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       【摘要】 
       目的探讨调肝脾方对佐剂性关节炎大鼠红细胞免疫功能的影响。方法采用健脾和肝、除痹止痛为原则组方，以补肝肾方、火把花根为阳性对照组，建立AA大鼠模型，随机分为调肝脾方组、补肝肾方组、芬必得组、火把花根片组、正常对照组、模型组6组，观察各组对AA大鼠足肿胀度及红细胞免疫功能的影响。结果调肝脾方能明显降低AA大鼠原发与继发性关节肿胀度，表现出较好的抗炎作用，并能显著增强红细胞的免疫功能。结论调肝脾方具有明显的抗炎作用，其作用机理与增强红细胞免疫功能有关。
       【关键词】  调肝脾方药；佐剂性关节炎；RBC-C3b受体花环率； RBC-IC花环率
       
       The Influence of the Means of Attempering the Liver and the Spleen on AA Rats" Red Blood Cell Immunity Function
       YE Lei, GONG Jianwei
       Binzhou Medical College (Yantai District), Shandong Yantai 264003, China
       Abstract:ObjectiveTo study the influence of the means of attempering the liver and the spleen on red blood cell immune function in adjucant arthritis (AA) rats. MethodsThe arthritis model was induced by intracutaneously injection of complete Freud"s adjurant in the right hind foot pad of rat. Th rats are randomly divided into 6 groups: the means of attempering the liver and the spleen group, the means of complementing the liver and the kidney group, Fenbid group, Huobahuagen pian group, normal control group, and model group and the foot swelling degree and the red blood cell immunity function of AA rats. ResultsThe means of attempering the liver and the spleen could obviously reduce the foot swelling degree, and of AA rats observed showed fairy anti-inflammntory effect. The red blood cell immune function could notably be strengthened. ConclusionThe means of attempering the liver and the spleen has obvious anti-inflammation function, and the mechanism of action is relevant to strengthen the red blood cell immune function.
       Key words:The means of attempering the liver and the spleen;  Adjuvant arthritis;  RBCC3b reception body garlend rate;  RBCIC garland rate
        类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)属于自身免疫性疾病，是一种以周围关节对称性炎症为主、伴反复发作的慢性全身性疾病，属于中医痹证范畴。历代医家对治疗痹证积累了丰富的经验，并根据痹症的病因病机不同，进行不同的组方配伍，如疏风祛湿，化痰祛淤，助阳散寒，养阴清热，舒筋通络，强筋壮骨等，形成了诸多行之有效的治疗方法。笔者经大量临床文献研究［1，2］发现，“肝脾失调”有可能是RA发病的重要基础，且调肝脾方药对RA治疗亦有良好的效果。为进一步探讨中药调和肝脾配伍抗炎增效的作用机制，笔者采用健脾和肝、除痹止痛为原则组方，并以补肝肾方和火把花根作为阳性对照组,探讨调肝脾方的抗炎作用，以及对红细胞免疫功能的影响，为临床治疗RA提供药理学依据。
       1  材料与方法
       1.1  动物、分组及造模、给药雄性Wistar大鼠60只，体重(180±20)g，购于山东大学医学院实验动物中心。按体重随机分为6组，调肝脾组（H1）、补肝肾组(H2)、芬必得组(X)、火把花根片组(Z)、正常对照组（K组）、模型组（O组），每组10只。佐剂性关节炎(AA)大鼠模型建立参照文献［3，4］方法，实验前大鼠称重, 标号，测量左右后足足踝周长，按1 ml/100 g大鼠灌胃给药，连续3 d，1次/d。于第3次给药后1 h，每鼠右后足足跖皮内注射Freund"s完全佐剂0.05 ml致炎。致炎后正常饲养，每8 h灌胃给药1次，共2次。于致炎后18 h复测右后足足踝周长，观察对原发性病变的影响。之后每7天复称体重、复测左右后足足踝周长，观察各组大鼠继发性病变。并于致炎后19 d再行灌胃给药，连续7 d。致炎后26 d采血处死，检测各项指标。
       1.2  药物
       1.2.1  调肝脾方由白芍、徐长卿、白术、巴戟天、秦艽、白薇等组成；补肝肾方由生地、鹿衔草、骨碎补、淫羊藿、鸡血藤、莱菔子等组成。以上药材均购自济南市建联药店，经山东中医药大学中药学院中药鉴定教研室鉴定，符合《中国药典》2000年版标准。煎煮两次，合并药液，浓缩至含生量2.34 g/ml，用时蒸馏水稀释至所需浓度。
       1.2.2  火把花根片0.18 g/片，重庆市中药研究院制药厂产品，批号：021135，蒸馏水配制成0.029 g/ml的混悬液。
       1.2.3  芬必得胶囊300 mg/粒，由中美天津史克制药有限公司出品，批号：03040226b，蒸馏水配制成0.005 4 g/ml的混悬液。
       1.3  试剂及仪器Freund"s完全佐剂，为Sigma公司产品；戊二醛25％水溶液，由山东省医学科学院购得，临用时用生理盐水配成浓度为0.25％的戊二醛；DDL-5冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂。
       1.4  观察指标及方法
       1.4.1  关节肿胀度计算方法：原发性肿胀度分别以致炎后18 h 右后足足踝周长减致炎前右后足足踝周长；继发性肿胀度分别以致炎后9，16，23，26 d左右后足足踝周长减致炎前左右后足足踝周长。
       1.4.2  红细胞免疫功能检测
        RBC-C3b受体花环实验：每组每只大鼠腹主动脉取血4 ml（肝素抗凝）以2 000 r/min离心10 min。取红细胞于生理盐水配成1.25×107/ml的红细胞悬液。取50 μl此悬液加等量补体致敏酵母菌悬液（1×108/ml），充分混匀。于37℃水浴30 min后加0.25%戊二醛固定，水平涂片，自然干燥，瑞氏染色，于油镜下观察200个红细胞。以结合一个或一个以上酵母菌者为一个花环，花环形成百分率（％）＝红细胞花环数/200×100％。
        RBC-IC花环实验：方法基本同上，不同的是将致敏酵母菌悬液改为未致敏酵母菌悬液。
       2  结果
       2.1  对AA大鼠足肿胀度的影响
       2.1.1  对原发性病变的影响结果见表1。表1  各组对AA大鼠原发性足肿胀度的影响 (略)
       2.1.2  对继发性病变的影响见表2～3。表2  各组对AA大鼠继发性足肿胀度的影响（略）表3  各组对AA大鼠继发性足肿胀度的影响（略）
       2.2  对AA大鼠红细胞免疫的影响结果见表4。表4  各组对AA大鼠RBC-C3b受体花环率和RBC-IC花环率影响（略）
       3  讨论
       3.1  方剂来源及方药分析
       本研究调肝脾方采用健脾和肝、除痹止痛为原则组方。方中白术苦甘而温，补脾燥湿以治土虚，并“主风寒湿痹”；白芍酸寒除痹，柔肝缓急止痛，土中泻木，木中疏土，二者共为君药，起调肝脾，和寒热，治痹痛的作用。徐长卿辛温，祛风止痛，行气活血，利湿解毒；秦艽辛苦，微寒，祛风湿，止痹痛，清湿热，二者共为臣药，增强君药的通利关节除痹作用。白薇归肺、肝、胃经，清热利湿，解毒益阴，既可防治蕴邪化热，又可防止疾病上传心肺；巴戟天归肝、肾、脾胃经，能补肾阳，强筋骨，健脾胃，祛风湿，既增强白术的温阳健脾作用，又可防止疾病下传肝肾，与白薇共为佐使。诸药合用，补脾胜湿而除痹，柔肝养阴而止痛，使脾健肝和，内生诸邪得解，痹痛自止。对照组补肝肾方是从李廷俊教授研制的新药抗骨增生丸加减而来，其主要功效为益肾壮骨，活血通络，除寒止痛，祛风利湿、消刺蠲痹，临床主要用来治疗各关节部位骨质增生，虚寒性风湿、类风湿关节炎。
        对照组火把花根片为近年来开发的治疗RA等自身免疫性疾病的新药。火把花根味苦涩性温、有毒，具有祛风通络、活血化淤之功［5］。但临床报道其有一定不良反应，如恶心、呕吐、胃脘不适等，个别出现头昏、失眠［6］，并可引起妇女闭经，血清转氨酶升高等［7］。
       3.2  影响红细胞免疫作用结果分析
       红细胞免疫是机体免疫系统的重要组成部分，而参与免疫功能的就是C3b受体，其主要作用为清除血液循环中的免疫复合物。红细胞C3b受体活性的强弱直接影响机体中免疫复合物被清除的程度。张骥，郭峰［8］对RA患者研究表明，血清中CIC检测阳性率较高，致使IC免疫复合物进一步升高，存积于局部关节激活补体系统巨噬细胞和中性粒细胞吞噬IC，释放炎症介质导致炎症反应。
        从本次实验结果看，模型组红细胞受体RBC-C3bR花环率显著降低，说明模型大鼠机体清除免疫复合物的能力较低。与模型组相比较，各给药组均能显著提高模型大鼠的RBC-C3bR花环率，降低模型大鼠的RBC-IC花环率，而且H1组RBC-IC花环率明显低于Z组、补肝肾组，说明调肝脾方能增强清除免疫复合物能力，且作用强于火把花根、补肝肾组。本研究结果显示补肝肾方清除免疫复合物能力不及调肝脾方，与前面消肿结果一致。该实验结果表明调和肝脾配伍具有明显的抗炎增效作用，其作用机理与增强红细胞的免疫功能有关。此认识与“肝脾失调”有可能是RA发病重要基础的中医认识相一致,对此我们将进一步深入探讨。
        
       【参考文献】
         　　［1］艾 英，颜文明.治疗类风湿性关节炎的经验［J］.辽宁中医杂志，1994，21（4）：153.
       
       ［2］单书健，陈子华.古今名医临证金鉴·痹证卷上［M］.北京：中国中医药出版社，1999，8：244.
       
       ［3］徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1991：1196.
       
       ［4］陈 奇.中药药理研究方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1996：355.
       
       ［5］宋立人，洪 恂，丁绪亮 ，等.现代中药学大辞典，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，2001：1272.
       
       ［6］王 莉，相 芳.火把花根片的临床应用［J］.时珍国医国药，2002，13（9）：562.
       
       ［7］王 彤，管竞环.火把花根片副作用的中药治疗［J］.临床肾脏病杂志，2002，2（4）：191.
       
       ［8］张 骥，郭 峰.类风湿关节炎患者红细胞免疫功能的实验研究［J］.中华内科杂志，1995，34（5）：357.