技术应用于植物细胞破壁，大大地加快了反应速度，有效地提高了收率［3］。我们首次运用超声技术从天山大黄中提取出多糖，并对其含量进行了测定，反应时间大为缩短。超声法所用仪器简单，操作方便，且自动化程度高，便于大规模工业生产。
           参考文献：
        ［1］  Liu Y M .The Record of Herbal Medicine of WEIWUER Nation ［M］.Urumuqi:Xinjiang  Science and Technology`s Publishing House,1999:31.
        ［2］  Editor Committee of Chinese Herbal Medicine of Xinjiang.The Chinese Herbal Medicine of Xinjiang［M］.Urumuqi:Xinjiang People`s Pubishing House,1976.
        ［3］  Zhao B,Wang Y C,Ou Y F,et al.Ultrasonic technique applied in extraction of plant［J］. Chin Tradit Herb Drug,1999,3(9):Siii.
        (石河子大学药学院， 新疆 石河子  832002)