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       【摘要】 
       目的利用高效液相色谱（HPLC）法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量。方法色谱柱为YWG-C18（250 mm×4.6 mm，10 μm)，以乙腈-5%醋酸水（65∶35)为流动相，检测波长为250 nm，流速为1.0 ml·min-1。结果甘草次酸对照品浓度在9.375～300 mg·ml-1范围内线性关系良好，回归方程：A=31.545C-82.030(n=6, r=0.999 1)，炙甘草加样回收率为99.81%；炙甘草汤为100.28%。结论HPLC法准确可靠，可为控制炙甘草和炙甘草汤质量提供检测依据。
       【关键词】  炙甘草；炙甘草汤；甘草次酸；高效液相色谱法
       
       Determination of Glycyrrhetinic in Zhi Gancao and Zhi Gancao Decoction by HPLC Performance Liquid Chromatography
       ZHANG Shuping, TIAN Jiaming, BAI Xuemei, LI Wang
       1.Traditional Chinese Medicine Department of Hebei North University, Zhangjiakou 075000;
       2. Laboratory Centre of Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China
       Abstract：ObjectiveTo determine the glycyrrhetinic contents in Zhi Gancao root and Zhi Gancao Decoction by HPLC. MethodsYWG-C18 column (250 mm×4.6 mm，10 μm) was used with Acetonitrile and 5% Acetic acid-water as mobile phase. The detection wavelength was 250 nm, and the flow rate was 1.0 ml·min-1. Results The linear relationship was good in the range of 9.375～300 mg·ml-1. The regression equation was:A=31.545C-82.030(n=6,r=0.999 1), the average recovery rate of Zhi Gancai and Zhi Gancao decoction were 99.81% and 100.28% respectively. Conclusion HPLC method is accurate and valuable for the quality control of Zhi Gancao and Zhi Gancao decoction.
       Key words：Zhi Gancao;  Zhi Gancao decoction;  Glycyrrhetinic acid;  HPLC
        炙甘草汤出自汉代张仲景的《伤寒论》，为治疗“心动悸、脉结代”的古代名方，由炙甘草、生姜、桂枝、人参、生地黄、阿胶、麦门冬、麻子仁、大枣组成。近年来，大量的实验研究证明，炙甘草汤确有抗心律失常的作用，对各种心脏疾病所致的心律失常均有较好的疗效，且药理作用广泛而持久，极具开发价值［1］。炙甘草为炙甘草汤的君药，甘草次酸为甘草提取物的有效成分之一。目前文献报道多为测定甘草酸的含量，而测定甘草次酸的含量的方法少见报道［2］。为了探讨中药主要单体在中药配伍中的变化规律，实验采用HPLC法对炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量进行了测定，为炙甘草汤的复方制剂研究提供一定的实验依据。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器
       高效液相色谱仪（HP1100，美国Agilent。包括在线脱气机，四元泵，柱温箱，紫外检测器，3D化学工作站），A/D电子分析天平（1/10万，日本），756紫外分光光度仪（上海分析仪器总厂），超声波清洗器（KQ-500B，江苏省昆山市超声波仪器有限公司）。
       1.2  试药
       甘草次酸对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇（色谱纯，美国），乙腈（色谱纯，天津科密欧），蒸馏水为本室自制，其他试剂均为分析纯。方剂中九味中药均购自河北北方学院中医门诊部，并按照《中国药典》（2000年版）各单味药标准进行检定。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱YWG-C18（250 mm×4.6 mm，10 μm)，流动相为乙腈∶5%的醋酸水=65∶35；流速：1ml·min-1；检测波长：250 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。
       2.2  对照品溶液的制备精密秤取一定量的甘草次酸对照品，置5 ml容量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度摇匀，配成1 mg/ml甘草次酸对照品溶液备用。
       2.3  供试品溶液的制备样品Ⅰ为炙甘草汤，按传统工艺煎煮两次，合并煎煮液浓缩成0.1 g/ml（含炙甘草）的溶液；样品Ⅱ为炙甘草单味药材按上述方法制成0.5 g/ml（含炙甘草）的溶液。精密吸取样品Ⅰ、Ⅱ各2 ml，分别加入6 ml甲醇进行醇沉，离心5000 r/min 5 min，上清液过0.45 μm滤膜备用。
       2.4  阴性对照实验按炙甘草汤处方比例制成缺炙甘草的阴性对照品，依照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
       2.5  线性关系观察精密吸取上述甘草次酸对照品溶液18.75，37.5，75，150，300，600 μl分别置2 ml容量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项分别进样20 μl进行测定。以甘草次酸含量（C）为纵坐标，峰面积（A）为横坐标，得线性回归方程：A=31.545C-82.030,r=0.999 1(n=6)，结果表明甘草次酸含量在9.375～300 mg·ml-1范围内，本法线性关系良好。
       2.6  精密度实验精密吸取上述对照品溶液，按“2.1”项重复进样6次，峰面积的RSD为1.3%，表明本法精密度良好。
       2.7  重复性考察取同一批药材样品，按样品制备方法平行制备5份，按“2.1”项进行测定。炙甘草中草次酸含量的RSD为1.98%，炙甘草汤中甘草次酸含量的RSD为2.03%，表明重现性良好。
       2.8  回收率实验精密秤取己知含量的炙甘草和炙甘草汤方药材粉末适量，分别定量加入甘草次酸对照品，按照供试品溶液的制备方法操作，按“2.1”项进行测定，结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）
       2.9  样品测定精密吸取供试品溶液稀释至合适浓度，按“2.1”项进行测定，代入回归方程，计算炙甘草和炙甘草中甘草次酸的含量，结果见表2，色谱图见图1。表2  炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量（略）
       3  讨论
       3.1  流动相的选择实验选用了不同的流动相比例，结果表明在现用流动相比例下甘草次酸出峰时间适中，分离度最好。
       3.2  波长的选择用756MC分光光度仪对炙甘草和炙甘草汤进行全波长扫描，结果显示在250 nm处均有较高的吸收峰。
        炙甘草汤中甘草次酸的含量高于炙甘草，分析其原因，可能是复方中的其他成分对目标成分有增溶作用，或复方中的其它药材也含有目标成分，结果有待于进一步深入研究。
        
       【参考文献】
         　　［1］郭春雨，宋 威，刘 芳，等.炙甘草汤抗心律失常的活性成分及药理研究概况［J］.长春中医学院学报，2001，17（2）：63.
       
       ［2］惠寿年，董阿玲.国内对甘草化学成分的研究进展［J］.中草药，1999，30（4）：245.