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       【摘要】 
       目的观察中药川芎的主要成分川芎嗪对吗啡依赖离体豚鼠回肠催促戒断反应的影响，评价川芎嗪对吗啡依赖豚鼠回肠的作用。方法采用豚鼠回肠体外孵育方法。催促戒断收缩由1 μmol/L纳络酮加入已在含3 μmol/L吗啡的37.5℃ Krebs液中孵育4 h的离体豚鼠回肠引起。分别在给予纳络酮前、后1 min加入不同浓度的盐酸川芎嗪，观察豚鼠回肠的收缩反应。结果川芎嗪100，200，300 μmol/L对正常回肠收缩未见明显影响。当川芎嗪100，200，300 μmol/L在加入纳洛酮前 1 min给药，纳洛酮催促的回肠戒断性收缩被明显抑制，与吗啡依赖对照组相比较有显著性差异（P ＜0.05或P ＜ 0.01）。川芎嗪200，300 μmol/L在加入纳洛酮后1 min给药，对戒断性收缩也有明显抑制作用。结论 川芎嗪对纳洛酮催促的吗啡依赖豚鼠离体回肠戒断性收缩的形成有抑制作用，对已出现的戒断收缩也有明显阻断作用。提示川芎嗪具有抑制吗啡戒断症状的作用。
       【关键词】  川芎嗪； 吗啡； 纳络酮； 豚鼠离体回肠
       
       Effects of Ligustrazine  on Morphine Withdrawal Contracture in the Isolated Guinea Pig Ileum
       MO Zhixian，  ZHU Zhenghua,HE Huijie
       College of Traditional Chinese Medicine, Southern Medical University, Guangzhou, Guangdong 510515, China
       Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of ligustrazine on the morphine withdrawal response in the isolated guenea pig ileum.MethodsThe isolated guinea pig ileum in the organ-bath was used to measure the contractive tension of smooth muscle. The withdrawal contracture was elicited by addition of naloxone (1 μmol/L) to the isolated naive ileum incubated with morphine (3 μmol/L) at 37.5 ℃ for 4 h. Ligustrazine  (100, 200, 300 μmol/L) and nimodipine (0.3 μmol/L) were added 1 min before and after naloxone precipitation in the morphine-dependant ilea. The effect of ligustrazine on the normal naive ilea was observed in this study. ResultsThe effect of a series concentration of ligustrazine on the contraction in normal guinea pig ileum was not significant. But the naloxoneprecipitated withdrawal contracture in the morphinedependent ilea significantly decreased by ligustrazine in a dosedependant manner.  ConclusionLigustrazine can inhibit morphinedependent withdrawal contracture in isolated guinea pig ileum.
       Key words：Ligustrazine;  Morphine;  Naloxone;  Isolated guinea pig ileum
        川芎嗪 (Iigustrazine) 是中药伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎中所含的生物碱, 化学结构为四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine)。 川芎嗪具有明显的强心、扩张血管、改善微循环、抑制平滑肌收缩等多种药理作用，自身毒副作用小, 已广泛应用于临床，治疗多种心脑血管性疾病。中药川芎既是中医临床的常用药物，也是中医治疗阿片类戒断症状的常用中药之一［1］。据报道，川芎嗪对吗啡依赖大、小鼠的戒断综合征具有较明显的治疗作用［2，3］。为深入探讨川芎嗪在抗阿片类戒断方面的作用及机理，本研究通过建立吗啡依赖的豚鼠离体回肠模型，观察川芎嗪对纳络酮催促的吗啡依赖豚鼠回肠戒断性收缩以及川芎嗪对正常豚鼠回肠收缩的影响, 深入探讨中药有效成分川芎嗪的戒毒机理。
       1  器材与方法
       1.1  药品
       盐酸川芎嗪注射液 (无锡市第七制药厂提供，批号：20009131)，盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂生产, 批号：980302), 盐酸纳络酮注射液(北京四环药厂产品，批号：991006),尼莫地平(山东新华制药股份有限公司生产，批号：0008036)。
       1.2   动物清洁级豚鼠,♂，体重200 ～280 g, 由本校实验动物研究中心提供。
       1.3  仪器 
       Powerlab生物信号采集处理系统（ADInstruments Pty Ltd.提供）。
       1.4  方法
       1.4.1  豚鼠回肠标本的制备 
       豚鼠禁食12 h, 饮水不限。击头处死后, 立即打开腹腔, 在离盲肠5 cm处剪断回肠, 取出回肠一段长约15 ～20 cm, 置于预冷的Krebs液中, 剪除回肠周围脂肪组织, 用Krebs液将肠内容物冲洗干净, 剪成长约2.0 ～3.0 cm的标本。 将标本浸入含30 ml Krebs液的恒温浴槽中, 持续通入950 ml/L O2和50 ml/L CO2混合气体，pH 7.4, T（37.0±0.5）℃。标本的一端固定于标本板钩上, 另一端连接于张力换能器, 调标本负荷1 g,平衡30 min后开始实验，采用Powerlab生物信号采集分析系统记录回肠张力变化。
       1.4.2  吗啡依赖回肠标本的制备 
       将上述回肠标本悬挂于30 ml含3 μmol/L吗啡的Krebs液中，通入950 ml/L O2和50 ml/L CO2混合气体，37 ℃ 孵育4 h，每15 min更换1次Krebs液，形成吗啡依赖回肠标本。
       1.4.3  药物对正常豚鼠离体回肠节律收缩的影响 
        
       采用正常豚鼠回肠标本，实验分5组（n = 8, 取自不同豚鼠的回肠），即空白对照组, 川芎嗪3个剂量组（100，200，300 μmol/L, 终浓度,下同），尼莫地平对照组(0.3 μmol/L)。空白对照组给予同容量生理盐水取代药物。实验开始时先描记10 min正常肠平滑肌收缩曲线, 然后在浴槽中加入不同浓度的受试药物0.1 ml, 再描记10 min回肠收缩曲线。
       1.4.4  药物对吗啡依赖回肠催促戒断收缩的影响  
       采用吗啡依赖豚鼠回肠标本，实验分6组（n= 8），即正常回肠组, 吗啡依赖回肠组, 川芎嗪3个剂量组（100，200，300  μmol/L）, 尼莫地平对照组(0.3 μmol/L)。正常回肠组和吗啡依赖回肠组给予同容量生理盐水取代药物。将吗啡依赖回肠标本置于30 ml含3 μmol/L吗啡的Krebs液的浴管中，加入纳络酮1 μmol/L，引起回肠催促收缩反应。实验分别在加入纳络酮前、后1 min加入川芎嗪系列剂量或尼莫地平，以回肠收缩曲线张力的峰值为指标，分别观察药物在催促前后给药对回肠戒断收缩的影响。正常回肠组采用未经吗啡作用的豚鼠回肠标本, 置于30 ml不含吗啡的Krebs液的浴管中，加入纳络酮1μmol/L，观察回肠收缩张力的变化。
       1.5  统计学处理  
       实验数据以±s表示，应用SPSS 10.0统计软件进行完全随机设计资料的单因素方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。
       2  结 果
       2. 1  药物对正常豚鼠离体回肠的影响 
       正常豚鼠回肠呈现节律性收缩。不同浓度川芎嗪（100，200，300 μmol/L）作用于正常豚鼠回肠后，对回肠平滑肌收缩张力未见明显影响（P > 0.05）。0.3 μmol/L尼莫地平对豚鼠回肠收缩张力亦未见明显影响（P> 0.05）。结果见表1。表1  药物对正常豚鼠回肠收缩的影响(略)
       2. 2  药物对吗啡依赖豚鼠回肠催促戒断收缩的影响 
       吗啡依赖回肠加入纳络酮催促后，20 s内，即引起收缩，肠管张力明显增加，该戒断性收缩可维持5 min以上。未经吗啡处理的正常回肠加入纳络酮后不引起明显变化，正常回肠组收缩张力与吗啡依赖回肠组比较，有显著性差异（P<0.01），表明吗啡依赖回肠模型制作成功。3个剂量的川芎嗪在纳洛酮催促前给药及中、高两剂量在纳洛酮后给药均可明显抑制吗啡依赖回肠的催促戒断性收缩，使收缩张力降低，与吗啡回肠组比较有显著性差异（P <0.05或P<0.01）。 川芎嗪的作用呈剂量依赖趋势。低剂量川芎嗪在纳洛酮后给药对回肠的戒断收缩未见显著影响（P>0.05）。阳性对照药尼莫地平组对吗啡依赖豚鼠回肠的戒断收缩也有明显的抑制作用，与吗啡依赖回肠组相比较有显著性意义（P<0.01）。结果见表2。表2 药物对吗啡依赖回肠催促戒断收缩的影响(略)
       3  讨论
        豚鼠回肠富含阿片受体［4］，它所表现的依赖后戒断反应具有类似于整体动物催促戒断症状的药理学特性，反映了药物在器官水平上的作用。本研究采用豚鼠回肠体外孵育方法测定药物对吗啡依赖后戒断反应的影响。实验结果表明，吗啡依赖离体豚鼠回肠经纳洛酮催促后呈现明显的戒断性收缩效应。川芎嗪对正常回肠的节律性收缩未见显著影响，但同样浓度的川芎嗪能够明显阻断和抑制纳络酮引起的回肠戒断性收缩，其作用呈剂量依赖现象。从实验结果看，中、高剂量川芎嗪在纳洛酮催促前后给药虽无明显差异，但低剂量川芎嗪预先给药的效果较纳洛酮后给药作用显著。
        目前国内外对阿片依赖的治疗还没有较理想的药物。Ca2+在阿片类依赖中的作用受到日益广泛的注意。大量的实验研究已证明, 钙通道阻滞剂通过中枢和外周两种机制调节外Ca2+内流，能明显缓解阿片类依赖戒断症状。因此，近年来应用钙拮抗剂治疗阿片类依赖的报道日益增多［5，6］。国内外许多学者在离体豚鼠回肠标本上已证实尼莫地平、异博定等钙通道阻滞剂可以阻断吗啡戒断所引起的戒断性收缩［7，8］。本研究以尼莫地平为阳性对照药也获得了同样的结果。本实验表明了川芎嗪对吗啡依赖回肠戒断收缩具有抑制作用。据报道，川芎嗪能阻断钙通道，被认为是一种新型钙拮抗剂［9，10］。尽管目前对于川芎嗪作为钙通道阻滞剂尚存在争议［11］ ，但该药抑制钙内流的作用是明确的。川芎嗪对吗啡依赖回肠戒断收缩的抑制作用可能与阻滞Ca2+内流有关。
        本文从离体器官水平验证中药有效成分川芎嗪对吗啡依赖的戒断症状具有拮抗作用，为川芎及川芎嗪用于防治阿片类药物依赖的临床应用提供了实验依据，但药物的作用机理仍有待深入研究 。
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