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       【摘要】 
       目的建立银翘解毒片中绿原酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法。Kromasil C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相为甲醇3%甲酸水（18∶82），流速为1ml·min-1，检测波长为326 nm 。结果绿原酸进样量0.1～0.6 μg范围内呈良好的线性关系，r＝0.999 9，平均回收率为99.01%，RSD为1.67%(n=5)。结论 HPLC法测定绿原酸含量简便易行、准确、重现性好。
       【关键词】  银翘解毒片； 绿原酸； 高效液相色谱法
       
       Determination of Chlorogenic Acid in Yinqiao Jiedu Tablet by HPLC
       LIU Qing
       Shandong Institute of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica,Jinan 250014, China
       Abstract：ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of Chlorogenic acid in Yinqiao Jiedu tablet . MethodsA Kromasil C18 column was used(4.6 mm×200 mm,5 μm) . The mobile phase was methyl alcohol3%methyl acid water(18∶82). The flow rate was 1 ml·mm-1, and the detection wavelength was 326nm . ResultsThe linearity of Chlorogenic acid was good within the range of 0.1～0.6μg, the average recovery rate was 99.01% and RSD=1.67%(n=5) . ConclusionThe HPLC method is easy, simple, and accurate and has good reappearance . It can be used for quality control of Yinqiao Jiedu tablet .
       Key words： Yinqiao Jiedu tablet ;   Chlorogenic acid ;   HPLC
        银翘解毒片收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部，由金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗、淡竹叶、甘草等9味药材加工制成。具有疏风解表、清热解毒功效，用于风热感冒，咳嗽口干，咽喉疼痛［1］。金银花为方中主药，绿原酸是金银花的主要活性成分。本文用HPLC法测定了银翘解毒片中绿原酸的含量。该法准确、可靠重现性好，可为本品进一步完善质量标准提供参考依据。
       1  仪器与试药
        Waters高效液相色谱仪，600四元梯度泵，996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站。 CSF1A超声波提取器（上海超声波仪器厂），绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所），银翘解毒片及处方药材均购于济南市建联药材供应站，经鉴别均为药典正品。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1   色谱条件 
       色谱柱为Kromasil C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相甲醇－3%甲酸水（18∶82），流速1 ml·min-1，检测波长为326 nm，柱温为30℃，进样量10 μl，理论板数按绿原酸色谱峰计算不低于3000。
       2.2  对照品溶液的配制 
       精密称取绿原酸对照品适量，配制成50 μg /ml的溶液。
       2.3   线性关系考察 
       精密吸取绿原酸对照品溶液2，4，6，8，10，12 μl，进样，测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，绿原酸的回归方程为：Y=538 506.7X+5 468.2，r=0.999 9，线性范围在0.1～0.6 μg。
       2.4   供试品溶液的配制 
       取供试品20片，去包衣，研细，混匀，取约1 g，精密称定，精密加入 50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 ml，用50%甲醇定容至10ml，摇匀，过0.45 μm滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
       2.5   阴性样品溶液的制备 
       按标准处方量及制法制得不含金银花的银翘解毒片，按供试品溶液的制备方法制得样品溶液，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，作阴性样品溶液。
       2.6   系统适用性实验 
       按上述色谱条件将对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶液分别进样10 μl 测定峰面积并记录色谱图，结果在供试品色谱峰中，与对照品相应的位置上有相同保留时间的色谱峰；阴性样品在此位置上则无色谱峰。表明阴性样品对测定结果无干扰。见色谱图1～3。
       2.7  精密度实验 
       取同一样品溶液，连续进样5次测定峰面积，结果绿原酸峰面积的RSD为0.87%。
       2.8  稳定性实验 
       取同一样品溶液，室温下，每隔2h按所给色谱条件进样测定峰面积，结果绿原酸峰面积的RSD为1.05%（n=5），表明10 h内样品溶液稳定。
       2.9  重现性实验 
       取同一样品5份，按供试品溶液制备方法制得样品溶液，依法测定峰面积进行计算，结果绿原酸峰面积的RSD为1.56%，表明重现性较好。
       2.10  加样回收率试验 
       精密称取同一已知含量的样品0.5 g，共5份,分别精密加入0.524 mg/ml的绿原酸对照溶液5 ml，按供试品溶液制备方法制得样品溶液，依法测定峰面积，计算回收率。结果见表1。2.11  样品测定  取3批样品，按供试品溶液制备方法制得样品溶液，按所给色谱条件进样10 μl，测定，用外标法计算含量。结果见表2。表1  绿原酸加样回收率实验结果（略）表2  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
        银翘解毒片是由金银花、连翘等9味中药组成，组方复杂，质量难以控制，通过测定其组方中金银花的绿原酸含量，可进一步完善其质量标准，有利于加强质量控制。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会 . 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2005：601.