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       【摘要】 
       目的制定出青蒿的最佳采收时间。方法用高效液相色谱（HPLC）法测定不同生长采收期青蒿素的含量。结果经实验测定，青蒿素的含量8月份最高，8月前随生长采收期的延长逐渐增高，8月后逐渐降低。结论 如果以青蒿素含量的提取为目的，青蒿的最佳采收期为8月份。
       【关键词】  青蒿素； 生长采收期； 含量测定
       
       Artemisinin Content Measuration of Different Growth and Harvest Period
        
       LI Chunhong， WANG Lin， HE Bing, FENG Wen-yu, TIAN Ji,  AI Hong-bing
       Luzhou Medical College，Luzhou 646000，China
       Abstract：ObjectiveTo constitute the best time to harvest the Artemisa Annua.MethodsHPLC method to measure the content of Artemisinin in different growth and harvest period.ResultsBy the experiment,the time of the highest content of Artemisinin was in August,before which the content increased with the ertension of growth and harvest period, after that, it conducted.ConclusionThe optimal harvest time of Artemisinin is in August.
       Key words：Artemisinin；  Growth and recovery period；  Content aensuration
        青蒿Artemisia annual为菊科植物黄花蒿的干燥地上部分，具有清热解暑、除骨蒸和截疟［1］等功效，其主要有效成分为青蒿油和青蒿素等。现代药理研究表明青蒿油具有抗菌、消炎、镇咳和祛痰的作用［2］，还可以治疗神经性皮炎［3］，皮肤真菌病［4］和慢支炎［5］等疾病。青蒿素含有过氧基团的倍半萜内酯，具有截疟、抗菌、解热和增强免疫功能等药理作用［6］。因此，对青蒿素及其微生物的研究已经引起全世界药学工作者的关注。目前，对青蒿素含量测定方法的研究不多，作者用柱前衍生RPHPLC法测定不同生长采收期青蒿中青蒿素的含量。
       1  器材
       1.1  药材青蒿Artemisia annual (分别采收于5～10月份的上旬和下旬，共12批)，产地：四川省泸州市。
       1.2  仪器戴安高效液相色谱仪（P680A四元低压梯度泵，PDA100二极管阵列检测器，TCC100柱温箱，Chromeleon色谱工作站）；瑞士Precisa电子天平（XR 205SM-DR）；索氏提取器。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件本实验采用的是色谱柱：Dikma Kromasil C18 column (5 μm，250 mm×4.6 mm)，流动相：甲醇-0.01 mol/L醋酸钠醋酸缓冲液(pH=5.8)(66∶34∶1),流速：0.8 ml/min,检测波长：252 nm,柱温：30℃。
       2.2  对照品溶液的制备取青蒿素对照品约10 mg，精密称定，用无水乙醇溶解制成每毫升中约含1 mg的溶液，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加入0.2%氢氧化钠溶液4 ml，摇匀，置50℃恒温水浴中微温30 min，取出，冷至室温，待液面恢复至刻度，用0.08 mol/L醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液即得。
       2.3  供试品溶液的制备取青蒿叶适量，粉碎为细粉(过30目筛)，取0.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（30～60℃）40 ml，回流提取4.5 h，取提取液，水浴蒸干，残渣用无水乙醇溶解并定容至10 ml量瓶中，摇匀，精密量取1mL,置10 ml量瓶中，加入0.2%氢氧化钠溶液4 ml，摇匀，置50℃恒温水浴中微温30 min，取出，冷至室温，用0.08 mol/L醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液即得。
       2.4  系统适应性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1～3。从图中可见，青蒿素衍生物的保留时间为6.3 min左右，阴性对照在青蒿素衍生物峰处无干扰，即本试验条件下青蒿素衍生物与其它组分分离完全，与相邻色谱峰的分离度为6.78，拖尾因子为：1.01，理论塔板数以青蒿素衍生物计为11353。
       2.5  标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μl注入液相色谱仪,用上述色谱条件测定。进样量(μg)为横坐标，测得的峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程：A=34.708 0C+0.338 3，r＝0.999 9。表明在0.009 9～0.990 μg之间有良好的线性关系。
       2.6  精密度实验精密取供试品溶液10 μl，按上述色谱条件连续进样5次，求得峰面积。测得RSD=0.968%,说明仪器的精密度良好。
       2.7  稳定性实验取供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12，24 h精密进样10 μl，结果表明供试品在24 h内基本稳定。
       2.8  重现性实验取青蒿药材粉末，按供试品溶液的制备方法，制得5份供试品溶液，分别精密进样10 μl，照上述方法进行测定。RSD=0.68%，表明本方法重现性良好。
       2.9  回收率实验取已知含量的青蒿药材粉末约0.5g，加入青蒿素标准品适量，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得平均回收率为98.79%，RSD=2.36%，说明本法具有良好的回收率。
       2.10  样品测定分别精密量取对照品溶液和供试品溶液10 μl，按上述色谱条件测定，并计算青蒿素的含量，结果见表1。表1  不同生长采收期青蒿素的含量（略）
       3  结论
        青蒿素的含量8月份最高，8月前随生长采收期的延长逐渐增高，8月后逐渐降低。因此若以青蒿素的提取为目的，青蒿的最佳采收期为8月份。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000，137，附录57.
       
       ［2］冯文宇,李丙元.青蒿研究进展［J］.华西药学杂志,2005,20(4)：283.
       
       ［3］冯文宇.青蒿油治疗神经性皮炎［J］.四川中医,1985，3：51.
       
       ［4］郑文安,陈德宇,李俊杰.青蒿油治疗皮肤真菌的疗效观察［J］.泸州医学院学报,1988；11(4)：258.
       
       ［5］林伯香，郑义信.青蒿油丸［J］.医院药学杂志，1982，5：35.
       
       ［6］胡 淼，钱国平，苏宝银，等.硅胶柱层析层化青蒿素［J］.华西药学杂志，2005，20（4）：283.