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       【摘要】 
       目的考察不同来源粉葛中总黄酮、葛根素的含量。方法采用紫外分光光度法（UV）测定总黄酮含量；采用高效液相色谱法（HPLC）测定葛根素含量，kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 nm，5μm)，流动相为甲醇－水（33：67），流速为1.0 ml·min-1，柱温30℃，检测波长为250 n m。结果总黄酮含量为0.53%～1.03%，回收率为99.69%，RSD<2% (n = 6)；葛根素含量为0.21%～0.49%，回收率为96.11%，RSD<2% (n = 6)。结论不同来源的粉葛药材中总黄酮和葛根素含量间变异较大，其中广东产粉葛，其总黄酮和葛根素含量均较高，平均质量优于广西产粉葛。
       【关键词】  粉葛 总黄酮 葛根素 高效液相色谱
       粉葛为豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根，自古与野葛同作中药葛根用，具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻之功效［1］，临床应用广泛。2005年版《中国药典》首次将粉葛作为分列中药材记载。粉葛中的主要生物活性成分有葛根素等异黄酮类化合物［2］，具有降血压、扩张冠状动脉等多种生物活性，同时粉葛又富含淀粉，因此具有较高的医用和食用价值，现已开发出粉葛淀粉系列多种保健食品。目前，粉葛的栽培面积不断扩大，并出现了许多栽培品种，因此不同来源药材之间有效生物活性成分的含量会有较显著的差异，从而影响药材质量。广东、广西为粉葛药材的主要产地，药源丰富，本文采用比色法及高效液相色谱法对广东、广西所产的不同来源的粉葛中总黄酮及葛根素的含量进行了比较，为粉葛药材质量控制提供实验依据。
       1  仪器与材料
        1.1   仪器P680高效液相色谱仪(戴安公司)； satorius BS 110S 精密天平；unic uv-2100紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）。
        1.2  药材粉葛，产地：广东、广西，经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定，均为豆科植物甘葛藤的干燥根。（来源见表1）
        1.3   试药葛根素标准品（中国药品生物碱制品检定所，批号110752-200511）。甲醇（色谱纯，德国Merck公司），乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂），水为高纯水。   
           2  方法与结果
        2.1   UV法测定不同来源粉葛中总黄酮的含量
        2.1.1  溶液的制备
        对照品溶液的制备：精密称取80℃干燥至恒重的葛根素对照品5.0 mg，置25 ml容量瓶中，用95％乙醇溶解并稀释至刻度。
        供试品溶液的制备：取不同来源粉葛粉末（过三号筛）约1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇100 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml置10 ml容量瓶中，用30％乙醇定容，即得。
        检测波长的选择：取对照品溶液1.0 ml置10 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在200～800 nm波长范围内测定葛根素的紫外吸收光谱，结果显示在250 nm处有最大吸收。另取供试品溶液在200～800 nm波长范围内测定紫外吸收光谱，结果也显示250 nm处有最大吸收，所以选择250 nm为检测波长。
        2.1.2   线性关系考察精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，并各加95％乙醇至1 ml，再加蒸馏水至10 ml，摇匀，以1.0 ml 95％的乙醇加蒸馏水至10 ml的溶液为空白对照，于250 nm测定吸光度。以葛根素含量为横坐标（X），吸光度为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程Y=75.45X－0.01，r=0.999 9。结果显示，葛根素对照品在0.04～0.2　mg内线性关系良好。
        2.1.3   精密度试验取同一浓度的葛根素对照品溶液，重复测定5次，吸光度平均值为0.592，RSD为0.09％，表明仪器精密度良好。
        2.1.4  稳定性试验取同一样品溶液，在0，2，4，12，24 h测定，吸光度平均值为0.690， RSD为0.22％，表明本品24 h内具有良好的稳定性。
        2.1.5  重复性试验取同一批次的粉葛药材6份，按供试品溶液制备方法制成样品测定，测得样品葛根素含量平均值为0.93％，RSD为0.49%，表明本法具有良好的重复性。
        2.1.6   准确度试验称取6份已知葛根素含量的粉葛药材粉末1.00 g，加入对照品约1.0　mg，按供试品溶液制备方法制成样品，测得平均回收率为99.69%，RSD为1.8%，表明总黄酮回收率良好。
        2.1.7  样品总黄酮含量测定取各来源的粉葛药材3份，精密称定1.0 g，按供试品溶液制备方法制成样品，依法测定。结果表明，广州市清平药材市场所售广东产粉葛总黄酮含量均较高，可达1.03％，平均质量优于广西产粉葛。见表1。
        2.2    HPLC法测定不同来源粉葛中葛根素的含量
        2.2.1  色谱条件色谱柱为kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；柱温：30℃；流动相：甲醇－水 (33：67)；检测波长250 nm；流速：1.0 ml·min-1；理论板数按葛根素计算不低于4 000。见图1,2。
        图1  葛根素对照品溶液HPLC色谱图      
        图2  粉葛药材溶液HPLC色谱图
        2.2.2  溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品5.0 mg，置25 ml容量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，即得0.2 mg/ml对照品储备液。
        供试品溶液的制备：取不同来源粉葛粉末（过3号筛）约0.8 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。
        2.2.3  线性关系考察精密量取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0 ml，置10 ml容量瓶中，加30%乙醇定容，摇匀，分别吸取上述各浓度对照品溶液20μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以葛根素含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程：Y=1464.5X-0.678 6，r=0.999 9。结果表明葛根素在0.2～1.6μg内呈良好的线性关系。
        2.2.4   精密度试验精密吸取同一对照品溶液20μl，重复进样5次，测定峰面积平均值为57.69，RSD为0.61％，表明仪器精密度良好。2.2.5  稳定性试验精密吸取同一样品溶液20 μl，分别于0，2，4，24，36 h测定，结果显示各时段峰面积平均值为57.07，RSD为1.40％，表明本品36h内稳定性良好。
        2.2.6  重复性试验取同一来源的粉葛6份，分别独立按供试品溶液制备方法制成样品溶液，在上述色谱条件下测定，测得的平均含量为0.23％，RSD为1.40％，表明本法重复性良好。
        2.2.7  准确度试验精密称取6份已知葛根素含量的同一样品粉末约0.8g，并加入一定量的对照品，按供试品溶液制备方法制成样品溶液，精密吸取20μl，在上述色谱条件下测定，计算回收率。结果显示平均回收率为96.11％，RSD为1.09%，表明葛根素回收率良好。
        2.2.8  样品含量测定取不同来源的粉葛，精密称定0.8g，按供试品溶液制备的方法处理，在上述色谱条件下测定。结果显示，广州市清平药材市场所售广东产粉葛，除个别不符合药典要求，其余药材葛根素的含量均较高，可达0.49％，平均质量优于广西产粉葛。见表1。表1  不同来源粉葛中总黄酮和葛根素含量测定结果
       3  讨论
        文献报道了多种提取葛根总黄酮的方法，如索氏提取、超声提取和加热回流等［3～5］，本研究对不同提取方法及不同醇浓度提取总黄酮进行比较，结果以30％乙醇加热回流提取所得总黄酮含量最高，故选用该法作为总黄酮的提取方法。
        曾选用2005版《中国药典》规定的甲醇－水(25:75)为流动相，结果保留时间较长，可达20min，通过优化选择，以流动相甲醇－水(33:67)的分离效果较好，样品主峰达到良好的基线分离，峰形良好，且保留时间大大缩短。经方法学考察，表明该方法具有较好的精密度、稳定性、重现性和准确性，可用于粉葛药材的质量控制。
        上述7种不同来源的粉葛药材中总黄酮和葛根素含量参差不齐，但两者变化是同向的，其中广州市清平药材市场所售广东产粉葛，其总黄酮和葛根素含量均较高，平均质量优于广西产粉葛。
       【参考文献】
         ［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：人民卫生出版社，2005：203.
       
       ［2］ 田宏哲,王 华,关亚风. 液质联用分析葛根提取物及中药片剂中异黄酮类化合物［J］.色谱, 2005, 23 (5) : 477.
       
       ［3］ 李青坡，王永圣，游 剑，等. 葛根总异黄酮提取工艺的研究［J］.中国药业，2004，13（5）：46.
       
       ［4］ 周文斌. 葛根总黄酮提取工艺条件的研究［J］.渝州大学学报（自然科学版），2002，19（4）：9.
       
       ［5］ 安伟建，夏光成，郭 瑞. 不同产地葛根总黄酮含量的比较［J］.中国中药杂志，1999，24（6）：339.