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       【摘要】 
       目的探讨胡椒醇提物局部外涂的药理作用。方法分别采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀炎症模型和磷酸组胺致豚鼠足部瘙痒模型测试胡椒70%乙醇提取液的局部抗炎止痒作用；利用图像分析系统测定小鼠耳廓局部应用胡椒70%乙醇提取液前与应用后5，10，20 min及腹腔注射肾上腺素后5，10，15，20 min耳廓细动、静脉口径和细静脉血流态，由此评价其对小鼠耳廓正常微循环和肾上腺素引起的微循环障碍的作用。结果胡椒70%乙醇提取液局部外涂能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀；显著提高豚鼠足部磷酸组胺致痒阈；显著增加正常小鼠细动、静脉口径及细静脉血流速度，并能明显对抗肾上腺素引起的细动、静脉收缩和细静脉血流速度减慢。结论胡椒70%乙醇提取液局部外用具抗炎、止痒和改善微循环作用。
       【关键词】  胡椒； 药理作用； 抗炎； 止痒； 微循环
       Experimental Study of Alcohol Extract from Pepper on Pharmacology
       DENG Yongkun, DONG Shoutang, WANG Yinhui, LI Hui*
       （School of Pharmacology, Dali College, Dali,Yunan 671000, China）
       Abstract：ObjectiveTo investigate the pharmacological effect of alcohol extract from pepper on topical application. MethodsTwo experimental models including xylene- induced ear edema in mice and histamine phosphate induced-foot pruritus in guinea pigs were employed to evaluate topically anti-inflammatory and antipruritic action of 70% alcohol extract from pepper. Internal diameters of auric arterioles and venules in mice were measured initially and then 5,10 and 20min after application of 70% alcohol extract from pepper and again 5,10,15 and 20 min after ip Adrenaline with image analysis system. Simultaneously blood flow state in auric venules was observed.ResultsTopical administration of 70% alcohol extract from pepper significantly inhibited ear edema induced by xylene,significantly increased threshold quantity of histamine phosphate with which elicited pruritus in guinea pigs,significantly dilated auric arterioles and venules in mice, speeded up blood flow rate of venules. Furthermore,it inhibited adrenaline-induced contraction of arterioles and venules as well as the reduction of blood flow rate of venules. Conclusion70% alcohol extract of pepper has pharmacological activities of anti-inflammation, alleviating itching and improving microcirculation.
       Key words：Pepper;   Pharmacological action;   Anti-inflammatory;   Alleviate itching;   Microcirculation
       
       胡椒是传统中药，为胡椒科植物胡椒Piper nigrum L.的干燥近成熟或成熟果实，主要含生物碱和挥发油，此外还含木脂素、有机酸、酚类化合物和微量元素。民间有用胡椒粉煮水或泡酒擦洗患处治疗冻疮的用法，并且疗效确切。低温潮湿环境所致的机体局部组织微循环障碍是冻疮发生的重要环节，微循环障碍导致局部组织缺血缺氧损伤，继而出现炎性肿胀、疼痛和瘙痒症状。冻疮治疗以改善微循环为核心，兼顾抗炎、镇痛和止痒则疗效更好。抗冻疮药物药效可从改善微循环及抗炎、镇痛和止痒方面来衡量。为确证胡椒对冻疮的治疗效果，本文研究了胡椒70%乙醇提取液局部外用的抗炎、止痒和改善微循环作用。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器BI-2000图像分析系统（成都泰盟科技有限公司）；EL104电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；320CW耐水静电植物砂砂纸（湖北东升磨料磨具有限公司）。
       1.2  试药取白胡椒（购自东骏大药房），用70%乙醇冷浸3次（48，24，24 h），合并浸提液，静置分层，过滤，滤液用70%乙醇配制为高、中、低3种浓度供试液，每毫升分别相当于生药3.30，1.65，0.825 g；复方吲哚美辛酊（贵州宏奇药业有限公司，批号20070301）；复方土槿皮酊（江门市恒健药业有限公司，批号060801）；解痉镇痛酊（常熟市星海制药有限公司，批号20070702）；盐酸肾上腺素注射液（上海禾丰制药有限公司，规格：1mg/ml，批号060801）；二甲苯（丹东市胜利化工厂，化学纯，批号910815）；磷酸组胺（上海丽珠东风生物技术有限公司，产品编号1703）。
       1.3  动物KM小鼠110只，由昆明医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK（滇）2005-0008；豚鼠50只，雌雄各半，体质量300～400 g，由云南省生物制药有限公司提供，合格证号：SCXK（滇）2005-0007。
       2  方法
       2.1  小鼠耳廓肿胀实验［1］雄性小鼠50只，体质量23～26 g，分为5组，即溶剂，高、中、低浓度胡椒供试液和复方吲哚美辛酊组，每组10只。实验前1 d小鼠右耳涂药3次，实验当日涂药2次，涂药间隔6 h，30 μl/次，涂药时先将小鼠用乙醚麻醉。末次涂药后30 min，在小鼠右耳正反两面涂布致炎剂二甲苯25 μl，40 min后颈椎脱臼处死小鼠，立即剪下双耳，用7 mm打孔器分别在双耳同一部位打下圆耳片，精密称重，右耳片重量减去左耳片重量为肿胀度，比较各组间肿胀度值，同时计算肿胀抑制率，肿胀抑制率（%）=（溶剂组肿胀度-胡椒供试液或阳性对照组肿胀度）/溶剂组肿胀度×100%。
       2.2  磷酸组胺致豚鼠足痒阈实验［2，3］豚鼠50只，雌雄各半，体重300～400 g，分为5组，即溶剂，高、中、低浓度胡椒供试液和复方土槿皮酊组，每组10只，正常饲养两周。实验前2d用预先配好的脱毛剂（8g硫化钠，以60 ml温水溶解，加75%乙醇至体积为100 ml即得）将豚鼠右后足背脱毛，清水洗净。实验当日先在脱毛部位涂药2次，间隔10 min，末次涂药后20 min用砂纸擦破豚鼠右后足背表皮，10 min后再涂药1次，涂药量50 μl/次。10 min后在右后足背破皮部位依次滴加浓度递增的0.01%，0.02%，0.03%，0.04%，0.05%，0.1%，0.2%，0.3%磷酸组胺溶液40μl/只，每一浓度滴加后观察3 min内豚鼠是否回头舔右后足背，如未出现舔右后足背现象则滴加下一较高浓度磷酸组胺溶液，直至出现为止，以此时所给予的磷酸组胺总量为致痒阈，若磷酸组胺溶液浓度提高到0.3%时豚鼠仍未出现舔右后足背反应则不再增加浓度，按此时磷酸组胺总量计算致痒阈，进行统计比较。
       2.3 小鼠耳廓微循环实验［4，5］KM小鼠60只，雌雄各半，体重25～29 g，分为6组，即生理盐水，溶剂，高、中、低浓度胡椒供试液和解痉镇痛酊组，每组10只。实验时维持室温22～25℃，腹腔注射10%氨基甲酸乙酯0.2 ml/10 g将小鼠麻醉，剪去右耳耳根部毛，右侧卧位将其置于显微镜观察台上，将欲观察耳廓固定。先于40倍镜下观察耳廓血管分布情况，选定观察范围，再于100倍镜下选择易于查找和快速定位的细动脉与细静脉，并且细动脉口径为15 μm左右，细静脉口径为25 μm左右。用图像分析系统动态测定给药前耳廓微循环数据(细动脉口径、细静脉口径和细静脉血流态)，在被观察耳廓滴加25℃恒温的相应药液15 μl,测定滴药后5，10，20 min微循环数据。腹腔注射0.01%肾上腺素0.1 ml/10g，测定注射后5，10，15，20 min微循环数据，进行统计比较。
       
       细静脉血流流态既反映血流速度又反映红细胞聚集状态，评分方法为：血流停滞不动（0分，停滞）；血流呈泥沙样，虽向前流，但前后摆动（1分，摆流）；血流慢，轴流缘流混杂，如泥沙样（2分，粒流）；血流较慢，虽连续成线，但有明显颗粒感（3分，粒线流）；血流较快，呈条索状，稍有颗粒感（4分，线粒流）；血流块，呈光滑条索状，无颗粒感(5分，线流) ［1］。
       2.4  统计所有数据均以SPSS13.0统计。小鼠耳廓肿胀度、细动脉和细静脉口径用方差分析LSD法。豚鼠磷酸组胺致痒阈用方差分析Games-Howell法。细静脉血流态用非参数检验，组内不同时间点比较用Wilcoxon法，同一时间点组间比较用Mann-Whitney U法。
       3  结果 
       3.1  对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
       与溶剂组相比，高、中、低浓度胡椒供试液对二甲苯所致小鼠耳肿胀均有显著抑制作用（高、中浓度P<0.01，低浓度P<0.05），肿胀抑制率分别为53.52%，55.08%，38.67%。结果见表1。表1  胡椒对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（略）
       3.2  对磷酸组胺所致豚鼠足部瘙痒的影响 
       与溶剂组相比，高浓度胡椒供试液能显著增加豚鼠足部皮肤磷酸组胺致痒阈（P<0.05）。结果见表2。表2  胡椒对磷酸组胺所致豚鼠足部瘙痒的影响（略）
       3.3  对小鼠耳廓微循环的影响
       给药前，各组小鼠耳廓细动、静脉口径及细静脉血流态无明显差异。生理盐水组在注射盐酸肾上腺素前各测定点细动、静脉口径及细静脉血流态基本不变。注射盐酸肾上腺素后细动、静脉开始明显收缩，细静脉血流态评分明显降低（P<0.05或P<0.01），说明腹腔注射肾上腺素致微循环障碍模型复制成功。结果见表3～5。
       3.3.1  细动脉口径 
       中、低浓度胡椒供试液给药后5 min耳廓细动脉即明显扩张，与溶剂组相比差异显著（P<0.05），高浓度胡椒供试液组口径基本不变。药后10 min，中、低浓度组血管口径继续增大，此时高浓度组血管也明显扩张，与溶剂组相比，差异显著（高、中浓度P<0.05，低浓度P<0.01）。药后20 min，各浓度组细动脉进一步扩张，口径都显著大于溶剂组（P<0.01），另外此时药效呈浓度依赖性。注射肾上腺素后，各浓度组均明显收缩，但随后又有较大幅度回升。注射肾上腺素后5 min，各浓度组细动脉口径均显著大于溶剂组（P<0.05）。注射后10 min，高、中浓度组口径显著大于溶剂组（P<0.05）。注射后15 min与注射后5 min情况基本一致（高浓度P<0.01，中、低浓度P<0.05）。注射后20 min，高浓度组口径仍显著高于溶剂组（P<0.01）。结果见表3。表3  胡椒对小鼠耳廓细动脉口径的影响（略）表4  胡椒对小鼠耳廓细静脉口径的影响（略）
       3.3.2  细静脉口径 
       各浓度胡椒供试液组给药后5 min小鼠耳廓细静脉即开始扩张，给药后20 min扩张达高峰，其中高、中浓度效果相当，且强于低浓度。由于溶剂对细静脉有一定扩张作用，给药后各测定点所有浓度组细静脉口径与溶剂组相比均无显著差异。注射肾上腺素后各浓度组细静脉口径都不同程度的缩小，但注射后10，15，20 min高浓度组血管口径显著大于溶剂组相（P<0.05）。结果见表4。
       3.3.3    细静脉血流态 
       各浓度胡椒供试液组给药后细静脉血流态评分有一定增大，给药后20min与溶剂组相比有显著差异（P<0.05），注射肾上腺素后，血流态评分又出现适当下降，其中高浓度组下降最少，注射后各测定点与溶剂组相比均有显著差异（5，10，20 min，P<0.05；15 min P<0.01）。见表5。表5  胡椒对小鼠耳廓细静脉血流态评分的影响（略）
       4 讨论
          
       该文研究结果显示，胡椒70%乙醇提取液局部外用显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀、增加豚鼠磷酸组胺致痒阈、增强小鼠正常微循环并对抗肾上腺素所致微循环障碍，说明具抗炎、止痒和改善微循环作用。通过查阅中外文献数据库（包括中国CNKI和VIP科技论文全文数据库，美国Gale、Pubmed和HighWire Press数据库），未能检索到胡椒抗炎、止痒和改善微循环作用的报道，该文对胡椒药理作用的相应新发现有一定科学意义，为胡椒更多的深入研究开辟了新途径。
       
       因胡椒70%乙醇提取液局部外涂具有抗炎、止痒和改善微循环作用，说明其对冻疮有很好治疗效果，为民间用胡椒治疗冻疮确立了药理学依据，也为胡椒在抗冻疮方面的进一步研究奠定基础。
       【参考文献】
         　［1］徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2005：911,1122.
       
       ［2］雷小明,刘文泰,李丽华,等. 刻克痒搽剂止痒机制的研究［J］. 中国中医基础医学杂志, 2005,11(9):668.
       
       ［3］潘经媛,邱银生,严汉池,等.盐酸多塞平乳膏的止痒和抗过敏作用［J］.中国药理学通报，2005，21(12): 1505.
       
       ［4］陈 奇.中药药理研究方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，2006：545.
       
       ［5］刘剑刚，许秀森，崔艳英，等.筋骨宁搽剂对小鼠实验性微循环障碍的影响［J］.微循环学杂志，1999，9(2)：29.