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       【摘要】 
       目的研究经光合细菌代谢前后六味地黄汤对免疫力低下动物的药理作用。方法采用氢化可的松造成免疫力低下模型，观察六味地黄汤生物制剂和六味地黄汤分别对小鼠免疫器官、吞噬指数和迟发型变态反应的影响。结果六味地黄汤生物制剂能明显提高小鼠脾指数（P＜0.05），提高吞噬指数（P＜0.05），增强迟发型变态反应（P＜0.05），而同等剂量的六味地黄汤作用不明显。结论六味地黄汤生物制剂在增强免疫力方面优于传统的六味地黄汤水煎剂。
       【关键词】  六味地黄汤；光合细菌；免疫；小鼠；药理作用
       The Effects of Liuweidihuangtang Biological Preparation on Hydrocortisone Model
       CHEN Yanfen,ZANG Jianwei,TANG Chunping,TAO Suhong，YANG Chaoyan，ZHAO Yue
       1.School of Chinese Medicine,Guangdong College of Pharmacology ,Guangzhou,Guangdong 510006,China;
       2.The MA Student,School of Chinese Medicine,Guangdong College of Pharmacology, Guangzhou,Guangdong 510006,China
       Abstract：ObjectiveTo compare the effects of Liuweidihuangtang and the biologic preparations (PSB) on hydrocortisone model.MethodsThe immunorepressive model was induced by hydrocortisone in mice, and the immune organs, carbon phagocytic index,and delayed type hypersensitive reaction (DHTR) were detected.ResultsThe biologic preparations increased spleen index of the mice evidently(P＜0.05),increased the carbon phagocytic index(P＜0.05),and obviously enhanced DHTR(P＜0.05).But the same dose decoction of Liuweidihuangtang had no obvious effects.ConclusionsThe PSB-metabolized Liuweidihuangtang shows obvious immunomodulating effects and it is superior to the traditional Liuweidihuangtang.
       Key words：Liuweidihuangtang;  Photosynthetic bacteria(PSB);  Immunity;  Mouse;  Pharmcological effects
       
       六味地黄汤由宋代名医钱乙首创，是中医著名的滋补肾阴传统代表方剂，方由熟地、山茱萸、山药（三补）和泽泻、丹皮、茯苓（三泻）所组成，主治肾阴不足证，从古到今在中医临床广为应用。光合细菌（PSB）是一种以光为能源的厌氧细菌，在自然界中的碳素循环和物质转化中起着重要作用，而且营养成分非常丰富，含有大量的蛋白质和氨基酸，是一种优质蛋白源，富含胡萝卜素，此外还含有多种生物活性成分。近年来由于发现 PSB含有丰富的营养药用成分及其独特的生物转化功能，在医药保健品方面的应用逐渐受到国内外研究者的关注［1］。
        本研究通过引入 PSB 生物发酵技术，探索性地研制了经 PSB 生物代谢后的新型六味地黄汤生物制剂（以下简称“生物制剂”），并以免疫力低下动物模型为基础，比较该生物制剂与传统的六味地黄汤水煎剂的药理作用。
       1  材料
       1.1  药物和试剂氢化可的松，天津药业焦作有限公司，批号 05091212。光合细菌，显微镜下观测含活菌数109 个。
        六味地黄汤制备：取熟地黄 240 g，山茱萸 120 g，山药120 g，泽泻 90 g，牡丹皮 90 g，白茯苓 90 g，置于玻璃烧杯内，加入 5 倍蒸馏水浸泡 2 h ，文火煮沸 30  min，过滤。药渣再加 3 倍量水继续煎煮，煮沸20 min过滤。合并 2 次滤液，水浴浓缩至 1 500 ml，4℃ 冰箱保存备用。
       1.2  动物NIH 小鼠，体重 18～22 g，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：2005A011，正常饲养 3 d 后供试。
       2  方法与结果
       2.1 对小鼠免疫器官的影响
       取 NIH 小鼠，雌雄各半，随机分成 5 组，即正常组、模型组、六味地黄汤组、光合细菌组、生物制剂组。各组动物每天灌胃给予相应的药物 0.2 ml/10 g，正常组予以同容量的蒸馏水，1 次/d，连续 8 d 。与此同时，除正常对照组外，其余各组动物均同时皮下注射氢化可的松 40 mg/kg 以造成免疫力低下模型，1 次/d ，连续 8 d 。末次给药1 h 后脱臼处死动物，称取脾、胸腺重量，计算脏器指数，比较各组差异。结果见表1。表1  六味地黄汤生物制剂对小鼠免疫器官的影响（略）
        结果表明，模型组免疫器官指数与正常组相比明显降低（P＜0.01），生物制剂和六味地黄汤能明显改善脾指数（P＜0.05），而对胸腺指数的影响统计学意义不明显。
       2.2  对小鼠非特异性免疫功能的影响
       参考文献方法［2］。取 NIH 小鼠，雌雄各半，按上述方法分组、造模、给药。于末次给药后1 h ，尾静脉注射印度墨汁 5 ml/kg体重，于注射后2 min 和 8 min 分别从小鼠眼底静脉丛取血20 μl，加入 0.1%碳酸氢钠溶液 2 ml 中摇匀。用 722 分光光度计测 680 nm 下光密度值（OD），分别以OD2 和OD8 表示 2 min 和 8 min 取样的光密度，以空白小鼠血与0.1% 碳酸氢钠溶液混合液调零点。最后处死小鼠，取脾脏和肝脏称重，按下列公式计算廓清指数K和吞噬指数α值。表2  六味地黄汤生物制剂对小鼠碳廓清能力的影响（略）
       
       结果表明，模型组廓清指数和吞噬指数明显降低（P＜0.05），生物制剂能使廓清指数和吞噬指数增加（P＜0.05），使小鼠免疫力增强，而六味地黄汤在该实验条件下无此作用。
       2.3  对小鼠迟发型变态反应的影响
       取NIH 小鼠，雌雄各半，按上述方法分组、造模、给药。给药后第10 天，腹部去毛约3 cm×3 cm，在去毛部位涂1%二硝基氟苯50 μl，于给药后第 14 天再以1%二硝基氟苯 10 μl 涂右耳，24 h 后处死小鼠，用 8 mm 打孔器打取两耳相同部位的耳片，称取重量，以左右耳片重量之差为肿胀度。结果见表3。表3  六味地黄汤生物制剂对小鼠迟发型变态反应的影响（略）
       
       结果表明，生物制剂组的耳肿胀度显著高于模型组和传统六味地黄汤水煎剂组，而传统六味地黄汤在该剂量下并未体现作用。
       3 讨论
        近年来生物技术在中药研究开发中已经显露出其诱人的前途，具有广泛的应用前景［3］。本研究通过引入光合细菌对传统六味地黄汤进行发酵处理，获得新型的生物制剂。现代药理学实验研究表明，六味地黄汤具有调节免疫功能作用。本研究主要从免疫器官、非特异性免疫、细胞免疫等方面比较研究经光合细菌发酵处理前后的六味地黄汤对免疫功能低下小鼠的作用。
       
       免疫抑制剂氢化可的松可使胸腺、脾脏萎缩，重量减轻，本实验结果显示，六味地黄汤、生物制剂均可明显拮抗氢化可的松所致的脾脏萎缩，提示两者具有一定的免疫增强作用。碳粒廓清实验反映肝脏的枯否细胞和脾脏巨噬细胞的吞噬功能，迟发型变态反应是依赖细胞免疫的反应。本实验结果表明，生物制剂能明显提高免疫功能低下小鼠廓清指数和吞噬指数，增强小鼠迟发型变态反应，说明该生物制剂对非特异性免疫和细胞免疫功能都有增强作用，而同等剂量的六味地黄汤则未显示明显作用。上述实验还提示该生物制剂增强免疫的机理可能与增强脾脏、细胞免疫功能有关。
       
       综上所述，六味地黄汤生物制剂对免疫系统具有明显的促进作用，且其作用明显优于同等剂量的传统六味地黄汤煎剂，但它的有效成分和作用机制有待进一步研究。此外，由于光合细菌的特殊性能，使得该生物制剂避免了中药水煎剂的缺陷，在实际应用中携带保存更方便，因而是一种值得进一步研究和推广应用的新型生物制剂。
       【参考文献】
         　　［1］史国富.光合细菌在医药保健品方面的应用进展［J］.科技情报开发与经济,2003,13(7):99.
       
       ［2］徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社,1991:1223.
       
       ［3］姜海英.生物技术在中药研究中的优势与开发前景［J］.中医药学刊,2003,21(1):99.