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       【关键词】  创灼膏
        摘要：目的建立创灼膏的质量控制方法。方法采用薄层色谱法（TLC）对制剂中冰片和防己进行定性鉴别；用高效液相色谱法(HPLC)测定盐酸小檗碱的含量。结果冰片、防己供试品与对照品色谱相应位置上皆有相同颜色的斑点，阴性对照品无干扰；盐酸小檗碱进样量在0.021~0.33 μg范围内线性关系良好，Y=4 958.4 X-15.594，r=0.999 8，平均加样回收率97.8%，RSD为2.34%。结论该方法简便、快速准确，可作为该制剂质量控制方法。
        关键词：薄层色谱法；  高效液相色谱法；  盐酸小檗碱；  冰片；  防己
        Study on Quality Standards of Chuangzhuo Plaster
        ZHANG Shanyu， JIANG Yanling， KANG Dongzhou
        (Yanbian University College of Pharmacy，Yanji 133000，Jilin，China)
        Abstract:ObjectiveTo establish quality control method for Chuangzhuo Plaster.MethodsBomeolum Syntheticum and Radix Stephaniae Tetrandrae was identified by TLC，and the content of berberine hydrochloric was determined by HPLC.ResultsThe determination of berberine hydrochloric showed a good linear relationship at a range of 0.021～0.33，r=0.999 8，the average recoveries of berberine hydrochloric was 97.8％，RSD was 2.34％.ConclusionThe method is simple，fast and accurate，it can be used to control the quality of Chuangzhuo Plaster.
        Key words:TLC；  HPLC；  Berberine Hydrochloric；  Bomeolum Syntheticum；  Radix Stephaniae Tetrandrae
        创灼膏是由炉甘石(煅)、白及、冰片、甘石膏粉(由苍术、防己、黄柏等组成)等制成的纯中药制剂。具有排脓、拔毒、去腐、生皮、长肉等作用，用于烧伤、烫伤、挫裂创口、老烂脚、褥疮、手术后创口感染、冻疮溃烂、慢性湿疹及常见疮疖。创灼膏原标准(部颁标准：WS3B1127)中无鉴别和含量测定项。为提高产品的质量可控性，本研究对其主要药味冰片和防己进行了薄层鉴别，同时采用高效液相色谱法测定了黄柏中盐酸小檗碱的含量，现报道如下。
           1  仪器与试药
        美国惠普HPll00高效液相色谱仪，HPll00色谱工作站；硅胶G板(青岛海洋化工厂生产)；盐酸小檗碱对照品(批号110713-200208)、冰片和防己对照药材等均由中国药品生物制品检定所提供；创灼膏：按《中华人民共和国卫生部药品标准・中成药制剂》中收载的制备方法自制(批号：040625，040628，040702)乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。
           2  方法与结果
        2.1  鉴别
        2.1.1  防己的薄层鉴别［1］取5 g样品，加l％盐酸溶液100 ml，80～90℃温浸l h  时，放冷，滤过，滤液滴加5％氢氧化钠调节pH值至9~10，摇匀，用氯仿提取3次，80 ml/次。合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；另取防己对照药材0.5g，加1％盐酸甲醇溶液20 ml，超声提取20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液；再按处方比例取方中除防己以外的药材，按工艺制备缺防己的阴性样品，同样品处理方法处理得阴性对照品溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿丙酮甲醇浓氨试液(9∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷改良碘化铋钾试液显色。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点。见图1。
        2.1.2  冰片的薄层鉴别［2，3］取本品2 g，加硅藻土1 g，将其分散均匀，置圆底烧瓶中，加水100 ml，连接挥发油提取器，于提取器中加水至水溢出，加甲苯l ml，加热提取l h，放冷，分取甲苯溶液，作为供试品溶液；另取冰片对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液；再按处方比例取方中除冰片以外的药材，按工艺制备缺冰片的阴性样品，同样品处理方法处理得阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层  板上，以苯氯仿醋酸乙酯(10∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5％茴香醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点见图1。
        图1  薄层色谱图
        2.2  含量测定
        2.2.1  色谱条件色谱柱：依利特Sinochrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相：水溶液(取冰醋酸3 ml，三乙胺8 ml,加水600 ml混匀)乙腈(25∶75)；流速：1 ml/min；检测波长：345 nm；柱温：室温。
        2.2.2  线性关系考察准确配制含盐酸小檗碱1.03，2.06，4.125，8.25，16.50 μg/ml的甲醇溶液，在2.2.1项的色谱条件下进行测定，进样量20 μl，以峰面积Y对照品进样量X(μg)作线性回归方程。结果盐酸小檗碱的回归方程为：Y=4 958.4X-15.594，表明盐酸小檗碱在0.021～0.33μg范围内呈良好的线性关系。
        2.2.3  供试品溶液的制备取样品约5 g，精密称定，加1％盐酸溶液50 ml，80～90℃温浸2次，1 h/次，放冷，合并2次提取液，滤过，滤液加乙醚萃取  5次，50 ml/次，弃去乙醚层，水层用5%NaOH溶液调pH至10，加氯仿萃取3次，100 ml/次。合并氯仿液，水浴蒸干溶剂，残渣加甲醇使溶解，并定容至5 ml,0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；再按处方比例取方中除黄柏以外的药材，按工艺制备缺黄柏的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。
        2.2.4  对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成8.25 μg/ml的溶液，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为对照品溶液。
        2.2.5  专属性实验分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，图谱见图2。结果表示，阴性对照液液相色谱图中，在与对照品溶液色谱图相应的保留时间处无吸收，且供试品色谱中盐酸小檗碱吸收峰分离效果较好，所以认为其它药材成分对测定结果几乎无影响，该方法可以用来测定盐酸小檗碱的含量。
        2.2.6  精密度实验取8.25 μg/ml盐酸小檗碱对照品溶液，连续进样5次，依法测定峰面积积分值，结果RSD为0.15%。
        图2  高效液相色谱图
        2.2.7  稳定性实验取同一供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8，10 h后，精密吸取20 μl，依法测定，RSD=1.20%。2.2.8  重复性实验取同一批号的样品，按2.2.3项下方法制备5份供试品溶液，依法测定，计算盐酸小檗碱的含量，5份样品中盐酸小檗碱含量的平均值为3.31 μg/g，RSD=2.58%。
        2.2.9  加样回收率精密称取已知含量的样品共6份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品适量，按2.2.3项下方法制备6份供试品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。
        表1  加样回收率序号  （略） 
        2.2.10  样品测定取3批样品，分别按2.2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算样品含量，结果见表2。
        表2  样品中含量测定样品批号  （略）
           3  讨论
        3.1  据文献［4，5］，高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的检测波长有260，270，345 nm等。取盐酸小檗碱对照品甲醇溶液，照紫外分光光度法，在200～500 nm进行扫描，结果在345 nm波长处有最大吸收，故选择345 nm为其检测波长。
        3.2  制剂中含有大量油脂性基质凡士林、液状石蜡等，必须经过处理后才能进行测定，所以采用挥发油提取方法提取冰片，采用酸水中乙醚脱脂，水液调碱性后用氯仿萃取生物碱的方法，提取了防己和黄柏中的生物碱成分。曾试用酸水中乙醚脱脂，蒸干酸溶液，残渣用甲醇溶解的方法和酸水中乙醚脱脂，水溶液用NaOH溶液调pH9～10，氯仿提取的方法进行了比较，结果后者对生物碱成分的提取较充分。
        3.3  创灼膏的主药多为矿物药，较难进行专属性较高的定量分析，冰片为方中主药之一，防己和黄柏为甘石膏粉中的主要药味，而盐酸小檗碱则为黄柏的主药有效成分。因此，选用薄层色谱法对冰片和防己进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定黄柏中盐酸小檗碱的含量。实验结果表明，鉴别方法专属性好，含量测定方法简便、快速、准确，可作为该制剂的质量控制方法。
           参考文献：
       ［1］  万子扬,欧阳爱军.五黄膏质量标准研究［J］.江西中医学院学报,2004,16(1):51.
［2］  马  开,秦文杰,戴雪平.骨质增生一贴灵的质量标准研究［J］.中草药,2004,35(7):760.
［3］  林桂涛,马承严,赵峻岭.麝香痛痹巴布膏质量标准研究所［J］.中成药,2004,26(2):100.
［4］  韦  宁,覃  净.HPLC测定痔疮灵酊中盐酸小檗碱的含量［J］.中成药,2004,26(9):附9.
［5］  刘  杰,魏玉明,张文杰，等.HPLC测定半夏泻心汤中盐酸小檗碱的含量［J］.辽宁中医杂志,2004,5(31):417.
        (延边大学药学院，吉林 延吉  133000)