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       【摘要】 
       目的研究补阳还五汤药浴对周围神经损伤后修复的作用。方法采用雌性Wistar大鼠90只， A组为补阳还五汤药浴组，B组为补阳还五汤口服组，C组为单纯端端缝合组，每组30只。造模采用大鼠坐骨神经横断损伤模型，造模成功后7 d起，A组大鼠放入补阳还五汤温热药液中游泳，隔日1次，5 min/次； B组用补阳还五汤制剂灌胃，隔日1次，3 ml/次；C组大鼠进行单纯端端缝合。3组均于术后6周取材进行电生理学、组织形态学观察。结果补阳还五汤药浴可以明显减少神经损伤后运动神经元和感觉神经元的死亡，防止支配肌肉的萎缩变性，促进损伤后功能的恢复。结论补阳还五汤药浴可以在神经元、损伤局部、终末效应器多个平面、多个角度对神经修复产生积极作用。
       【关键词】  周围神经；损伤与再生；补阳还五汤；药浴
       Effect of Buyang Huanwu Decoction Medicated Bath after the Peripheral Nerve Injury
       SHI Dujuan,LING Li,XUE Jinwei
       1.The Postgraduate Department of Heilongjiang University of Traditional Medicine, Haerbin,Heilongjiang 150040,China； 2.Bethune Medical Department of Jilin University, Changchun, Jilin 130021, China
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of Buyang Huanwu Decoction medicated bath on neurogenesis after the peripheral nerve injury.Methods90 wistar rats were randomly divided into 3 groups, group A was Buyang Huanwu Decoction medicated bath ,group B was Buyang Huanwu Decoction administration, group C simply had an end-to-end sutured operation serve as control. The model of ischiadic nerve transsection were adopted. After 7 days, wistar rats of group A  swam in the warm Buyang Huanwu Decoction physic liquor, 5 minutes a time every other day. The intragastric administration was given in group B 3 ml a time every other day. Group C simply had an end-to-end sutured operation. Electrophysiology and histomorphology were detected after 6 weeks. ResultsThe Buyang Huanwu Decoction medicated bath could obviously reduce the death number of motor neurons and sensory neurons after nerve injury, prevent the atrophy and degeneration of gastrocnemius muscle and promote the functional recovery after injury. ConclusionThe Buyang Huanwu Decoction medicated bath may play an active role in the nerve repair of neuron, damage region and ending effective apparatus from multiple facts.
       Key words：Peripheral nerve;  Injury and restore;  Buyang Huanwu Decoction；  Medicated bath
        周围神经损伤属于细胞损伤的范畴［1］，其再生的基础和临床研究虽取得了长足的进步，但目前周围神经损伤修复后功能恢复仍欠理想。究其原因，对于每一条神经纤维来说，神经元、神经干中的支持细胞及其终末器官是互相营养的。周围神经干损伤后，其上位神经元、整个神经干及终末器官均会发生变性甚至坏死。所以，周围神经损伤的修复也是一个综合的修复过程。近年来，中医中药以其多靶点、多途径的综合疗效优势［2］愈来愈受到人们的重视。神经损伤属于中医的“痿证”，表现为肢体功能障碍，肌肉萎缩，感觉消失，治疗上应补气活血通络，补阳还五汤在临床治疗和我们的前期研究中有良好的作用。因此，我们设计了动物实验来进一步研究补阳还五汤药浴及口服对周围神经再生的影响。
       1  材料与方法
       1.1 材料
       实验于2006-03-07在黑龙江中医药大学实验中心完成。雌性Wistar大鼠，90只，体重220～250 g，购自黑龙江中医药大学动物实验中心。中药煎剂: 生黄芪120 g，当归尾6 g，赤芍6 g，川芎3 g，红花3 g，地龙3 g，桃仁3 g。方药组成采用补阳还五汤原方，5倍剂量为1剂。混合均匀，煎煮前预先用清水浸泡20 min，加水量约5 000 ml，煮沸后文火再煎约20 min，煎得剂量约3 000～3 500 ml，自然冷却至微温，进行灌胃或药浴。中药材及煎制均由黑龙江中医药大学附属第一医院煎药室提供。
       1.2  方法
       按手术先后顺序随机分成A、B、C 3组，A组为补阳还五汤药浴组，B组为补阳还五汤口服组。C组为单纯端端缝合组，每组30只。造模采用大鼠坐骨神经横断损伤模型：右坐骨神经于坐骨结节下0.5 cm水平横行切断，用9/0无创尼龙缝合线均匀缝合神经外膜3针。造模成功后7 d起，A组大鼠放入补阳还五汤温热药液中游泳，隔日1次，5 min/次；B组用补阳还五汤制剂灌胃，隔日1次，3 ml/次；C组大鼠进行单纯端端缝合。3组均于术后6周取材进行电生理学、组织形态学观察。
       1.2.1  坐骨神经功能指数（SFI）测定
       自制大鼠行走箱。术后3周起，隔日进行SFI测定。碳素墨水刷染大鼠双后足，放在底面铺设白纸的行走箱通道上行走，可清晰记录大鼠行走过程中双侧后足足印7～8个，选取质量较好的正常侧足和实验侧足测定各变量，将数值代入Bain公式［3］计算SFI。
       1.2.2  神经传导速度（NCV）测定
       术后6周各组随机取15只大鼠，1%戊巴比妥钠腹腔麻醉，切取术侧坐骨神经全长，采用Pclab生物信号采集处理系统（黑龙江中医药大学生理教研室提供）记录诱发电位并计算出坐骨神经传导速度（NCV）。
       1.2.3  组织形态学观察L4,L5段脊髓及背根神经节术后6周各组取15只大鼠，麻醉后经左心室向升主动脉插管后，灌入洗涤液(生理盐水200 ml，肝素钠4 mg, 盐酸普鲁卡因1.0 g)后， 4%多聚甲醛300 ml心脏灌注固定，取脊髓L4～L5段和双侧L4，L5脊神经节置于4%多聚甲醛液中固定2 d后，进行常规石蜡包埋，连续切片，片厚6 μm。石蜡切片脱蜡，切片入1%焦油紫染液，37℃温箱中浸染1 h后，蒸馏水速洗，95%乙醇迅速分化，镜检尼氏体呈紫色，其他组织几乎无色，无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。应用美国Image-pro plus专业图像分析系统进行观察，每张切片随机抽取5个同倍率视野，进行图像分析。
       
       神经损伤局部：实验侧坐骨神经测定NCV后，距吻合口近远端各0.5cm处横行切断坐骨神经，常规HE染色，并应用美国Image-pro plus专业图像分析系统进行观察及分析。
       
       失神经支配腓肠肌：各组大鼠麻醉状态下取大鼠双侧腓肠肌，称湿重后取中份肌组织作常规HE染色，切片同样应用图像分析系统进行观察及分析。
       1.2.4  主要观察指标SFI，NCV及组织形态学观察。
       1.2.5  统计学分析数据采用±s表示，数据统计分析均在SPSS11.0软件中进行，采用方差分析，多组间两两比较用LSD法。
       2  结果
       2.1  坐骨神经功能指数（SFI）各组变量代入Bain公式计算SFI数值，所得结果以周为单位进行统计学分析。数据表明：补阳还五汤药浴组明显优于口服组，口服组明显优于单纯端端缝合组。结果见表1。表1  3组SFI比较（略）
       2.2  神经传导速度（NCV)实验测得A组6周时NCV值为(18.2±5.1)m/s，B组为(17.6±4.8)m/s, C组为(12.5±4.7)m/s。数据表明：补阳还五汤药浴组和口服组均明显优于单纯端端缝合组，差异具有统计学意义（P<0.05）。但药浴组和口服组未见明显差异（P>0.05）。
       2.3  组织形态学变化
       2.3.1  L4,L5段脊髓及背根神经节A组表现为脊髓前角运动神经元数目减少，部分神经元轮廓不清，神经元尼氏体欠清晰，脊神经节内神经元的染色灰度和大小形态改变不大；B组表现为前角运动神经元数量较A组减少，较多神经元轮廓不清，尼氏体模糊，脊神经节内变化介于A，C两组之间；C组表现为前角运动神经元数目显著减少，神经元轮廓不清，细胞体积变小，分布分散，尼氏体模糊不清，脊神经节内神经元数量明显减少，形态不规则。各组神经元数目见表2。表2  术后6周各组脊髓前角运动神经元及脊神经节感觉神经元数目比较（略）
       2.3.2  坐骨神经形态学改变A组表现为神经纤维趋于成熟，可见规则的接近正常的迂回波浪状排列通过吻合口；B组表现为神经纤维走行欠规则，可见纤维缠结，间质胶原增生；C组表现为神经纤维走行紊乱，与间质胶原纤维相互缠绕交结，间质大量胶原纤维增生，将新生的神经纤维包绕分解。
       2.3.3  腓肠肌形态学结果A组表现为肌纤维略减少，形态较规则，结构尚清晰，染色较均一，大部分肌细胞核仍紧贴于肌纤维的周边，肌纤维肿胀与空泡样变性不明显，可见结缔组织增生，细胞间隙增宽，肌纤维轻度萎缩；B组表现为肌纤维较A组减少，形态不规则，部分结构紊乱，可见肌纤维变性，结缔组织增生，细胞间隙增宽，肌纤维萎缩较明显；C组表现为肌纤维显著减少，且形态不规则，大小不一，结构紊乱，皱缩明显，有些肌纤维肿胀变性伴有空泡，细胞核体积明显增大，分布在肌纤维边缘，部分核向肌纤维内迁移，细胞间隙明显增宽，结缔组织明显增生，肌纤维萎缩明显。
       3  讨论
        补阳还五汤之传统医方出自清代名医王清任所著《医林改错》，是治疗多种原因引起的瘫痪、肢体痿软等病症的著名组方。现代研究表明补阳还五汤能改善血液流变性，抑制血小板聚集，减少微血栓发生，促进毛细血管的生长，改善损伤处神经的微循环，促进氧和能量代谢，使神经组织得到较多的血液和氧气，使有氧代谢顺利进行［4］。药浴疗法是以中医基本理论为指导原则，用中药煎汤洗浴患者的局部或全身，利用药物和水的特性，达到防治疾病目的的一种外治疗法，因此其治疗仍以辨证论治为原则，正如清代医家吴师机指出“外治之理即内治之理”。所以，从根本上来说，药浴疗法与内服法在作用机制上是相似的。药浴疗法不仅具有水疗的作用，还具有中药对机体产生医疗效能的优势, 通过透皮作用使药物有效成分通过局部进入体内，直达病所，既避免了药物的损耗，又提高了药物的利用度，达到治疗或辅助治疗的目的［5］。
       
       周围神经损伤属于中医“痿证”范畴，表现为肢体功能障碍，肌肉萎缩，感觉消失，治疗上应补气活血通络。周围神经损伤后的修复是一个综合的过程。需要尽量减少神经元的死亡、需要加快对瓦勒变性坏死组织碎片的清除、需要较强的趋化作用引导感觉、运动神经纤维正确长入相应效应器、需要延缓效应器的萎缩，所以行之有效的修复方法应该是对损伤全方位的修复。本实验结果表明，补阳还五汤药浴能减少神经损伤后的运动和感觉神经元死亡，维持神经元正常的结构和功能，还能促进再生神经纤维长入远断端，减少与间质胶原纤维的相互缠绕，减少肌纤维的变性，抑制结缔组织增生，减轻肌肉萎缩。补阳还五汤药浴促进周围神经损伤后的修复，体现了中医药多靶点、多途径的疗效优势。关于其作用的机理，我们认为主要是增加了局部营养，促进了微循环的建立，改善了再生微环境，至于其作用机制，我们将会进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］顾立强,裴国献.周围神经损伤基础与临床,第1版［M］.北京:人民军医出版社,2001：1.
       
       ［2］王亚军.中药促周围神经再生的实验研究集释［J］.中医药学刊,2003，21(2):295.
       
       ［3］Bain JR, Mackinnon SE, Hunter DA. Funetional eral nation of complete sciatic, peroneal,and posterior tibial nerve in the rat［J］.Plast Reconstrsurg,1989，83(1): 129.
       
       ［4］张继平,李长龄,张玉萍,等.补阳还五汤对血小板活化因子诱导的家兔血小板聚集的影响［J］.中国中医药科技,2003，7(1):16.
       
       ［5］李华南,江 涛.药浴疗法的方法学思考［J］.中医外治杂志,1999，8(1): 7.