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       【关键词】  三参胶囊；,,质量标准；,,薄层色谱；,,高效液相色谱
       摘要：目的建立三参胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法对丹参、人参、制首乌进行了定性鉴别，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定了胶囊中丹参素钠的含量，采用Shimpack VP－ODS C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；检测波长280 nm；流动相：0.5%冰醋酸-甲醇（94∶6）；流速：1.0 ml・min-1；柱温：30℃。结果此法线性范围0.110 9～1.663 5μg，r=0.999 9；丹参素钠的平均回收率为98.82%（RSD=1.45%，n=5）。结论该方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法。
       关键词：三参胶囊；  质量标准；  薄层色谱；  高效液相色谱
       The Study on the Quality Standard for Sanshen Capsule
       LAN Yan， CHEN Wenwen，LUO Cheng，HUANG Qinwan，WU Chunjie*
       （Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072,China）
       Abstract：Objective To develop a quality standard for Sanshen capsule. MethodsTLC was used to identify the ingredients such as Danshen Root Ginseng Root and Tuber Fleeceflower Root respectively . Meanwhile, the content of Danshensu in Sanshen capsule was determined by RPHPLC with Shim-pack VP－ODS C18（5 μm，150 mm×4.6mm） .The detection wavelength  was 280 nm；0.5%Acetic acid-Methanol（94∶6）was used as mobile phase, the rate of 1.0  ml・min-1and the column temperature was at 30℃.ResultsThe method was linear within the range of 0.110 9～1.663 5 μg,（r=0.999 9）. The average recovery of Danshensu was 98.82%,（RSD＝1.45%，n=5）.ConclusionThe method is accurate，reliable,and can be used for quality control of the production.
       Key words：Sanshen capsule;  Quality standard;  TLC；  HPLC
   
　　三参胶囊由丹参、三七、人参、制首乌等8味药组成，此方属于医院临床经验方，为更好发挥本方疗效，满足临床不断扩大的需求，现按中药新药6类注册要求研制开发，制成胶囊剂。本方功能主治为破瘀消，扶正祛邪。临床用于治疗气滞血瘀型及气虚血瘀型肺癌为主的恶性肿瘤。本文对方中丹参、制首乌、人参、三七进行了薄层色谱鉴别研究；采用RPHPLC法测定方中主药丹参中丹参素钠的含量，研究的方法简便、快速、重复性好，可作为本品质量控制方法。现报道如下：
       　1  仪器与试药
       岛津LC10ATvp液相色谱仪，SPDM10Avp检测器，浙江大学2010色谱工作站；sartoriusBP211D电子天平（感量0.1 mg；0.01 mg，载量210 g；80 g）；autoscienceAS5150A超声波清洗器；TGL-16G高速离心机；939全自动薄层制板器，ZF90型暗箱紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂）。丹参素钠（110855200304，供含量测定用），中国药品生物制品检定所提供。丹参酮ⅡA（0766200213），中国药品生物制品检定所提供。人参二醇（0701200109，供鉴别用），中国药品生物制品检定所提供。人参三醇（0702200009，供鉴别用），中国药品生物制品检定所提供。何首乌对照药材（09349704），中国药品生物制品检定所提供。三参胶囊，批号20030401，20030402，20030403；硅胶G由青岛海洋化工厂生产，水为重蒸馏水；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。所有药材均购于市场，经检验均符合《中国药典》2000年版Ⅰ部各药材项下的规定。
       　2  方法与结果
       2.1  定性鉴别
       2.1.1  丹参的薄层色谱鉴别［11］取本品2.5 g，加乙醚10 ml，超声处理10 min，滤过，残留物备用，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯适量使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2000版Ⅰ部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1a。
       2.1.2   制首乌的薄层色谱鉴别［2~3］    取本品2.5 g，加甲醇50 ml，超声处理15 min，滤过，滤液水浴挥干，残渣加水10 ml使溶解，再加盐酸2 ml，置水浴上加热回流30 min，立即冷却，用乙醚提取两次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2000版Ⅰ部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（15∶2∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图1b。再置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1c。
       2.1.3   人参、三七的薄层色谱鉴别   取本品5 g，加7％硫酸溶液100 ml，置水浴上加热回流1 h，放冷，用石油醚（30～60℃）振摇提取3次，50 ml/次，合并石油醚液，挥干，残渣加0.5 ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取人参二醇、人参三醇对照品，加无水乙醇制成每毫升各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2000版Ⅰ部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿乙醚（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1d。
       图1  丹参、制首乌、人参、三七的薄层色谱鉴别（略）
       2.2  含量测定［4］   
       2.2.1  色谱条件   Shimpack VPODS C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：0.5％冰醋酸甲醇（94∶6）；流速：1.0 ml・min-1；检测波长280 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。
       2.2.2  对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。
       2.2.3   样品溶液制备 取本品内容物，研细，取0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加水约20 ml，超声处理（功率150 W，频率50KHz）30 min，取出，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液离心，即得。
       2.2.4   系统适应性实验    取样品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪测试，丹参素钠的保留时间为10 min左右，理论板数以丹参素钠峰计大于3 000，丹参素钠峰与相邻峰分离度大于1.5。见图2b。
       2.2.5   线性关系考察    精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含丹参素钠0.110 9 mg 的溶液，摇匀，作为对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液1，2，4，8，15 μl，进样测定。分别以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积（A）为纵坐标（Y）作图，进行回归分析。丹参素钠回归方程为：Y=4.634 1×102+9.813 17×105X，相关系数：r=0.999 9。结果表明丹参素钠进样量在0.110 9～1.663 5 μg范围内与峰面积呈很好的线性关系。
       2.2.6   阴性对照实验    按处方制备缺丹参的阴性样品。依照“2.2”项下方法制成阴性样品溶液。取供试品溶液、对照品溶液（每毫升含丹参素钠0.110 9 mg）、阴性样品溶液各10 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，测定结果为供试品溶液在与对照品溶液相同位置的地方出峰，且分离效果较好，缺丹参阴性样品溶液无干扰。结果见图2。
       2.2.7   精密度实验   精密吸取对照品溶液（每毫升参素钠0.110  mg）10 μl，连续进样5次，记录峰面积，结果丹参素钠平均峰面积为1 145 667，RSD=0.44%。
       2.2.8  重复性实验    取同一批号样品5份，按样品测定方法测定，结果样品中丹参素钠的平均含量为5.79 mg・g-1，RSD=0.698%表明本法重复性良好。
       2.2.9  稳定性实验   取同一批号的样品适量，按依照“2.2.3”项下方法制成供试品溶液，于室温下保存，按上述色谱条件测定方法于制备完成后放置不同时间精密吸取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，考察其稳定性，结果供试品平均峰面积为1 285 530.7，RSD=1.82%。可知样品溶液在16 h内稳定。
       2.2.10  加样回收实验   精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升含丹参素钠0.110 9 mg的溶液，精密称取样品（丹参素钠含量为5.79 mg・g-1）适量，5份，分别精密加入丹参素钠对照品溶液（C＝1.086 mg・ml-1）1.5 ml，再分别加甲醇20 ml，按样品含量测定方法测定，计算回收率。丹参素钠的平均回收率为98.82%，RSD=1.45%。结果见表1。
       图2  对照品（a）、样品（b）、阴性样品（c）色谱图（略）
       表1  丹参素钠含量测定加样回收率实验结果（略）
       2.2.11   样品测定    取样品3批，分别按依照“2.2.3”项下方法制成供试品溶液；精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成每毫升参素钠0.110 9 mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表2。
       表2  样品含量测定结果（略）
       *为每粒中平均含量
       3  讨论
       3.1  关于薄层鉴别   采用以上方法对三参胶囊进行薄层色谱鉴别，重现性好，阴性实验无干扰，经多批样品鉴别，均能检出与对照相同的斑点。同时我们也对方中莪术、土鳖虫的薄层色谱鉴别进行了研究，结果分离效果不好，且阴性有干扰，故未收入正文。
       3.2  检测波长的选择   取丹参素钠对照品溶液及阴性溶液，分别进行紫外扫描（190～370 nm），丹参素钠峰在280 nm波长处均有最大吸收，而阴性对照的吸收较小，故选择280 nm作为检测波长。
       3.3  提取溶剂的考察   曾分别用乙醇、稀乙醇、甲醇、水作为提取溶剂进行考察，丹参素钠含量分别为5.21，4.26，4.63，5.98 mg・g-1，结果以水为提取溶剂时，丹参素钠的含量最高，故选择水为提取溶剂。
       3.4   提取时间的考察   取同批样品内容物，研细，取0.5 g，3份，精密称定，置25 ml量瓶中，分别加水20 ml，超声处理（150w，50kHz）15，30，45 min，进行测定，结果丹参素钠的含量分别为4.22，5.98，5.99 mg・g-1。超声处理30  min后含量几无变化，试验选择提取时间为30 min。
       　参考文献：
       ［1］  郑  萍，谢笑天，孟东华，等.中药丹参中丹参素、丹参酮ⅡA的提取及质量研究［J］.云南师范大学学报，2004，24（4）：50.
       ［2］  覃  晓，黄红林.龟鹿补肾口服液何首乌薄层鉴别方法的改进［J］.华夏医学，2003，16（4）：566.
       ［3］  徐  坚，刘燕华，李  鹃.乌发生发颗粒剂成型工艺研究及薄层鉴别［J］.江西中医药大学学报，2004，16（5）：47.
       ［4］  张友芹,张春林.HPLC法测定丹参药材中丹参素的含量［J］.中医药学报，2000，28（3）：27.
       (成都中医药大学，四川 成都  610072)