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       【摘要】 
       目的对止咳平喘胶囊中主要化学成分绿原酸进行含量测定。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为YWG C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈－0.4%磷酸溶液（13∶87）；柱温：25℃，检测波长为327 nm，流速为1.0 ml/min。结果方法学考察结果表明，绿原酸的线性范围为0.122～0.980 μg；测定方法的平均加样回收率为98.07%，RSD=1.16%（n=5）。结论 该方法简便、快速、准确，可用于止咳平喘胶囊的质量控制。
       【关键词】  止咳平喘胶囊； 绿原酸； 高效液相色谱
       Determination of Chlorogenic Acid in Zhike Pingchuan Capsules by HPLC
       FAN Yunjie, WANG Huijun
       Shanxi Rongjun Hospital，Taiyuan 030031，China
       Abstract：ObjectiveTo establish a determination method  for chlorogenic acid  in Zhike Pingchuan Capsules.MethodsHPLC with YWG C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）column was used .Acetonitrile-0.4%H3PO4 (13∶87) was the mobile phase. The column temperature was at 25℃, the flow rate was 1.0 ml/min, and the detection wavelength was at 327 nm. ResultsThe methodological evaluation showed a good linearity within the range of 0.122～0.980 μg. The average recovery  was 98.07% and RSD was 1.16%（n=5）.ConclusionThis method is simple,quick,accurate and reproducible, and it can be used for the quality control of Zhike Pingchuan Capsules.
       Key words：Zhike Pingchuan Capsules;   Chlorogenic acid;   HPLC
        止咳平喘胶囊是由金银花、川贝母、枇杷叶等多味中药制成的复方制剂，具有养阴清肺、止咳化痰的功效，临床上用于外感咳嗽、咽干口燥、咯痰不爽、痰黏稠或黄稠、口干、便秘等病症的治疗。该制剂在制定其质量标准过程中建立了高效液相色谱法测定其中君药金银花所含主要有效化学成分绿原酸含量的方法［1］。通过测定绿原酸含量，能够有效地控制该制剂的内在质量，从而保证临床疗效的稳定。
       1  仪器和试药
        Agilent1100 高效液相色谱仪，包括：AgilentG1311A四元泵（Quatpump），AgilentG1322A真空在线脱气机（Degrasser），AgilentG1313A自动进样器（ALS），Agilent G1315B DAD二极管阵列检测器，Agilent chimstation system（安捷伦化学工作站），YWG C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），电子天平（德国赛多利斯BP211D）；超声提取器；MiliporeQ纯水器。
        绿原酸(含量测定用)，由中国药品生物制品检定所提供；止咳平喘胶囊（山西省中医药研究院制剂中心提供）；乙腈，HPLC级，美国天地(TEDIA)试剂公司。
       2  方法
       2.1  色谱条件色谱柱为YWG C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈0.4%磷酸溶液（13∶87）为流动相；检测波长为327 nm；流速为1.0 ml/min，柱温为25℃。
       2.2  对照品溶液的制备  
       取绿原酸对照品适量，精密称取，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含绿原酸50 μg的溶液，即得（10℃以下保存）。
       2.3  供试品溶液的制备［2］ 
       取止咳平喘胶囊的内容物，研细，混匀，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇50 ml，称定重量，超声提取（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
       3  结果
       3.1  阴性空白实验
       按处方比例和工艺制备缺金银花的阴性空白样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性空白样品溶液，进样测定，结果表明，空白样品色谱图在与标准品及样品色谱图相同位置上无绿原酸的色谱峰，表明处方中其它药味无干扰。结果见图1。
       3.2  线性考察 
       精密吸取绿原酸（49.0 μg·ml-1）对照品溶液，分别进样2.5，5，10，15，20 μl，对所测得的峰面积（Y）和对照品进样量（X）作回归处理，得绿原酸标准曲线，并计算得到绿原酸回归方程为：Y=2 990.05X＋32.44 ，r=0.999 27。表明绿原酸在进样量为0.122～0.980 μg的范围内具有良好线性关系，绿原酸线性关系考察峰面积数据见表1。表1  绿原酸线性关系考察数据（略）
       3.3  精密度实验 
       精密吸取上述止咳平喘胶囊供试品溶液10 μl，重复进样5次， 测定峰面积，绿原酸的峰面积值分别为1 529.79，1 515.56，1 525.95，1 534.58，1 529.34，RSD=0.46%（n=5）。表明本含量测定方法精密度良好。
       3.4  稳定性实验 
       取同一供试品溶液，分别于0，1，2，3，4，5，6 h进样测定，记录绿原酸峰面积，RSD=1.08%，结果表明供试品溶液在6 h内稳定。
       3.5  重复性考察 
       取同一批止咳平喘胶囊，分别制备5份供试品溶液，按上述含量测定方法测定绿原酸含量；结果，绿原酸RSD=1.71%。表明本方法重现性良好。
       3.6   回收率实验 
       采用加样回收法，精密称取已知含量的止咳平喘胶囊内容物一定量，精密添加适量绿原酸对照品，按供试品溶液的制备方法制备，并按上述含量测定项下方法测定,计算,结果绿原酸平均回收率为98.07%，RSD=1.16%（n=5）。结果见表2。表2  绿原酸回收率测定结果（略） 
       3.7  样品测定 
       分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl。按上述色谱条件测定，计算样品中绿原酸含量。结果见表3。表3  3批止咳平喘胶囊中绿原酸含量测定结果（略）
       4  讨论
        绿原酸的含量测定方法，参照《中国药典》及文献报道的方法，采用高效液相色谱法，流动相，比较了乙腈0.4%磷酸溶液(13∶87)、甲醇0.1%磷酸溶液(15∶85)及乙腈水(13∶87)的分离效果，结果以乙腈0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相分离效果较为理想。
        在供试品溶液制备的过程中，比较以甲醇，50%甲醇及乙醇为提取溶剂对样品进行处理，结果以50%甲醇提取完全，重复性好，故选择50%甲醇为提取溶剂。另外对提取时间15，30 min及60 min进行了考察，结果超声提取30 min和60 min时的结果相似，故选择提取时间为30 min。
       【参考文献】
         　　［1］王宝. 中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：307.
       
       ［2］阴 健 . 中药现代研究与临床应用［M］.北京：人民卫生出版社1994：425.