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       【摘要】 
       目的观察参归软肝胶囊（SGR）对猪血清所致大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型的影响。方法复制猪血清所致大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型，测定血清ALT，AST，Alb，TP，SA，Hyp，观察肝病理变化,判断SGR对猪血清所致的大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型的影响。结果SGR组ALT，AST， SA 和 Hyp降低 (P< 0.05)，TP和 Alb增加 (P< 0.05)，肝脏损伤和纤维化程度降低（中剂量组P< 0.05；高剂量组P< 0.01）。结论SGR对猪血清所致大鼠免疫肝损伤、肝纤维化有保护作用。
       【关键词】  参归软肝胶囊； 肝纤维化； 肝功能； 动物模型
       Protection of Shen-gui-rangan Capsule on Hepatic Fibrosis in Rats
       LI Yan, LU Ximing, WANG Jiangang, WANG Shuying, ZHANG Zhaohui ，FU Yinfeng
       （ Medical College of Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of Shen-gui-rangan（SGR） capsule on the hepatic fibrosis in rats.MethodsThe model of hepatic fibrosis was induced in rats and liver function, serum AST, ALT, Alb, TP, liver SA and Hyp were examined. Histopathological changes were examined by optical microscope. ResultsCompared with model group, in SGR middle and high groups:Liver functions was improved, ALT,AST ,SA and Hyp of Liver were lowered（P<0.05）.TP and Alb were increased（P<0.05）;The degree of fibrosis was reduced（in SGR middle dosage group P<0.05 and in SGR high dosage group P<0.01）.ConclusionSGR capsule has protective effect on hepatic fibrosis in rats.
       Key words：SGR capsule；  Hepatic fibrosis；  Liver function；  Animal model
       
       目前，西药逆转肝纤维化缺乏成熟有效的治疗药物。研制高效、低毒抗肝纤维化的中药具有重要意义。参归软肝胶囊（SGR）主要由黄芪、丹参、川芎、当归、白芍、郁金等中药组成，有健脾、益气、活血、舒肝等功效。本实验通过研究SGR对猪血清所致大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型的影响，为其临床开发提供理论依据。
       1  动物、药物与试剂
       
       Wistar大鼠，雄性，常规饲料喂养，饮水量不限。动物合格证号：医动字0001681，河南省实验动物中心提供。SGR批号040912，由河南科技大学附属医院制剂室提供。复方鳖甲软肝片（阳性对照药）批号040310，批准文号：国药准字Z19991011，内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司提供。羟脯氨酸（Hyp）试剂盒（样本碱水解法）批号050424及唾液酸（SA）试剂盒，批号050508，均由南京建成生物工程研究所提供；猪血清，批号050106，郑州佰安生物工程公司提供，-10 ℃保存备用。
       2  方法
       2.1  肝纤维化模型复制［1］将70只180～200 g的雄性动物随机分成6组，即正常对照组，模型组，阳性对照组，SGR高、中、低剂量组。除模型组、正常对照组各15只外，其余每组10只。除正常对照组每只注射NS 0.5 ml外，其余各组动物均注射猪血清0.5 ml，2次/周，共12周。第12周末，取正常对照组及模型组动物各5只进行眼内眦采血，检测ALT，AST，Alb，TP并取其肝脏，作病理组织检查， 进行肝纤维化积分的评分，确认肝纤维化模型建立。第12周起，按上述分组，分别灌服相应受试药物，连续12周。于灌服受试药物第12周末，各组分别动物眼内眦采血，检测ALT，AST，Alb，TP，SA，Hyp，取肝脏相同部位进行病理学检查，肝纤维化积分的评分，比较用药前后各项指标。
       2.2  给药方法和测定指标在确认肝纤维化模型建立以后，按前述分组，分别灌服相应受试药物，1.0 ml·（100 g ）-1·d -1连续12周，ig。正常对照组与模型组0.5% CMC-Na，ig；阳性对照组成药2.1 g ·kg -1，ig；SGR低、中、高3剂量组，生药1.8 ，3.6，5.4 g ·kg -1，i g。以上各组均按试剂盒测试方法学进行ALT，AST，Alb，TP，SA，Hyp测定。实验结束，取各组大鼠肝脏的相同部位，10%中性福尔马林溶液固定，切片，HE染色，光学纤维镜进行病理组织学观察。肝纤维化积分评分标准参考文献［2］进行积分。
       2.3  统计学处理实验数据以±s表示，并进行差异显著性检验。
       3  结果
       3.1  纤维化模型的建立
       3.1.1  生化检查模型组ALT，AST高于正常对照组（P<0.01），Alb及TP低于正常组（P<0.01）。见表1。
       表1  猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型的建立（肝功能）（略）
       模型组与正常对照组相比较，P<0.01；n=15
       3.1.2  肝病理组织检查模型组大鼠肝纤维化积分高于正常对照组（P<0.01），正常对照组动物肝小叶结构正常，肝索、中央静脉、汇管区结构正常，无纤维结缔组织增生，未发现异常。模型组动物肝小叶结构紊乱，肝细胞肿胀，分界不清，界线消失，中央静脉周围可见多个点状坏死，炎细胞浸润，小叶间有纤维结缔组织增生，纤维母细胞增多，可见假小叶形成。见表2。表明大鼠肝纤维化模型确已建立。
       表2  猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型的建立（纤维化程度）（略）
       模型组与正常对照组比较，P<0.01 ；n=5
       2.2  SGR对肝纤维化大鼠肝功能，肝SA，Hyp及病理学变化的影响肝功能、肝SA及肝Hyp测定结果见表3～4。
       表3  SGR对猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型肝功能、肝SA和Hyp的影响（略）
       模型组与正常对照组比较，△P<0.05，△△，P<0.01；治疗组与模型组比较，* P<0.05，**P<0.01；n=10
       表4  SGR对猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型肝纤维化程度的影响（略）
       模型组与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；治疗组与模型组比较，* P<0.05，**P<0.01；n=10
       
       模型组与正常对照组相比：ALT，AST，SA，Hyp高于正常组（P<0.05），Alb、TP降低（P<0.05），表明肝纤维化模型持续存在；阳性对照组与模型组相比ALT，AST，Alb，TP，SA有显著性差异（P<0.05），Hyp有非常显著性差异（P<0.01），肝脏纤维化积分降低（P<0.05）、肝脏纤维化程度降低（P<0.01）。
       
       SGR各剂量组各项指标与模型组相比：低剂量与模型组相比无显著性差异（P＞0.05）；中、高剂量组与模型组相比有显著性差异（P<0.05）。
       
       肝脏纤维化积分中、高剂量组剂量组较模型组降低，有显著性差异或非常显著性差异（中剂量组P<0.05，高剂量组P<0.01）。
       3  讨论
       
       肝纤维化是慢性肝损伤和修复的病理过程，是向肝硬化发展的前期过程，也是各种慢性肝病所共有的病理学基础。阻断或逆转肝纤维化发生和发展是防治肝硬化的关键。
       
       西医对肝纤维化的治疗尚缺乏有效办法。中医药治疗肝纤维化、肝硬变历史悠久，成为国内外学者研究热点。目前，中药治疗肝纤维化是以活血化淤与补虚扶正两大类药物的疗效好。中医理论认为［3，4］，肝纤维化、肝硬变是“久病入络”，肝气郁滞、血瘀、脾虚等多方面原因形成的。现代中药药理研究表明，活血化淤中药可抑制结缔组织的异常增生，促进增生的结缔组织吸收与分解，扶正补益药在抗肝纤维化的研究中有重要意义。由此可见，肝纤维化治疗应以舒肝、祛淤、活血，健脾等为治疗肝纤维化、肝硬化的基本治则，多方面着手治疗，方可提高疗效。SGR由此而设计，其中郁金行气疏肝解郁、甘草补脾益气。现代药理研究表明甘草中的甘草甜素使肝内核因子活性下降，可明显抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原的合成，降低血清转氨酶水平和肝脏脂肪变性以及和纤维化程度；丹参、黄芪，以突出活血、益气作用，丹参中的丹酚酸A可很好地抑制成纤维细胞增殖和细胞内胶原的合成，可显著减轻大鼠肝纤维化模型的纤维化程度，明显降低肝羟脯氨酸含量，改善肝功能；川芎中含有川芎嗪，可明显降低肝纤维化动物血谷丙转氨酶、Ⅲ型前胶原及肝组织内的丙二醛（MDA），提高肝内超氧化物歧化酶（SOD）的活性，显著减轻肝脏胶原纤维的增生程度。ALT，AST，Alb及TP反映肝功能情况，SA、Hyp含量可以反映肝纤维化的程度，对诊断、治疗及预后的判断都具有重要意义。
       
       本实验给猪血清免疫性肝损伤、肝纤维化模型大鼠灌服SGR，相当于生药3.6 ，5.4 g ·kg-1 ，12周，可不同程度地改善模型动物的肝功能，降低肝脏纤维化及肝实质损伤程度，故SGR对猪血清致大鼠慢性肝损伤、肝纤维化有保护作用，其机制可能与降低肝组织SA和Hyp的含量有关。
       【参考文献】
         　　［1］ 程明玲，杨常青.肝纤维化的基础研究及临床，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，2002：286.
       
       ［2］ 程敏德，王泰玲, 王保恩，等. 肝脏纤维化诊断及疗效评估共识［J］.肝脏，2002，7（2）:附页3.
       
       ［3］ 姚春甫. 抗纤煎剂治疗慢性肝炎、肝纤维化36例临床观察［J］.现代中西医结合杂志，2007,16(12):1629.
       
       ［4］ 刘志勇,毕志英.慢性乙型肝炎的中西医结合治疗位点与思路［J］.山东中医杂志，2007，26（1） ：6.
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