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       【摘要】 
       目的制备复方人参乳膏剂。方法采用微波协助萃取中草药中皂苷有效成分；应用回流法—蒸馏法提取当归有效成分。利用薄层色谱法定性鉴别中草药中皂苷有效成分，紫外分光光度法测定总皂苷含量；采用常温留样观察法考察其稳定性。结果中草药提取工艺方便、快速、制备工艺简单，制剂稳定性好。皂苷线性范围为：0～250 μg·L-1，r=0.999 1，平均回收率为98.29%，RSD为1.72%。结论制剂制备方法可行，质量稳定可控，可应用于临床。
       【关键词】  人参皂苷；乳膏剂；质量控制
       
       Preparation and Quality Control of Complex Ginseng Cream
       LI Xiaobo, ZHANG Xinping, JIN Xiaoping
       Xiangfan First People"s Hospital of Hubei Province, Xiangfan 441000, China
       Abstract:ObjectiveTo prepare Complex Ginseng Cream.MethodsThe microwave-assisted extraction (MAE) technology was used to extract the effective constituent of saponin from Chinese medicinal herb. The method of recirculation-and distillation was used to extract the effective constituent from Angelica. The effective constituent of saponin was identified with thin-layer chromatography and was with ultraviolet spectrophotometry. The long-storage specimen test was used to investigate the stability.ResultsThe extracting technology was convenient and fast, the preparation technology was easy and the stability of preparation was good. The linear range of saponin was 0～250 μg·L-1, r=0.999 1, the mean recovery rate was 98.29%. The relative standard deviation was 1.72%.ConclusionThe preparation technology was feasible, the quality is stable and can be controlled. It can be used for clinic.
       Key words:Ginseng Saponin;  Cream;  Quality control
        复方人参乳膏是湖北省襄樊市第一人民医院于2003年研制开发的中药新制剂，由人参、当归、柴胡、甘草等4味中药提取物与乳膏基质组成，具有益气补血、滋养肌肤、健脾养胃、收敛生肌、抗菌消炎的功效，用于角化性皮肤病效果较好。为了控制药物质量，保证临床用药的安全有效。我们建立了中草药有效成分的提取方法，中草药中主要有效成分皂苷的含量测定和薄层鉴别的质控方法，以及进行了18个月的稳定性考察。现报道如下。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器751G分光光度仪（上海分析仪器厂），HHW21.CU600型水浴恒温箱（上海医疗器械七厂），WD900G型微波炉（顺德市格兰仕微波炉电器有限公司），微量进样器（上海医用激光仪厂），PG320分析天秤（湘仪天秤仪器厂）。
       1.2  试药人参原药材（湖北省襄樊市中药材公司提供，产地：吉林），甘草原药材（湖北省襄樊市中药材公司提供，产地：甘肃），柴胡原药材（湖北省襄樊市中药材公司提供，产地：河北），当归原药材（湖北省襄樊市中药材公司提供，产地：甘肃），人参Re，Rb1对照品（中国药品生物制品检定所），甘草酸铵对照品（中国药品生物制品检定所），香草醛（浙江温州东升化工试剂厂，批号920810），硅胶G（青岛海洋化工厂），正丁醇、甲醇、乙醇、乙醚、冰醋酸、硫酸、醋酸乙酯等均为分析纯。
       2  中草药有效成分提取
       2.1  人参皂苷的提取、纯化取市购人参（生晒参 产地：吉林），置不锈钢容器中，蒸至人参变软，取出，去芦头，切制成1 cm左右大小颗粒状，称取100 g，置开口非金属容器中，加入70%乙醇（介质常数27，对微波是透明的）1 000 ml，充分浸润，放入微波［1］发生器内，进行微波辐照萃取4次（每次更换新溶剂）。所用的微波功率720 W，频率2 450 MHz，辐照时间每次2 min。滤去残渣，合并4次滤液，得乙醇浸提液。残渣加注射用水淹没，加热煮沸30 min，滤去残渣。将水浸液与乙醇浸提液合并，加适量注射用水调乙醇的含量为50%左右，冷却静止24 h使沉淀完全，减压滤过，滤液经过已处理好的氧化铝柱（湿法装柱）层析，收集层析液，加热浓缩至流浸膏、备用。
       2.2  甘草皂苷的提取、纯化取市售甘草饮片（产地：甘肃）碎成1 cm大小颗粒状，称取100 g，置开口非金属容器中，加入pH值为8～8.5的60%乙醇500 ml，充分浸润，放入微波发生器内，进行微波辐照萃取4次（每次更换新溶剂）。所用微波功率540W，频率2 450 MHz，辐照时间4 min/次。滤去残渣，合并4次滤液，得醇浸提液。残渣加注射用水淹没，加热煮沸30 min，滤去残渣，将水浸液与乙醇浸提液合并。冷却静止24 h后，减压抽滤，将滤液水浴加热浓缩至浸膏，加入适量注射用水溶解，洗涤容器2～3次，置分液漏斗中，用乙醚萃取3次，弃去乙醚层，再加入正丁醇溶液萃取5次，合并正丁醇液至分液漏斗中，用适量注射用水洗涤3次，弃去水层，收集正丁醇液，减压回收正丁醇后，加入1/2量的注射用水，加热浓缩至流浸膏、备用。
       2.3  柴胡皂苷的提取、纯化取市售柴胡饮片（产地：河北）碎成1 cm大小颗粒状，称取100 g，置开口非金属容器中，加入65%乙醇溶液800 ml，充分浸润，放入微波发生器内，进行微波辐照萃取6次（每次更换新溶剂）。所用微波功率360 W，频率2 450 MHz，辐照时间每次6 min。滤去残渣，合并6次滤液，得醇浸提液。残渣加注射用水淹没，加热煮沸30 min，滤去残渣，将水浸液与乙醇浸提液合并。冷却静止24 h，减压抽滤，将滤液水浴加热浓缩至浸膏，加入适量注射用水溶解，洗涤溶器2～3次，移置分液漏斗中，用乙醚振摇萃取3次，弃去乙醚层，再用水饱和的正乙醇振摇萃取4次，合并水饱和正丁醇溶液，加入等体积的氨试液，摇匀，放置使分层，分取上层液，减压回收正丁醇至干，加入适量注射用水，加热浓缩至流浸膏，备用。
       2.4  当归有效成分的提取、纯化取市售当归饮片（产地：甘肃），粉碎成粗粉，称取100 g置于圆底回流瓶中，加注射用水1 200 ml室温浸泡溶胀2 d后，进行加热回流浸提3 h，然后将药渣及浸提液移至蒸馏瓶中，在50～60℃，0.09 Mpa条件下［2］，减压蒸馏3 h左右，馏出液的流速控制在2～3 ml/min，馏出液约为浸提液1/4时，停止蒸馏，然后加入相当于馏出液质量10%的氯化钠搅拌，静置使分层，移至分液漏斗中，将当归挥发油（蒿苯内酯）分离出来，装于密闭容器中。剩余的浸提液及药渣加入1%碳酸氢钠调pH值为碱性，继续煮沸30 min后，滤过除去药渣，滤液加热浓缩至1/4液体，用稀盐酸调pH值至2～3移至分液漏斗中，加乙醚振摇萃取4次，30 ml/次，合并乙醚液，水浴加热挥干，残渣加入盛装挥发油的容器中，加适量水调浓度使成流浸膏，备用。
       3  处方与制备
       3.1  处方人参流浸膏60 ml，当归流浸膏50 ml，柴胡流浸膏40 ml，甘草流浸膏60 ml，硬脂酸89.7 g，液状石蜡173.5 g，蜂蜡37 g，单硬脂酸甘油酯52 g，羊毛脂1 g，甘油106 g，三七醇胺2 ml，十二烷基硫酸钠2 g，羟苯乙酯1 g，月桂氮卓酮20 g，香精适量，注射用水加至1 000 g。
       3.2  制备方法按处方量，先取人参流浸膏，柴胡流浸膏，甘草流浸膏、甘油、三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、羟苯乙酯，注射用水加热至80℃作为水相。另取硬脂酸、液体石蜡、蜂蜡，单硬脂酸甘油酯、羊毛脂氮酮加热至80℃作为油相。将油相于细流倒入水相，边倒边向同方向搅拌，待温度降至40℃左右，加入当归流浸膏和适量香精，搅拌混匀，直到形成均匀乳膏，分装，贴签，包装即得。
       4  质量控制
       4.1  性状本品为土黄色细腻乳膏。
       4.2  人参皂苷薄层鉴别
       4.2.1  样品溶液的制备取样品30 g，加入60 ml沸注射用水，分离出水相，先用乙醚提取2次（50，30 ml)，弃去乙醚层，再用水饱和正丁醇提取4次（50，30，30，30 ml），减压回收正丁醇至干，残留物加甲醇溶解，并定量转移至10 ml容量瓶中，作为样品溶液。
       4.2.2  标准品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1加甲醇溶液制成每毫升含2 mg的溶液作为标准品溶液。
       4.2.3  人参皂苷薄层层析［3］取样品溶液及标准品溶液各30 μl，点于同一含0.7%羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶G薄层板上，以展开剂正丁醇醋酸乙酯水（4∶1∶5）上层液为展开剂展开11 cm，取出晾干，喷显色剂硫酸甲醇（1∶1），置105℃加热直至显黄色，Rf值为0.43。
       4.2.4  甘草薄层层析［4］取本品16.67 g（相当于甘草粉末1 g），加甲醇20 ml，水浴加热溶解，放置冷却使分层、滤过，反复2～3次，滤液收集以100 ml烧杯中，水浴加热挥去甲醇，残渣加甲醇溶解至10 ml容量瓶中，作为供试品溶液。另取甘草酸铵对照品20.21 mg加甲醇定溶于10 ml容量瓶中，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）实验，吸取上述两种溶液各10 μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上（含羧甲基纤维素钠），以醋酸乙酯甲酸冰醋酸水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
       4.3  检查
       4.3.1  pH值测定照pH值测定法（《中国药典》2005版附录ⅥG）检测，应不大于8.3［5］。
       4.3.2  微生物限度检查照微生物限度检查法（《中国药典》2005版附录ⅩⅢC）检查，应符合规定。
       4.3.3  最低装量照最低装量检查法（《中国药典》2005版附录ⅫC）检查，应符合规定。
       4.3.4  其它应符合《中国药典》2005版Ⅰ部附录ⅠR乳膏剂项下的有关规定。
       4.4  含量测定
       4.4.1  样品溶液的制备取样品30 g，加入60 ml沸注射用水，分离出水相，先用乙醚提取2次（50，30 ml），弃去乙醚层，再用水饱和正丁醇提取4次（50，30，30，30 ml），减压回收正丁醇至干，残留物加50%甲醇溶液溶解后上氧化铝柱，以50%甲醇溶液130 ml洗脱，收集洗脱液浓缩至干，残留物加甲醇溶解，并定量转移至10 ml容量瓶中，作为样品溶液。
       4.4.2  标准品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1加甲醇溶液制成每毫升含2 mg的溶液作为标准品溶液。
       4.4.3  标准曲线的建立精密量取标准品溶液25，50，100，125 ml置具塞试管中，用热风吹去溶剂，各加香草醛冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸溶液0.8 ml，摇匀、密塞，置60℃水浴中加热15 min，取出冷却至室温，各加入冰醋酸5 ml，摇匀，以随行试剂作为空白对照，于550 nm处（最大吸收波长）测定吸收度，求得回归方程为：Y=1.954X+0.005，r=0.999 1；所测含量在0～250 μg范围内呈良好的线性关系。
       4.4.4  样品回收率实验采用加样法，取10 ml容量瓶3只，各精密吸取已知浓度同一批样品（批号20040105，含量3.9%）溶液1 ml，分别加入0.1,0.2,0.3 ml皂苷标准品溶液，并分别加入甲醇稀释至刻度，在550 nm处测A值，计算回收率结果见表1。表1  回收率测定结果（略）
       4.4.5  样品测定精密吸取样品溶液20 μl置具塞试管内，按标准曲线项下方法测定，代入回归方程，求出每批中3次平均含量。结果见表2。表2  样品中总皂苷含量（略）
       5  制剂稳定性实验
       5.1  离心实验取本品3批各10 g，装入带刻度离心管中，以10 000 r/min离心30 min，取出观察，结果无破乳、分层现象。
       5.2  耐热、耐寒实验取本品3批各30 g，装入密闭塑料盒内，分别置40℃恒温放72 h和-15℃放置72 h，取出观察，均无液化、粗化、分层等现象。
       5.3  保湿性实验取透明蜡纸剪成一定大小（5 cm×5 cm），精密称重后，均匀涂上一层本品后再称重，于（25±1）℃恒温放置6 h后，取出，称重，确定其水分蒸发情况。结果，放置6 h后的称重与未放置时的称重无明显重量差异。表明本品保湿性较好。
       5.4  常温稳定性实验
       5.4.1  方法将3批样品20040301，20040305，20040310在塑合包装条件下，于室温（温度5～30℃，相对湿度40%～90%）下放置18个月，分别在0月，1月，2月，3月，第6个月，第12个月，第18个月分别取出按检测项目考察，即200403～200509。
       5.4.2  检测项目及结果检测项目：性状、鉴别、检查、含量测定、皮肤刺激性。结果见表3～5。表3  制剂稳定性实验报告（略）表4  制剂稳定性实验报告（略）表5  制剂稳定性实验报告（略）
       
       5.4.3  结论复方人参乳膏3批样品按检测项目考察，通过18个月留样观察，结果均符合规定。说明18个月内复方人参乳膏制剂在室温条件下是稳定的。
       6  讨论
        该实验从3味（人参、柴胡、甘草）中草药中所提取的有效成分均为皂苷类化合物，具有较强极性，极性分子接受微波辐射能量后,通过分子偶极以每秒数十亿次的高速旋转产生热效应。微波透过浸提溶剂到达药材细胞内部，由于药材细胞内的维管束和腺胞系统含水量高，故而吸收微波很快升温，使细胞内部的压力增大，当内部压力超过细胞壁所承受的压力时，细胞壁破裂，于是位于药材细胞内的有效成分自由流出，进入浸提溶剂而被溶解。但在微波提取过程中，因乙醇沸点较低，加之皂苷具有表面活性剂样作用，在加热时易产生大量泡沫，因此应根据提取药材量控制好微波剂量和浸提时间，避免浸提溶剂沸腾溢出和有效成分随乙醇蒸气带出，从而影响有效成分的提取。在应用正丁醇萃取有效成分过程中，由于剧烈震荡，在水层与正丁醇层界面上易产生乳化现象，可加入适量氯化钠溶液，使其破乳，这样有利于皂苷的萃取。回收乙醇后的浸提液应放冷后再行过滤，这样可避免高温易溶杂质带入萃取液中，影响有效成分纯度。
        本中药复方制剂中，3味中草药其主要活性成分为皂苷类化合化物，故选择总皂苷量作为含量测定指标，利用薄层色谱法定性鉴别中草药有效成分，以紫外分光光度法测定总皂苷的含量。可有效地检测和控制其复方制剂的质量。
       【参考文献】
         　　［1］元英进，刘明言，董岸杰.中药现代化生产关键技术［M］.北京：化学工业出版社，2002：114.
       
       ［2］郑春生，姚宝书.当归挥发油提取工艺的研究［J］.天津轻工业学院学报，2001，16（1）：10.
       
       ［3］苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术［M］.北京：人民卫生出版社，2000：12.
       
       ［4］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：7.
       
       ［5］奚念朱.药剂学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，1980：389.