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       【摘要】 
       目的采用反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定颈通颗粒中葛根素的含量。方法采用迪马RP18(4.6 mm×150 mm，5 μm),流动相：甲醇-0.025 mol·L-1磷酸溶液（20∶80），检测波长λ=250 nm，柱温30℃，流速1 ml/min。结果葛根素在0.005～0.05 mg/ml浓度范围内线性关系良好，(r=0.999 9)。平均回收率100.23%，RSD=1.35%（n=5）。结论该方法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为该药质量控制的方法。
       【关键词】  葛根素；颈通颗粒；反相高效液相色谱法
       
       Determination of Puerarin in Jingtong Granule by RP-HPLC
       CAO Xuehui，LIU Jingjing
       College of Biotechnology and Food Science, Bohai University, Jinzhou 121000, China
       Abstract：ObjectiveTo establish an RP-HPLC method for determination of puerarin in Jingtong Granules. MethodsDIKMA RP-18 column (4.6mm×150mm,5μm)was used with methanol-0.025mol/L phosphoric acid (20∶80)as a mobile phase. The detection wavelength was set at 250 nm.The temperature of column was at 30℃, and flow rate was 1.0 ml/min.The injection volume was 20μl. ResultsThe linear relationship of puerarin was good in the range of 0.005～0.05μg/ml (r=0.999 9). The average recovery was 100.23%，RSD=1.35%(n=5).ConclusionThis method is simple and credible. It can be used for the quality control of Jingtong Granules.
       Key words：Puerarin；  Jingtong Granules；  RP-HPLC
        颈通颗粒是由白芍、葛根、威灵仙、党参、黄芪等12味中草药经提取加工制成，具有益气养血、活血化瘀、散风止痛功效。用于颈椎病引起的颈项疼痛、活动艰难、肩痛、上肢麻木或肌肉萎缩等症。葛根素为其主要有效成分。拟以液相色谱法测定葛根素含量在适当的色谱条件下，供试液中葛根素与相邻组分分离良好，阴性液无干扰。方法的重现性，稳定性，精密度，回收率实验均符合有关规定，因此确立本制剂定量指标为葛根素，测定方法为液相色谱法。
       1  器材
       1.1  仪器HITACHI 液相色谱仪，HITACHI Integrator D7500，HITACHI Pump L7150，HITACHI  Detector L7420 UVVIS。
       1.2  对照品葛根素（110752200410）对照品由中国药品生物制品检定所提供。
       1.3  药品颈通颗粒。
       1.4  试剂甲醇为分析纯，水为亚沸蒸馏水（自制）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：迪马RP18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：甲醇-0.025 mol·l-1磷酸溶液（20∶80），检测波长λ=250 nm，柱温30℃，流速1 ml/min,进样量20 μl。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5 mg，置50 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀备用。
       2.3  供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研磨，精密称定（约1 g），置50 ml锥形瓶中，加入甲醇10 ml左右，超声波处理10 min，离心回收上层溶液，沉淀再加甲醇10 ml左右，重复上面操作，连续3次后，将收集到的溶液放冷，用流动相定溶于50 ml容量瓶中，备用。
       2.4  阴性溶液的制备及实验取除葛根素之外的其它药材，按照制备工艺制成空白样品，采用上文中样品的处理方法进行空白样品处理，制成空白溶液；分别取供试品，对照品及空白溶液进样进行峰检测，结果复方除葛根素外的其它药味不干扰葛根素的测定。结果见图1。
       2.5 线性关系的考察精密称定葛根素适量，用甲醇配制成0.1 mg/ml的溶液，作为对照品溶液；依次取对照品溶液0.5，1，2，3，5 ml置于10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；分别取上述溶液20 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，以峰面积（A）对对照品的浓度（C）进行线性回归，其回归方程为Y=3.85×107X－1.49×104（r=0.999 9），结果表明葛根素进样量在0.005～0.05 mg/ml浓度范围内线性关系良好。
       2.6  精密度实验精密吸取同一葛根素对照品20 μl，连续进样5次，峰面积RSD为2.2%（n=5）。测定结果表明，本试验精密度实验符合有关规定。
       2.7  重现性实验精密称取同一批复方药材5份，按复方样品供试液的制备方法平行操作，得5份提取液，各取20μl进样，峰面积RSD为2.9%（n=5）。
        测定结果表明，本实验重现性实验符合有关规定。
       2.8  稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在1 ，2，3，4，5 h测定，结果吸收峰面积变化不大，RSD为0.4%（n=5）。
        结果表明供试品制备后5 h内稳定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。
       2.9  回收率实验精密称取阴性溶液5份，分别加入一定量的葛根素对照品，依法制备供试品溶液并测定，计算葛根素的回收率。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）
        测定结果：本方法回收率在98.9%～102.2%之间，RSD为1.35%，符合相关规定。
       2.10  样品测定取3个批次本品依法配置供式样品并测定葛根素含量，结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
        本实验根据葛根素性质，采用甲醇为溶剂，每次加10 ml甲醇,超声波连续提取3次，每次10 min，最后1次提取时，甲醇几乎无色，该提取方法明显好于一次加入30 ml超声30 min的方法，故确立该提取方法。
        在供试品的配置方面，为了消除前延峰的干扰，我们采用甲醇配置高浓度后，用流动相稀释定容，结果前延峰消除，检测峰达到基线分离。
        在流动相的选择方面，首选中国药典收录的葛根素高效液相色谱法，流动相甲醇水25∶75，由于有干扰分峰存在，故改用甲醇0.025 mol/L磷酸水溶液20∶80确定含量测定方法更准确，灵敏。