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       【摘要】 
       目的建立高效液相色谱法测定小儿导赤片中栀子苷含量的方法。方法固定相为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)，以甲醇-水(25∶75)为流动相 ,流速为1.0 ml/min ，柱温为30℃，检测波长为238 nm。结果栀子苷在0.034 5～1.15 μg( r = 1) 范围内线性关系良好，平均回收率为99.09%，RSD为0.99%。结论该方法简便、快速、结果准确可靠,适用于小儿导赤片的质量控制。
       【关键词】  高效液相色谱法；小儿导赤片；栀子苷
       Determination of Genpioside in Xiaoer Daochi Tablets by HPLC
       XIAO Peiyun，YANG Yongshou，LIU Guangming
       (Faculty of Pharmacology, Dali University, Dali,Yunnan 671000,China)
       AbstractObjectiveTo develop the analysis method for determination of the content of genpioside in Xiaoer Daochi Tablets by HPLC.MethodsThe chromatographic condition was Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),a mixture of methanol-water(25∶75) was used as the mobile phase with a flow rate of 1.0 ml/min and the detection wavelength was 238 nm at 30℃. ResultsThe calibration curve was good linear in the range of 0.034 5～1.15 μg(r=1) for genpioside. The average recovery and RSD were 99.09% and 0.99%(n=5）.ConclusionThe method is convenient, rapid, accurate and can be used for quality control for production of Xiaoer Daochi Tablets.
       Key wordsHPLC；  Xiaoer Daochi Tablets;   Genpioside
        小儿导赤片是由大黄、栀子、滑石、地黄、甘草、木通、茯苓7味药经加工制成的纯中药制剂，有清热利尿的功效。用于口舌生疮、咽喉肿痛、牙根出血、腮颊肿痛、爆发火眼、大便不利、小便赤黄，效果显著。现行部颁标准中无含量测定项，且处方组分中栀子为主要成分［1］。本实验根据栀子苷的理化性质［2］，建立了高效液相色谱法测定小儿导赤片中栀子苷的含量。现将结果报道如下。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器 
       Agilent 1100 高效液相色谱仪，包括G1315A/B DAD检测器，G1313A ALS自动进样器，Agilent 1100 色谱工作站(美国安捷伦科技有限公司) ；梅特勒电子天平AE240（瑞士）；SZ-97 自动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；超声波清洗器（上海科导超生仪器公司）。
       1.2  药品与试剂 
       甲醇(色谱纯)、水(重蒸馏纯净水)、栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号749-200308)、栀子对照药材（市售，由大理学院药学院生药学教研室鉴定）、小儿导赤片（大理白族自治州中药制药股份有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备
       精密称取栀子苷对照品11.5 mg，置10 ml 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释，定容至刻度，摇匀，作为储备液。
       2.2  供试品溶液的制备
       取供试品20片，精密称定，求出平均片重，研细，精密称取约0.3 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量,超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液10 ml 于25 ml 容量瓶中用甲醇稀释并定容，即得供试品溶液。
       2.3  阴性对照溶液的制备
       按处方制备工艺制得不含栀子的阴性试样。按“2.2”项下的方法制备成栀子阴性对照液。
       2.4  栀子对照药材溶液的制备
       取栀子对照药材按“2.2”项下的方法制备。
       2.5  色谱条件及系统适应性实验
       色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为甲醇-水(25∶75)；流速1.0 ml/min ；柱温30℃；检测波长238 nm［3］。分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液、栀子溶液10 μl进样，按上述色谱条件记录色谱图，理论塔板数按栀子苷峰面积计算不低于4 000，分离度不低于2.0，栀子苷、供试品、阴性对照、栀子的色谱图如图1～4。 
       2.6  线性关系及标准曲线
       精密吸取上述储备液配制成0.115，0.057 5，0.034 5，0.011 5，0.005 75，0.003 45 mg/ml的对照品溶液，取10μl进样，按上述色谱条件测定,以进样量（μg）为横坐标，锋面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：A =1356C - 2.425 8(r = 1)。结果表明栀子苷在0.034 5～1.15 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
       2.7  精密度实验
       取上述对照品溶液,连续进样6次，进样量为10 μl，RSD为0.31%。
       2.8  重复性实验
       取同一批样品（061103）6份，精密称定,按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件分别取10μl进样，测定栀子苷的含量，用回归方程计算，结果栀子苷的平均含量为2.448 9 mg/片，RSD为1.23%。表明重复性较好。
       2.9  稳定性实验
        
       取同一供试品溶液,每隔2 h进样，测定峰面积，共测6次。结果表明供试品溶液在10 h内稳定，RSD 为1.54%。
       2.10  加样回收率实验
       
       精密称取已知栀子苷含量的样品粉末约0.2 g，共取5份，分别精密加入对照品贮备液1 ml，按含量测定方法测定,计算回收率。结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）
        结果表明，该方法加样回收率为99.09%，RSD为0.99%，表明测定结果准确度好。
       2.11  样品的测定
       精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μl，在上述色谱条件下进行测定。10批样品测定结果见表2。表2  样品测定结果（略）
        根据上述10批小儿导赤片样品中栀子苷的含量测定和分析，含量差异较大，这与投料的药材质量有关，建议药品中栀子苷含量限度不低于2.1 mg/片。
       3  讨论
        曾采用甲醇-水(1∶1)对样品中的栀子苷进行回流提取，流动相乙腈-水(15∶85)进行分析［4］，结果峰形不好，且测得样品中栀子苷的含量偏低，提取不完全。多次实验后，发现样品采用甲醇直接超声提取，流动相以甲醇-水(25∶75)，流速1.0 ml/ min ，柱温30℃进行分析，样品中栀子苷提取完全，分离效果和峰形均好。
        通过测定不同批号小儿导赤片中栀子苷的含量，发现栀子苷的含量差异较大，而处方组分中栀子为主要成分，因此本文建立了高效液相色谱法测定栀子苷的含量，能够有效地控制该药品的质量。
        本法样品前处理简单，色谱条件成熟稳定，测定结果重复性好，可以作为小儿导赤片质量标准中栀子苷的含量测定方法。
       【参考文献】
         　　［1］中华人民共和国卫生部药政局.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂,第13 册［S］.1997:194.
       
       ［2］国家药典编委会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工出版社,2000:493.
       
       ［3］戴向东. RP-HPCL测定复方溪黄草颗粒中栀子苷的含量［J］.中成药,2003, 25 (12)：1015.
       
       ［4］孙文基,谢世昌. 天然药物成分定量分析［M］.北京:中国医药科技出版社,2003:187.