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       【摘要】 
       目的建立高效液相色谱（HPLC）法同时测定半夏、水半夏及其炮制品中麻黄碱的含量。方法色谱柱为DiamensilC18(150 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为甲醇∶0.08％三乙胺水溶液(18∶82),醋酸调pH值为5.8，流速为1.0 ml/min,检测波长210 nm。结果麻黄碱在0.8～2.4 μg内线关系良好(r=0.999 7)，平均回收率97.22％, RSD为1.72％。结论半夏、水半夏中麻黄碱的含量存在差异,可为评价半夏、水半夏的质量提供依据。
       【关键词】  半夏; 水半夏; 麻黄碱; 高效液相色谱法
       
       Determination of Ephedrine in Rhizoma Pinelliae, Rhizoma Typhonii Flagelliformis and their Processed Products by HPLC
       XU Weifeng， ZHANG Baoguo， LI Mian， LIU Guanghe
        
       Institute of TCM, Henan University ,  Kaifeng , Henan  475004, China
       Abstract：ObjectiveTo determine the contents of ephedrin in Rhizoma Pinelliae, Rhizoma Typhonii Flagelliformis and their processed products by HPLC．MethodsThe diamensil C18 column methanol 0.08％triethylamine water solution(18∶82) as the mobile phase,flow rate was 1.0 ml/min, wavelength was 210 nm．ResultsWithin the range of 0.8～2.4 μg of ephedrin ,the linearity of this method was good(r=0.999 7)．The average recovery of the different processed products was 97.22％ with RSD of 1.72％．ConclusionThe contents of ephedrin in Rhizoma Pinelliae and Rhizoma Typhonii Flagelliformis are apparently different, which can offer consideration for evaluation of quality of them．
       Key words：Rhizoma Pinelliae;  Rhizoma Typhonii Flagelliformis;  Ephedrine;  HPLC
        半夏是天南星科多年生草本植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit. 的干燥块茎，具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结的功效。20世纪70年代末期，日本学者曾从半夏中提得麻黄碱成分，并认为它与半夏的镇吐止咳的功效有关［1］商品中常见有部分或全部以水半夏Typhonium flagolliforme( Lodd. ) Blume.代替半夏使用。有报道认为，水半夏也含有生物碱成分，水半夏具有与半夏基本相同的药理作用［2］。本文采用HPLC法同时测定半夏、水半夏中麻黄碱的含量,以便为进一步评价半夏、水半夏的质量提供依据。
       1  仪器
       1.1  材料
       1.1.1  生半夏购自安徽亳州药材市场,经鉴定为天南星科多年生草本植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.的干燥块茎。
       1.1.2  水半夏购自安徽亳州药材市场,经鉴定为天南星科植物鞭檐犁头尖Typhonium flagelliforme(Lodd.)Blume.的干燥块茎。以上样品均经本院张保国教授鉴定。
       1.1.3  法半夏取半夏,大小分开,用水浸泡至内无干心,另取甘草适量,加水煎煮两次,合并煎液,倒入用适量水制成的石灰液中,搅匀,加入上述已浸透的半夏,浸泡,每日搅拌1～2次,并保持浸液pH值在12以上,至剖面黄色均匀,口尝微有麻舌感时取出,洗净,阴干或烘干,即得。每100 kg净半夏，用甘草15 kg，生石灰10 kg［3］。
       1.1.4  清半夏取净半夏,大小分开,用8%白矾溶液浸泡至內无干心,口尝微有麻舌感,取出,洗净,切厚片,干燥。每100 kg半夏，用白矾20 kg［3］。
       1.1.5  法制水半夏制法同法半夏。
       1.1.6  姜制水半夏取净水半夏,大小分开,用水浸泡至内无干心时,另取生姜切片煎汤,加白矾与水半夏共煮透,取出,凉至半干,切薄片干燥。每100 kg水半夏，用生姜25 kg，白矾12.5 kg。
        上述样品均60℃干燥粉碎成过80目筛的粉末备用。
       1.2  仪器与试药
       LC-10A液相色谱仪(日本岛津), LC-10ATvp泵，CBM-102工作站(日本岛津)，SPD-10Avp检测器, Unicam UV540型紫外分光光度计，十万分之一电子天平(Mettler Toledo AG-135型 ，d=0.01 mg)。超声波清洗器 （中国上海船舶电子设备研究所）。盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所), 甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  测定波长的选择取盐酸麻黄碱对照品溶液在200～400 nm范围内扫描,测得λmax为210 nm,因此选定210 nm为检测波长。
       2.2  色谱条件色谱柱: DiamensilC18(150 mm×4.6 mm,5 μm);柱温:室温;流动相: 甲醇0.08％三乙胺水溶液(18∶82),醋酸调pH值为5.8，流速为1.0 ml/min,检测波长210 nm。
       2.3  对照品溶液的配制精密称取盐酸麻黄碱标准品25 mg，至25ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度制成1 mg/ml的溶液,以此作为对照品溶液。
       2.4  供试品溶液的配制分别精密称取半夏、水半夏及其炮制品5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50 ml 75％乙醇﹙内含1％盐酸﹚称重，冷浸过夜，超声提取30 min，取出,放冷,再称定重量，用75％乙醇﹙内含1％盐酸﹚补足损失的重量，过滤，用75%乙醇(含1%盐酸)适量洗涤滤渣和滤器合并滤液和洗液,水浴蒸干,残渣用75%乙醇(含1%盐酸)2 ml溶解,即得［4］。
       2.5  线性关系考察分别精密吸取2,3,4,5,6 ml 2.3项下对照品溶液，置50m1量瓶中，用甲醇稀释至刻度。各进样20 μl，按上述色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制工作曲线，结果表明盐酸麻黄碱0.8～2.4 μg呈线性关系,其回归方程为Y=3.66×107X-8.00×104,r= 0.999 7。对照品及样品色谱图见图1～3。
       2.6  精密度考察精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液,重复进样5次,每次20 μl,测定峰面积,结果盐酸麻黄碱峰面积积分值的相对标准偏差RSD=0.25%。
       2.7  稳定性考察取对照品溶液和样品溶液,于0,2,4,8,24,48 h分别依法测定,其RSD分别为0.62%,1.3%。表明对照品溶液及样品溶液在48 h内稳定。
       2.8  重复性实验依法对半夏药材供试液进行5次测定,麻黄碱平均含量为1.65 μg/g。求得相对标准偏差RSD为1.5%,表明重复性良好。
       2.9  加样回收率考察分别精密称定5份已测得麻黄碱含量的半夏样品各5 g,加入对照液(0.080 1 mg·ml-1)0.1 ml,混匀,照2.3项下方法制备供试品溶液,进样分析计算结果,加样回收率结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）
       2.10  样品含量测定精密称取半夏、水半夏及其炮制品5 g，按2.4项下方法制备供试品溶液，依照2.2项下条件测定，进样量20 μl。结果见表2。表2  样品测定结果（略）
       3  讨论
       3.1  提取方法考察实验中对加热回流提取、超声提取两种方法进行了考察，结果显示两者提取率相近，但由于后者具有所需设备简单、操作方便、提取时间短、无需加热等优点，故选择冷浸后超声提取。
       3.2  流动相考察实验中笔者曾考察了下列不同的流动相甲醇:0.08%三乙胺溶液(18∶82)用冰醋酸调pH=5.8, 流速1.0 ml/min; 0.01mol/L磷酸二氢钾∶甲醇(95∶5) 用磷酸调pH=2.5, 流速1.0 ml/min;实验结果显示采用前者基线噪音小，分离效果好。
       由实验结果可知各样品中麻黄碱含量高低依次为半夏、法半夏＞清半夏；水半夏＞姜制水半夏＞法制水半夏，半夏、水半夏中麻黄碱含量存在明显差异，这可为进一步评价半夏、水半夏的质量提供依据。
       【参考文献】
         　　［1］吴 皓，谈献和，蔡宝昌，等.半夏姜制对麻黄碱含量的影响［J］. 中国中药杂志，1996，21（3）：157.
       
       ［2］吴 皓,蔡宝昌,杨卫贤. 炮制对水半夏化学成分的影响［J］. 南京中医学院学报，1994，10（4）：42.
       
       ［3］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：78.
       
       ［4］李忠红,刘德培,杜冠华.阜南产半夏的质量研究［J］. 中草药，2005，36(6):904.