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       【摘要】 
       目的研究急性子提取物的体外抗氧化活性。方法提取急性子水溶性物质和脂溶性物质，并将脂溶性物质用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇递次萃取，然后将各提取物分别进行抗卵黄脂质过氧化及消除氧自由基活性的考察。结果急性子醋酸乙酯提取物对卵黄脂质过氧化抑制率能达到90 %以上，对氧自由基抑制率能达到70 %以上，明显高于Vc。结论急性子醋酸乙酯提取物具有很好的抗氧化作用。
       【关键词】  急性子 抗氧化 体外
       自由基是引起癌症、衰老、心血管病等退变性疾病的根源,生物体内常见的自由基有超氧阴离子自由基、羟基自由基、烷氧基自由基等，其中超氧阴离子自由基形成最早，清除了超氧阴离子自由基，即可从根本上预防体内形成过多的羟基自由基和其他活性氧自由基，达到防衰老、抗癌、抗心血管病的目的［1］。急性子为凤仙花科植物凤仙花Impatiens balsamina的干燥成熟种子，夏秋种子即将成熟时采收。急性子具有软坚消积、降气行癖、透骨通筋活血的作用。急性子还有一定的抗癌作用，药敏试验证实对胃淋巴肉瘤细胞敏感［2］。本文首次研究了急性子抗卵黄脂质过氧化作用、消除氧自由基的能力并测定了其还原力，体外实验证明急性子具有抗氧化作用，定性鉴别表明其含有黄酮类化合物多碳化合物。本实验为急性子资源的开发利用奠定了基础，并为急性子天然抗氧化剂的开发提供了理论依据。
       1  材料与仪器
       1.1  材料来源
       急性子购于同仁堂沈阳中街店，经鉴定为Semen impatientis。
       1.2  试剂与仪器
       仪器主要有数字恒温水浴锅，低速离心机，循环水式多用真空泵，电子天平，电热干燥培养箱，旋转蒸发仪。所用试剂均为国产分析纯。
       2  方法
       2.1  急性子中物质的提取
       2.1.1  急性子中脂溶性物质的提取
       将急性子用粉碎机粉碎，之后用95 %乙醇回流提取3次，2 h/次，然后进行抽滤，合并提取液，用旋转蒸发仪减压回收溶剂，至无醇味。加适量水混匀，分别用石油醚、 醋酸乙醋、 正丁醇萃取。挥散溶剂，即得到提取物质。
       2.1.2  急性子中水溶性物质的提取
       将急性子用粉碎机粉碎，用石油醚脱脂。脱脂处理后的粉末放入圆底烧瓶中，加入80 %乙醇回流去掉小分子物质，将乙醇挥散。样品按照1∶100的比例加蒸馏水，在80℃水浴煮3次，2 h/次，抽滤，弃残渣，合并滤液，70 ℃浓缩为原体积的1/3,加入3倍体积95 %的乙醇, 抽滤，沉淀用乙醇、丙酮抽洗，冷冻干燥得粗多糖。
       2.2  急性子抗氧化活性的体外研究
       2.2.1  急性子抗卵黄脂质过氧化活性的测定［3］
       采用依赖鸡卵黄脂蛋白的脂质过氧化模型,操作步骤:新鲜卵黄用等体积的0.1 mol/L pH 7.4的PBS按1∶1配成悬液,再稀释成1∶25(卵黄∶总体积),磁力搅拌30 min。在一组试管中加入上述卵黄悬液0.2 ml;分别加入样品0.1 ml(对照管加入PBS)，再加入25 mmol/L的硫酸亚铁0.2 ml;用0.1mol/LPBS补至2 ml,置于37水浴振荡50 min,取出后加入20 %三氯乙酸0.5 ml,静置10 min后.3 000 r/min离心15 min,取上清液2.0 ml加入0.8%硫代巴比妥酸1.0 ml 塞紧管口100 ℃水浴15 min,空白管以PBS取代上清液,其余相同,532 nm测光吸收,计算抑制率。
       
       抑制率（%）=对照吸光度-样品吸光度对照吸光度×100%
       2.2.2  急性子清除氧自由基活性测定
       取8个微烧杯，编好号后，按NBT光还原法加入各试剂及样品。试剂加入后充分混匀，取1号烧杯放入暗处作为空白（调零时用），其它7个微烧杯放入4500Lux日光灯照射下启动反应，15 min后遮光终止反应。在560 nm波长下测定光密度，以2，3号杯的OD值计算出不同试剂量在反应系统中抑制NBT关还原的相关百分率。然后以所加试剂量为横坐标，以抑制百分率为纵坐标作图，画出两者的相关曲线。
       2.2.3  还原力的测定
       分别取2.5 ml不同浓度的醋酸乙酯提取物于试管中，依次加入2.5 ml 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH=7.6）和2.5 ml K4［Fe（CN）6］于50℃水浴保温20 min后，快速冷却，再加入2.5 ml 10 %TCA，以4 000 r/min的转速离心10 min，取上清液2.5 ml依次加入2.5 ml重蒸水，0.5 ml 0.1 %FeCl3，充分混匀，静止10 min，在700 nm 处测定吸光度值，以重蒸水做阴性对照，抗坏血酸为阳性对照。
       2.3  定性鉴别将醋酸乙酯提取物分别进行下列颜色反应：
       
       盐酸-锌粉反应：将样品溶于甲醇或乙醇，滴加几滴浓盐酸，再加入少许的锌粉振荡，必要时微热，观察颜色。
       
       氨熏：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上，将滤纸在氨水上方熏30s，立即在紫外灯下观察。
       
       三氯化铝反应：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上，1%三氯化铝乙醇溶液通过纸斑反应后，置于紫外灯下观察。
       
       三氯化铁反应：取检品1 ml，加入三氯化铁试液1～2滴，观察颜色。
       
       Molisch反应：取检品1 ml,加入5 %萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入5～6滴浓硫酸，使成两液层，待2～3 min后，观察两层液面颜色。
       3 　结果
       3.1  急性子各提取物抗卵黄脂质过氧化活性结果见图1。
       
       由图1可见，急性子石油醚组和多糖组均无抗卵黄脂质过氧化作用,只有醋酸乙酯组和正丁醇组均具有抗卵黄脂质过氧化作用,抑制率随浓度的增加而上升,并均强于Vc。并且醋酸乙酯组作用强于正丁醇组。醋酸乙酯提取物的抑制率最高可达92.88%。
       
       由图2可见，只有醋酸乙酯提取物具有消除氧自由基的作用,并且抑制率随浓度增加而增大,并明显高于Vc。
       3.3  还原力测定的结果见图3。
       
       还原力是抗氧化物质提供电子能力的重要指标，抗氧化剂通过自身的还原作用给出电子而使自由基变为稳定的分子，从而失去活性。抗氧化效果与还原力密切相关，还原力越强，抗氧化性就越强。由图3可知，醋酸乙酯提取物随浓度增加还原力增强。
       3.4  定性鉴别结果
       
       盐酸-锌粉反应：呈现紫红色。
       
       氨熏：氨熏后颜色加深，紫外光下观察呈现亮黄色荧光斑点。
       
       三氯化铝反应：紫外光下观察呈现黄色荧光斑点。
       
       三氯化铁反应：呈现绿色。
       
       Molisch反应：两层液面之间呈现紫红色园环。急性子醋酸乙酯提取物定性鉴别结果显示其含有黄酮类化合物，并可能为黄酮苷以及含有多酚类化合物。
       4  讨论 
          
       急性子石油醚提取物消除氧自由基活性低于对照组，由此可验证急性子的低毒性可能与其所含有的挥发性成分有关［4］。
       
       近年来研究报道证实，类黄酮具有很好的清除自由基、抗氧化活性，黄酮类化合的抗氧化作用机制为其将氢原子供给自由基，自身转变成酚基自由基，酚基自由基的稳定性降低了自动氧化链反应的传递速度，从而引起了抑制脂类进一步被氧化的作用，简言之，就是作为自由基吸收剂而起到抗氧化作用。
       【参考文献】
         　　［1］田云,卢向阳,易克，等.天然抗氧化剂清除氧自由基的能力［J］.湖南农业大学学报(自然科学版),2004,30(3)：209.
       
       ［2］胡喜兰，朱慧，刘存瑞，等．凤仙花的化学成分研究［J］.中成药，2003，25(10)：833.
       
       ［3］王继锋，王石泉，汤国枝，等．山楂原花色素的抗氧化作用研究［J］.天然产物研究与开发，2001，13（2）：46.
       
       ［4］陈明霞，王相立，张玉杰．中药急性子油类成分分析及毒性考察［J］.中国中药杂志，2006，31(11)：928.