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       【摘要】 
       目的建立区带毛细管电泳法分离测定珍菊降压片中芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪的含量。方法采用未涂层石英毛细管柱(75 μm×53 cm , 有效柱长45 cm )，以20 mmol/L硼砂-5 mmol/L磷酸二氢钠(pH 9.0)为运行缓冲液，检测波长210 nm，温度20℃。结果芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪分别在2.25～40.50，0.45～8.10，0.27～4.86，2.70～48.60，2.70～48.60 μg/ml浓度范围内线性关系良好，回收率和重复性良好。结论该法快速准确，适合于珍菊降压片的质量控制。
       【关键词】  区带毛细管电泳 珍菊降压片 芸香苷 绿原酸 木犀草素 盐酸可乐定 氢氯噻嗪
       珍菊降压片是中西药结合治疗高血压病的常用药物，由野菊花膏粉、珍珠层粉及芦丁3味中药和盐酸可乐定与氢氯噻嗪两味西药组成。方中野菊花可清热降火,平肝降压；珍珠层粉可平肝潜阳,安神定惊,清热明目,共为主药。两味西药具有中枢降压和利尿降压作用, 共为辅药。芦丁可降低毛细血管通透性,增加其张力，为佐使药。诸药合用，克服了西药副作用大、中药起效慢的弱点，近年来日益受到高血压病患者的青睐。
        目前有关珍菊降压片中有效成分的测定已有文献报道［1～5］，但其中5种有效成分的同时测定尚未见文献报道。本实验建立区带毛细管电泳法同时分离测定珍菊降压片中芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪的含量。
       1  仪器与材料
        1HPCE-01高效毛细管电泳仪（山东省化工研究院）；N2000色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；岛津UV-2450分光光度计。
        对照品（中国药品生物制品检定所，含量>99％），水为二次重蒸水，其它试剂均为分析纯。珍菊降压片（山西亚宝药业集团股份有限公司，批号060125，060416，070128）。
       2  方法和结果
        2.1  对照品溶液配制  分别精密称取干燥至恒重的芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪对照品适量，以50%甲醇为溶剂制备各25 ml溶液，浓度分别为0.25，0.05，0.03，0.30 mg/ml和0.30 mg/ml。4℃冰箱储存，使用前稀释为不同浓度的工作溶液。
        2.2  供试品溶液制备  取供试品20片，精密称定, 研细, 取约2片量，精密称定。加50%甲醇20 ml/次，超声提取3次，20 min/次，放冷滤过，滤液置100 ml量瓶中, 用少量50%甲醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。进样前按要求稀释并用0.45 μm滤膜滤过。
        2.3  电泳操作条件  未涂层石英毛细管柱(75 μm×53 cm ，有效长度45 cm)，运行缓冲液为20 mmol/L硼砂-5 mmol/L磷酸二氢钠(pH9.0)，重力进样10 s(高度10 cm)，分离电压20 kV, 检测波长210 nm，温度20 ℃。毛细管使用前用0.10 mol/L NaOH、水、0.10 mol/L HCl各清洗10 min进行活化，每次运行间用水、缓冲溶液各冲洗5 min。为了保证重复性，缓冲溶液每运行3次后进行更换。
        在此条件下，珍菊降压片的电泳谱图如图1～2。 
        1.盐酸可乐定  2.绿原酸        1.盐酸可乐定  2. 绿原酸 
        3.氢氯噻嗪    4.木犀草素      3.氢氯噻嗪    4.木犀草素
        5.芸香苷                      5.芸香苷             
        图1  标准溶液的毛细管电泳图谱    图2  样品溶液的毛细管电泳图谱
        2.4  线性关系考察  分别精密吸取芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪对照品溶液各4.5 ml于25 ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，得标准混合液。再分别精密吸取该标准混合液0.5，2.0，3.5，5.0，7.0，9.0 ml各置于10 ml量瓶中,用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以峰面积A对浓度C(μg/ml)进行线性回归。结果见表1。表1  5种分析物的线性关系
        2.5  精密度测定精密吸取“2.4”项下标准混合液3.0 ml于10 ml容量瓶中，定容，摇匀，重复进样6次，测得芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪峰面积的RSD分别是2.45%，3.16%，3.86%，2.08%，1.97%。结果表明精密度良好。
        2.6  重复性测定  精密称量同一批号的珍菊降压片，按“2.8”项下测定6次，测得样品中芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪含量的RSD分别是1.46%，3.52%，3.65%，2.36%，1.83%。结果表明重复性良好。
        2.7  加样回收率的测定  精密称取已测知含量的珍菊降压片适量3份，分别精密加入“2.4”项下标准混合液2.0，4.0，6.0 ml，按“2.8”项下操作。测得芸香苷、绿原酸、木犀草素、盐酸可乐定和氢氯噻嗪平均回收率分别为99.3%，99.6%，100.9%，101.2%，103.2%；RSD分别为3.57%，2.52%，3.18%，2.60%，2.53%（n=5）。
        2.8  样品测定按“2.2”项下制备3个批号样品溶液，分别精密吸取2.0 ml于50 ml容量瓶中，定容，摇匀，并用0.45μm滤膜过滤。进样并记录电泳图，按工作曲线计算样品中5组分含量。结果见表2。表2  样品含量测定结果mg
        样品批号芸香苷绿原酸木犀草素盐酸可乐定氢氯噻嗪06012523.60.2650.1246.518.7206041625.20.1920.0895.259.6307012824.50.2260.1034.686.59
        为每片中含量
       3  讨论
        3.1  工作波长和缓冲体系的选择经分光光度计扫描，并考虑到各组分的检测灵敏度和主要有效成分测定的准确性，选择210 nm作为检测波长。分别比较了硼砂、磷酸盐、硼酸等缓冲液，结果发现，硼砂作为电泳介质基线平稳，磷酸二氢钠作介质分析时间短，但浓度太大时基线不好。因此，本实验选择硼砂和5 mmol/L磷酸二氢钠的混合溶液作为电泳缓冲体系。
        3.2  缓冲溶液的酸度和硼酸浓度对分离的影响本文考察了缓冲溶液的酸度在pH 8～10和硼砂浓度在10～40 mmol/L范围内对分离的影响。pH ＜8.5时，盐酸可乐定和绿原酸不能基线分离，当pH＞9.0时，芸香苷有严重拖尾；随着硼砂溶液浓度增加,分析物的迁移时间增加, 但分离度没有明显提高，却增加焦耳热效应, 造成基线噪音增加。综合考虑，本文选择pH=9.0，浓度为20mmol/L的硼砂溶液。 
        3.3  分离电压、进样时间的影响本实验考察了电压在10～23 kV内、进样时间在2～15 s对分离的影响。结果表明, 随着分离电压的升高，分析物迁移时间降低，峰高增加，但基线噪音增加,灵敏度降低；电压减小，分离度提高但谱带呈展宽趋势，综合考虑,选择20 kV作为分离电压。随着进样时间延长, 峰高增加；当进样时间超过10 s后，峰高变化减慢, 但峰展宽加剧, 本文选择10 s的进样时间。
        中药复方制剂成分复杂，采用毛细管电泳法，由于未涂层毛细管柱易冲洗再生，可保持高效，各成分分离效果较佳。本文通过系统地优化电泳条件，建立了区带毛细管电泳法同时测定珍菊降压片中5种有效成分，方法简便快速，效果良好，为该类药物的质量控制提供了一种有效的分析方法。
       【参考文献】
         ［1］ 闫花丽，吉曙光，黄安军.HPLC 测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量［J］.中成药,2004,26（7）:547.
       
       ［2］ 叶晓镭,支月芳,周 萍.HPLC 法测定珍菊降压片中绿原酸、氢氯噻嗪及芦丁的含量［J］.现代中药研究与实践，2005，19（1）:43.
       
       ［3］ SU Sheng-min，YU Yun-qiu. Simultaneous Determination of Clonidine Hydrochloride ,Hydrochlorothiazide , and Rutin in Zhenju Jiangya Tablet by Capillary Electrophoresis［J］.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences ，2005 , 14(3) :173.
       
       ［4］ 朱卫翔, 杨绍华.反相高效液相色谱法测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量［J］.中南药学，2005，3（5）:279.
       
       ［5］ 高苏亚，党高潮，李 华. 槐角丸中四种有效成分的高效毛细管电泳法测定［J］.中国医药工业杂志，2007，38（4）：290.