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       【摘要】 
       目的研究乳康酊对乳腺小叶增生模型大鼠血清雌、孕激素水平及病变乳腺组织的影响。方法皮下注射雌二醇和黄体酮诱发大鼠乳腺小叶增生，然后在病变乳房处外敷乳康酊,1次/d，共30 d。用药结束后检测血清雌、孕激素水平；显微观察乳腺组织病理变化和乳腺细胞性激素受体（雌激素受体、孕激素受体）。结果受药模型鼠血清雌激素水平和乳腺组织性激素受体阳性腺细胞百分数降低，显微病理见乳腺小叶增生病变减轻。结论乳康酊能够减轻实验性病理模型大鼠乳腺小叶组织增生。
       【关键词】  乳康酊； 乳腺小叶增生； 雌激素； 孕激素； 雌激素受体； 孕激素受体
       Effect of Rukangding Tincture on Model Rats with Experimental Lobular Hyperplasia of Breast Glands
       ZENG Xianbiao, LIU Zhisheng，ZHOU Jun,WEI Ganglin
       （Institute of Traditional Medical and Pharmacological Sciences of Guangxi Zhuang Autonomous Region , Nanning 530022, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the effects of Rukangding tincture on the serum level of estrogen, progestin and pathological breast gland tissue of model with experimental breast glands lobular hyperplasia in rat.MethodsExperimental rat lobular hyperplasia of breast glands were induced by hypodermic injection of estradiol and progesterone.And then, Rukangding tincture was applicated on pathological breast surface skin once every day for 30 days. Serum level of estrogen, progestin were examined, pathological changes in the breast gland tissue and sex hormone receptors(estrogen receptor and progestin receptor) in breast gland cell were observed with microscope after the tincture application.ResultsDecrease in the serum level of estrogen and the percent of gland cell with sex hormone receptor were found in the treated rats with Rukangding tincture, and less pathological changes in the gland tissue were also observed with microscope in the treated rats, compared with the control. ConclusionRukangding tincture can reduce lobular hyperplasia of breast glands in rat with experimental pathological model.
       Key words：Rukangding tincture；  Breast glands lobular hyperplasia；  Estrogen；  Progestin；  Estrogen receptors；  Progestin receptors
       
       乳康酊是广西中医药研究院开发的纯中药制剂，处方由穿山甲、乳香、生南星、莪术、徐长卿、山慈姑等多味中药组成，民间取其水煎稠膏局部外敷，用于妇女乳房肿块等症［1］。本实验给乳腺小叶增生病理模型大鼠乳房局部皮肤敷用乳康酊药液,通过检测敷药后大鼠血清雌、孕激素含量［2,3］，显微观察乳腺细胞性激素受体（雌激素受体、孕激素受体）和乳腺小叶组织形态［4,5］，研究乳康酊对血清雌、孕激素水平及病变乳腺组织的影响。结果见乳康酊能够降低血清雌激素水平和乳腺组织性激素受体阳性腺细胞数，减轻乳腺小叶增生病理变化。现报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  受试药物
       乳康酊是广西中医药研究院研制的中试产品，为棕色粘稠液体，与水容易混合，批号070216，密度1.30，相当生药量10 g生药·ml-1。置阴凉避光处密封保存。实验时取原药和1个水稀释药（浓度：5 g生药·ml-1）使用。
       1.2  动物
       雌性未孕Wistar大鼠，25周龄，体质量（180±25）g，清洁级，购自广西医科大学实验动物中心，动物生产许可证（scxk桂2003-0003），动物合格证（检字2007-054）。
       1.3  仪器和试剂
       自动酶免疫分析仪,上海精密仪器公司生产。放射免疫分析仪,北京瑞利分析仪器公司出品。冰冻切片机,天津医疗器械厂研制。显微镜和显微测量尺,日本奥林巴斯公司制造。2.5%丙酸睾丸酮注射液，广西中医学院制药厂出品，批号060506。苯甲酸雌二醇注射液，上海第九制药厂出品，批号061102。黄体酮注射液，浙江仙居制药有限公司生产, 批号061015。3H -孕酮分析试剂，上海捷门生物技术合作公司提供，批号060503。雌二醇酶标记分析试剂，四川迈克科技有限责任公司提供，批号060424。乳腺组织性激素受体（雌激素受体、孕激素受体）标记染色试剂，长春汇力生物技术有限公司提供，批号060411。其余试剂均为国产分析纯试剂。
       2  方法
       2.1  大鼠乳腺小叶增生病理模型造模［6］
       取大鼠若干，每日腋窝皮下注射苯甲酸雌二醇0.5 mg·kg-1，连续25 d,之后改注黄体酮1 mg·kg-1,连续5 d。停药后次日剔除乳房增大不明显（基底＜3 mm）的大鼠，然后随机抽取10只大鼠处死，每只选择一个明显增大的乳房作组织病理学检查，以乳腺腺泡增多扩大、腺腔积液、腺细胞增高肥大、腺组织雌激素受体阳性腺细胞和孕激素受体阳性腺细胞均占显微视野全部腺细胞20%以上者为成功的乳腺小叶增生病变。10只大鼠的乳房组织病理学检查有8只以上大鼠乳房符合此病理变化为本批次大鼠乳腺小叶增生模型成功。其开始用于后续实验不晚于停用黄体酮后3 d。
       2.2  乳康酊对大鼠乳腺小叶增生模型的影响实验［7］ 
       取雌性合格未孕大鼠10只，常规饲养，不给药，作正常组。取乳腺小叶增生模型大鼠40只，随机分为模型组、睾丸酮组、乳康酊组和稀释药组，每组10只。各组模型大鼠单个仰卧固定，腹部乳房处去毛2 cm×2 cm，用直径1.5 cm吸盘装药2 ml后吸附于一个乳腺小叶增生明显的病变乳房处，再把吸盘内空气抽出，施以吸盘内负压，保持药液和乳房表面皮肤密切接触6 h后撤药并解除固定。模型组给生理盐水，睾丸酮组给2.5%丙酸睾丸酮注射液，乳康酊组和稀释药组给浓度分别为10，5 g生药·ml-1的乳康酊药液。如此固定在一个乳房局部反复给药，1次/d，连续30 d。给药结束后次日处死全部大鼠，取血检测血清雌、孕激素水平；取乳腺组织常规切片观察其组织形态，选择视野中最园最大的腺泡，测量腺泡腔直径和腺细胞高度［8］；取乳腺冰冻切片，用乳腺组织性激素受体（雌激素受体、孕激素受体）标记染色，450～1 000倍显微观察，以细胞桨或核中有棕黄色颗粒者为性激素受体阳性细胞，选择10个腺细胞轮廓显示清晰、胞桨或核颗粒着色良好的视野，计算乳腺组织中雌、孕激素受体阳性细胞百分率［9，10］。统计各项检查指标，与模型组比较。用t值法检验组间差异显著性。
       3  结果
          
       给药结束后次日，血清性激素检查见乳康酊组和睾丸酮组血清雌激素水平低于模型组，差异有显著性，各组孕激素水平无显著差异(见表1)，表明乳康酊和睾丸酮对模型大鼠性腺或性腺轴的活动有影响。组织病理学检查见模型组大鼠乳房增大，乳腺小叶增多，腺泡增多扩大、腺腔积液、腺细胞增高肥大、腺组织雌、孕激素受体阳性腺细胞占显微视野全部腺细胞20%以上，表明给药试验期间大鼠乳腺小叶增生病理变化没有因停用诱导性激素而自然恢复。乳康酊组和睾丸酮组大鼠乳腺腺泡腔直径、腺细胞高度、腺组织雌激素受体阳性腺细胞百分率和孕激素受体阳性腺细胞百分率均小于模型组，差异有显著性意义(见表2)，表明乳康酊和睾丸酮有减轻乳腺小叶增生作用。表1  乳康酊对乳腺小叶增生模型大鼠血清雌、孕激素水平的影响（略）表2  乳康酊对乳腺小叶增生模型大鼠乳腺组织及细胞的影响（略）
       4  讨论
          
       乳腺小叶增生是育龄期妇女常见疾病，中医称之为乳癖，是由于情志不畅，气滞血淤,气血结聚于乳络而成，治宜行气活血、散淤化结。本研究的受试品处方由穿山甲、乳香、莪术、山慈姑等多味中药组成，乳香行气，莪术散淤，山慈姑化结。全方有活血化淤、软坚散结、理气止痛之功效。本实验研究乳康酊能够减轻乳腺小叶增生病理变化，这与其处方具有的功效相一致。现代医学认为在雌激素刺激下，乳腺组织中雌、孕激素受体阳性细胞增多，对性激素反应过度；在孕激素作用下，乳腺细胞增多肥大。血清雌、孕激素水平异常，或乳腺细胞性激素受体增多，致乳腺组织在女性生理周期变化过程中部分乳腺小叶反复增生过度，复旧不全，是乳腺小叶增生的发病机理。修正血清雌、孕激素水平，或者降低乳腺细胞性激素受体，减小乳腺小叶组织对雌、孕激素的反应性，是治疗乳腺小叶增生的有效方法［11］。本实验观察到外源性雌、孕激素完全扰乱了造模鼠性激素生理性周期变化，长期高水平雌激素刺激乳腺组织，性激素受体阳性细胞数同步增加，腺细胞生长分裂活跃，终致其乳腺组织腺泡增多扩大、腺腔积液、腺细胞增高肥大，成为典型的乳腺小叶增生病变。在模型鼠病变乳房局部外用乳康酊药液30 d后，血清雌激素水平降低，乳腺组织性激素受体阳性细胞百分率也同步降低，组织病理学检查见乳腺腺泡腔直径和腺细胞高度减小，乳腺小叶组织增生病变减轻,与模型组比较，组间差异有显著性意义。其作用机理可能是药物有效成分透皮吸收后进入体循环，通过调节性腺或性腺轴活动，减少雌激素分泌，降低性激素受体阳性细胞百分率；也可能是药物透皮吸收后存留于乳房局部组织，降解雌激素并直接作用于乳腺细胞，降低性激素受体阳性腺细胞数，减小乳腺小叶组织对雌、孕激素的反应性，从而使乳腺小叶增生程度明显减轻。
       【参考文献】
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