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       【摘要】 
       目的测定健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，制定健脑补肾胶囊的质量标准。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量。结果桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好、精密度高、稳定性好、重复性符合要求，经加样回收率实验，桂皮醛平均回收率为99.00%，RSD为1.56%，表明该方法的准确度高。结论所研究的方法能较好地测出健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，并可用以有效控制健脑补肾胶囊的质量。
       【关键词】  健脑补肾胶囊； 桂皮醛； 高效液相色谱法
       本品来源于健脑补肾丸［1］，健脑补肾丸为中药保护品种，为更好地促进吸收，笔者研制了健脑补肾胶囊，并在制定其质量标准时增加了含量测定项。采用高效液相色谱法，对方中主要成分肉桂、桂枝进行含量控制。参照《中国药典》［2］2005年版Ⅰ部肉桂药材含量测定方法，建立高效液相色谱法测定本品中桂皮醛含量的方法。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器AG-135型电子分析天平（梅特勒），高效液相色谱仪（LC-10AT），SPD-10Avp检测器，Maxsil  C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-水（35∶75）为流动相；检测波长为290 nm；流速1.0ml/min；柱温25℃。
       1.2  对照品桂皮醛（中国药品生物制品检定所，约2 ml， 710-9005）。归一化法测定，以5倍量标准浓度进样，本品纯度为99.23%。
       1.3  试剂乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
       1.4  样品由本实验室制备。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件选择
       2.1.1  检测波长选择精密称取桂皮醛对照品适量，加甲醇制成每毫升含15 μg的溶液，照分光光度法（《中国药典》2005年版Ⅱ部附录Ⅳ A），在波长200～400 nm的范围内扫描，结果波长为290 nm时桂皮醛有最大吸收。参照《中国药典》2005年版Ⅰ部肉桂含量测定项下色谱条件，因此选择290 nm作为桂皮醛的紫外检测波长。
       2.1.2  流动相选择参照有关参考文献，初步选定乙腈-水作为桂皮醛含量测定流动相系统，经梯度洗脱遴选，最终确定乙腈-水（35∶75）为流动相。
       2.2  样品处理条件的选择
       2.2.1  提取溶剂选择取本品内容物约0.6 g，共3份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入甲醇、乙醇、氯仿25 ml；称定重量，超声处理（120 W，40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定重量，以同种溶剂补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。各吸取20 μl注入液相色谱仪，测定。结果以甲醇、乙醇处理样品时，桂皮醛含量无明显差异，但乙醇处理样品，提取物质较多，桂皮醛峰处有干扰，以氯仿处理样品，提取不完全，以甲醇处理样品，桂皮醛获得良好分离，故选择以甲醇作为提取溶剂。
       2.2.2  提取时间选择取本品内容物约0.6 g，精密称定，共3份，各置锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，称定重量，分别超声处理20，30，40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量。摇匀，滤过，取续滤液，即得。各吸取20 μl注入液相色谱仪，测定。结果表明，超声处理30，40 min桂皮醛含量无明显差异，桂皮醛基本提取完全，因此确定该样品超声时间为30 min。
       2.2.3  供试品溶液制备取装量差异项下本品内容物约0.6 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
       2.3  线性关系的考察精密称取桂皮醛对照品20 mg（19.25 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密吸取5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml各置10 ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液，进样(20 μl定量环)，测定峰面积，记录色谱图在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内，以色谱峰面积对样品进样浓度作曲线(见图1)。得回归方程为：Y=159 919x-14 402，r=0.999 9。
        以上结果表明，在7.70～38.5μg/ml范围内，桂皮醛峰面积值与进样浓度有良好的线性关系。
       2.4  阴性对照实验取不含肉桂和桂枝的阴性试制样品0.6 g，精密称定，同“供试品溶液制备”项下，同法处理后，制得阴性对照液，分别取阴性对照液、供试品溶液、对照品溶液各进样20 μl，记录色谱图。
        结果表明，在阴性对照图谱中，桂皮醛峰处无干扰。
       2.5  精密度实验取桂皮醛对照品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，峰面积积分值的RSD为0.81%，表明仪器的精密度良好。
       2.6  稳定性实验取同一份供试品溶液分别于0，2，4，6，8，12 h进样，结果表明供试品溶液在12 h内峰面积RSD为0.48%，稳定性良好。
       2.7  重复性实验取同一批号的样品6份，分别按供试品制备项下方法制备，用不同仪器测定。结果表明，平均含量为0.98 mg/g，RSD为1.17%。实验方法的重复性良好。
       2.8  回收率实验取已知含量的健脑补肾胶囊内容物6份，每份约0.3 g，精密称定，置于25ml量瓶中，分别精密加入桂皮醛对照品溶液（0.32 mg/ml） 1.0 ml，再精密加入甲醇24  ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失得重量，摇匀，滤过，注入液相色谱仪，测定，平均回收率为99.00%，RSD为1.56%，加样回收率良好。回收率（%）＝(实测值－样品含量)/对照品加入量×100%
       2.9  3批样品测定取3批样品，按质量标准草案拟订方法测定，桂皮醛含量结果见表1。表1  健脑补肾胶囊样品中桂皮醛含量测定结果（略）
       3  讨论
        样品中桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml浓度范围内线性关系良好、精密度高、稳定性好、重复性符合要求。经加样回收率实验，桂皮醛平均回收率为99.00%，RSD为1.56%。本实验方法具分离效果好，灵敏、快速、准确的优点，能较好地测出健脑补肾胶囊中桂皮醛的含量，可有效控制健脑补肾胶囊的质量。
       【参考文献】
         　　［1］《中华人民共和国卫生部 药品标准》中药成方制剂第16册·健脑补肾丸质量标准［S］.［标准号：WS3-B-3088-98］：131.
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：91.