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       【关键词】  注射用复方荭草冻干粉针剂；,,家兔；,,缺血再灌注
       摘要：目的观察注射用复方荭草冻干粉针剂( FFHC )对离体家兔心脏缺血再灌注损伤的作用。方法采用离体兔心脏Langendorff灌流，使心脏停灌45min后复灌，模拟缺血再灌注损伤。以冠脉灌注量、灌注液LDH与CK、以及病理组织学检查为检测指标。结果FFHC高、中剂量组对心脏缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，能提高缺血再灌注心脏的冠脉灌注量，抑制缺血再灌注损伤心肌CK和LDH外漏，拮抗缺血再灌注所造成的心肌的组织学损伤。结论FFHC对心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。
       关键词：注射用复方荭草冻干粉针剂；  家兔；  缺血再灌注
       Protective Effects of FuFangHongCao Freeze-dried Powder Injection on Rabbit Heart IschemiaReperfusion Injury in vitro
       TAO Ling， SHEN Xiangchun，  WANG Yonglin， FANG Taihui
       (Department of Pharmaceutic, Guiyang Medical College, Guiyang, 550004,China; Department of Pharmacology,Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of FuFangHongCao Freeze-dried Powder Injection (FFHC) on rabbit heart ischemia-reperfusion injury in vitro. MethodsTo simulate the ischemia-reperfusion model by blocking perfusion for 45 min, and then reperfusion on rabbit heart with Langendorff perfusion installation in vitro. The flux liquid of coronary artery, LDH and CK activities of perfusion liquid, and pathological histology were assayed.ResultsGroups of high and medium dose of FFHC significantly enhanced the flux liquid of coronary artery of ischemia, inhibited the CK and LDH activities of perfusion liquid, and improved the pathological histology of ischemia-reperfusion.ConclusionFFHC can protect the heart injury induced by ischemia-reperfusion.
       Key words：FuFangHongCao freezedried Powder Injection;  Rabbit;  Cardiac ischemiareperfusion
   
　　注射用复方荭草冻干粉针剂(FuFangHongCao Freeze-dried Power Injection，FFHC)系贵阳医学院药剂学教研室根据传统苗族用药理论，结合现代制药技术及活性分析的技术与方法，研制出以贵州地产药材荭草为主药的治疗胸痹心痛的中药新药。前期的研究结果证实，其具有改善冠脉循环、降低心肌耗氧量、减轻实验性心肌缺血损伤，提示其可能具有保护心肌拮抗缺血-再灌注损伤的作用。本研究采用阻断离体家兔心脏冠脉血流45 min后复灌，模拟缺血再灌注损伤模型，从心肌酶的漏出、冠脉流量及心肌病理组织学检查等方面观察复方荭草冻干粉针剂的对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。
       　　1  材料
       1.1  药品及试剂注射用复方荭草冻干粉针剂 ( FFHC )为棕黄色粉末，100 mg(9 g生药)/支，由贵阳医学院药剂教研室研制，试验前用0.9%的氯化钠注射液配制成所需浓度。复方丹参注射液，规格4 g(生药)/2 ml/支，上海第一生化药业公司上海第一制药厂生产。乳酸脱氢酶(LDHL)试剂盒，肌酸激酶(CK)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司。
       1.2  仪器 FA2104上皿电子天平，上海天平仪器厂；Vitalab 200型全自动生化分析仪，荷兰vital scientific公司；BT01100型恒流泵，保定兰格恒流泵有限公司；二道生理记录仪，成都仪器厂。
       1.3  动物青紫兰家兔，雌雄各半，体重2.0~2.4 kg，均由南京中医药大学动物中心提供，动物合格证号：SYXK(苏)20020053。
       1.4  统计方法所有资料采用studentt检验；P<0.05为差异具有显著性，P<0.01差异具有极显著性。变化率%=（X给药后X给药前）/X给药前×100%X给药后为给药后观测值，X给药前为给药前观测值。
       　　2  方法与结果
       2.1  方法［1,2］ 家兔，体重2.0~2.4 kg，随机分为5组，每组8只，即：模型组、阳性药物组(复方丹参注射液， 3.6(生药量)/kg，下同)、FFHCⅠ( 2.2 g/kg)，Ⅱ(4.4 g/kg)，Ⅲ(8.8 g/kg) 3个剂量组。动物耳缘静脉注射肝素，15 min后击毙处死，开胸，将心脏迅速取出，移至贮有冷Locke灌流液的培养皿中，尽量洗出心脏血液，修剪后，在液面下迅速把主动脉接于灌流的套管上，并以线结扎固定。立即以通入95%的O2和5%CO2的Locks液进行灌流。灌流瓶高距心脏50~60 cm，灌流液温度保持（38.0±0.5）℃。三根电极分别插于左右心耳和心尖部，连于二道生理记录仪，持续心电监测。心脏复跳及ECG显示正常后，稳定15 min，再进行实验，该期间出现心律失常者弃去。造模采用停灌拟缺血再复灌损伤：关闭主动脉套管，使心脏停灌而致心肌缺血，45 min后松开套夹，恢复自然灌流。药物加入到灌流液中，于复灌开始5 min内灌完。
       2.2  冠脉灌注量的测定在心脏下用漏斗和量筒收集流出液，记录流出液量，即为冠脉流量。停灌前，连续3次测量每分钟灌流液的流出量，以其平均值作为给药前的正常灌注量。复灌后，于5，10，15，30，45，60 min时记录冠脉灌注量。
       2.3  灌出液生化测定生化仪测定灌出液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活力。
       2.4  组织形态学检查 实验结束后，取心脏，于10%福尔马林溶液中固定，常规取材、染色、切片，在光学显微镜下作病理组织学检查。
       　　3  结果
       3.1  FFHC对离体兔心缺血再灌注冠脉灌注量的影响缺血再灌注后冠脉灌注量在15 min时显著下降，给予FFHC后，FFHC低剂量组在45 min 和中、高剂量组在15 min后的冠脉灌注量明显高于模型组(P<0.05)，其变化率与模型组比较差别显著 (P<0.05，P<0.01)，表明FFHC能显著对抗缺血损伤所引起的冠脉灌注量的下降，且随着剂量的增高作用增强，呈较好的量效关系。结果见表1。
       3.2  FFHC对离体兔心缺血再灌注心肌灌流液中LDH的影响  给予FFHC后低、高剂量组于30 min、中剂量组于45 min后灌出液中LDH活力显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)，中、小剂量组45 min后、高剂量组30 min后灌出液中LDH活力的变化率均明显小于模型组(P<0.05或P<0.01)，表明FFHC可对抗缺血再灌注心肌中的LDH的外漏。结果见表2。
       表1  对离体兔心缺血再灌注冠脉流量的影响（略）
       与模型组组比较，＊P＜0.05, ＊＊P＜0.01；n=6
       表2  对离体兔心缺血再灌注心肌灌出液中LDH的影响（略）
       与模型组比较，＊P＜0.05, ＊＊P＜0.01；n=6
       3.3  FFHC对离体兔心缺血再灌注心肌灌出液中CK的影响 给予FFHC后，中、低剂量组心脏灌出液中CK活力于再灌注45 min后、高剂量组心脏灌出液中CK活力于再灌注30 min后均显著低于模型组(P<0.05)，且高、中剂量组15 min后CK的变化率与模型组相比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)，表明FFHC对缺血再灌注所引起的心肌CK外漏具有拮抗作用，且随着剂量的增高作用增强，呈一定的量效关系。结果见表3。
       3.4  FFHC对离体兔心缺血再灌注实 验心肌病理变化的影响  实验结果提示，缺血再灌注后心肌细胞损伤明显，与正常组比较差异显著(P<0.01)，给予FFHC后心脏形态学与模型组比较有明显改善，细胞坏死、间质水肿及炎细胞浸润程度均显著减轻(P<0.05或P<0.01)。 FFHC中、高剂量组心脏形态学与模型组比较有明显改善(P<0.05或P<0.01)。结果见表4。
       表3  FFHC对离体兔心缺血再灌注心肌灌出液中CK的影响（略）
       与模型组组比较，＊P＜0.05, ＊＊P＜0.01；n=6
       表4  对离体兔心缺血再灌注实验心肌病理变化的影响（略）
       与模型组组比较，＊P＜0.05, ＊＊P＜0.01；-,表示阴性,+表示阳性记分,+越多提示病变越严重；n=6
       　　4  讨论
       再灌注损伤的机制复杂，涉及自由基损伤、细胞内钙超载、血管内皮细胞激活、中性粒细胞介导的损伤和多种细胞因子等。文献报道钙通道阻断剂、β受体拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）、自由基清除剂、Na + H + 交换体抑制剂、ATP敏感钾通道开放剂等有保护心肌对抗再灌注损伤的作用，但是临床应用价值尚待确定［3~6］。中医药在数千年的临床实践中总结出大量切实可行的经验方剂，近年来对国际国内知识产权认识的进一步深入，从中医药中积极寻找疗效确切、拥有自主知识产权的药物对促进我国中医药现代化、国际化具有重要的意义。本研究首次观察到注射用复方荭草冻干粉针剂剂量依赖性地明显减轻离体家兔心脏缺血-再灌注所致的心肌酶(CK 和LDH)的漏出，增加冠脉流量，改善缺血再灌注损伤的病理组织学，提示注射用复方荭草冻干粉针剂具有保护心肌对抗再灌注损伤的作用，可以适用于治疗心肌缺血或再灌注所致急性心肌损伤。已有的研究提示荭草苷对抗缺氧-复氧所致大鼠原代培养心肌细胞内钙超载，对缺氧复氧诱导的氧化应激损伤具有拮抗作用，抑制MDA的生成，提高抗氧化酶的活力［6］。而荭草苷是注射用复方荭草冻干粉针剂主要有效成分之一。根据我们前期的研究，注射用复方荭草冻干粉针剂可能通过改善心功能、降低心肌的耗氧量、增加心肌氧的供应、改善冠脉循环、降低外周血管阻力；抑制心肌钙超载；抗氧化等多层次、多靶点的作用保护心肌缺血再灌注损伤。
       参考文献：
       ［1］  戴  忠，胡长平，吴  铁，等.3，4，5，6四羟基咄酮对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国临床药理学与治疗学杂志，2005，10(5):532.
       ［2］  李先华，游庆军，蒋锡初，等. L精氨酸对心肌缺血再灌注的影响［J］.药学进展，2004，28(1):39.
       ［3］  Podesser BK， Schirnhofer J， Bernecker OY， et al. Optimizing ischemia/reperfusion in the failing rat heart improved myocardial protection with acute ACE inhibition［J］.Circulation,2002,106(12 Suppl1): I277.
       ［4］  Masereel B, Pochet L, Laeckmann D. An overview of inhibitors of Na( +)/ H( +)exchanger ［J］.Eur J Med Chem,2003,38(6):547 .
       ［5］  Giuseppe A, Bruno V, Massimo C. Calcium antagonists and experimental myocardial ischemia reperfusion injury［J］.J Cardiovasc Pharmacol,1992,20( Suppl 7):S26.
       ［6］  付晓春，王敏伟，李少鹏，等. 荭草苷对缺氧-复氧心肌细胞的保护作用［J］.沈阳药科大学学报，2005，22(1):45.
       基金项目：贵州省中药现代化基金资助项目(No.200403)
       (贵阳医学院，贵州 贵阳  550004；  南京中医药大学，江苏 南京  210029)