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       【摘要】 
       目的考察柴胡加龙骨牡蛎汤有效部位(CLMAF)抗抑郁作用。方法采用小鼠强迫游泳、悬尾、利血平拮抗、5羟色胺酸（5HTP）诱导甩头、慢性应激等抑郁动物模型，观察CLMAF的抗抑郁作用。结果CLMAF 20，40，80 mg/kg均能不同程度地缩短小鼠强迫游泳、悬尾不动时间，能拮抗高剂量利血平降低小鼠体温作用，增加5HTP诱导小鼠甩头次数，改善慢性应激小鼠被动回避能力。结论CLMAF具有显著的抗抑郁作用。
       【关键词】  柴胡加龙骨牡蛎汤； 有效部位； 抗抑郁
       Antidepressantlike Effect of Chaihu Jia Longgu Muli Decoction"s Active Fraction
       KANG Dali，QU Rong，ZHU Weili，MA Shiping*
       (Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou 510520，China；Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210029，China；China Pharmacological University，Nanjing 210038，China)
       Abstract：ObjectiveTo study the antidepressant-like effect of Chaihu Jia Longgu Muli Decoction"s active fraction(CLMAF). MethodsForced swimming test, tail suspending test, reserpine reversal, 5HydroxyDLtryptophan(5HTP) induced head-twitches model and chronic stress test in mice were used to evaluate the antidepressantlike effect of CLMAF. ResultsThe results indicated: after the administration of CLMAF, the immobility time of forced swimming test and tail suspending test in mice were decreased, the temperature drop induced by reserpine was reversed and head-twitch counts induced by 5HTP increased significantly, the passive avoidance ability was significantly increased in shuttle-box test in chronic stress mice.ConclusionCLMAF possesses a significant antidepressant-like effect.
       Key words：Chaihu Jia Longgu Muli Decoction(CLMAF)；  Active fraction；  Antidepressant
       
       柴胡加龙骨牡蛎汤有效部位（CLMAF）是从张仲景柴胡加龙骨牡蛎汤中提取的具有一定抗抑郁作用的部位。通过其对皮质酮和谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用初步判定其可能具有抗抑郁作用。本实验采用整体动物抑郁模型探讨CLMAF的抗抑郁作用。
       1  器材
       1.1  动物  ICR小鼠，(20±2) g；雄性SD大鼠，体重160～180 g；均由中国药科大学实验动物中心提供。
       1.2   药物与试剂  柴胡加龙骨牡蛎汤中各药材人参、桂枝、半夏、茯苓、黄芩、柴胡、大黄、牡蛎、龙骨、生姜、大枣均购自南京市非常大药房,由中国药科大学生药教研室鉴定。5-羟色胺酸（5HTP）购自瑞士Fluka公司；利血平(批号20050501)，上海复旦复华药业有限公司产品。
       1.3  仪器玻璃圆筒（高20 cm，直径14 cm），上海医疗器械厂产品；小鼠开阔箱(直径30 cm，高20 cm，底部19等分)；电子肛温计，深圳市胜利电子科技有限公司产品；DCS2程控穿梭箱，医科院药物所研制。
       2  方法
       2.1  CLMAF的制备  柴胡加龙骨牡蛎汤按原方比例制成水煎液。水煎液依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇部位上D101大孔树脂柱，先用蒸馏水洗去糖类及其他水溶性杂质，然后用30%乙醇继续洗脱,收集洗脱液，减压回收溶剂至干，即得（提取率0.76%）。
       2.2  对症状模拟抑郁模型的影响［1］动物随机分为5组，分别为模型组，氟西汀组，CLMAF低、中、高剂量组。模型组给予等量蒸馏水，用药组给予相应种类及剂量的药物。每日上午8时ig给药，连续给药7 d。
       2.2.1  小鼠强迫游泳实验  将小鼠置于水深10 cm，水温25℃的玻璃圆筒中，观察6 min，比较各组小鼠在后4 min内的累计不动时间。不动时间判定：小鼠漂浮在水面，不努力爬出圆筒，仅做一些必须保持其头部在水面的动作。
       2.2.2  小鼠悬尾实验  将小鼠尾端2 cm的部位贴在一根水平木棍上，使动物成倒挂状态，其头部离台面约15 cm，用板隔开相邻动物的视线。判断标准：小鼠被动悬挂期间，无任何活动时，定为不动状态。观察6 min，比较各组小鼠在后4 min内累计不动时间。
       2.2.3  小鼠开野实验  小鼠末次ig给药90 min后，将动物置于小鼠开阔箱。比较各组小鼠2 min内水平得分（行走路线与格子交叉点数）、垂直得分（小鼠两前爪腾空或攀附墙壁次数）、清洁次数（动物在清洁身体各部位过程中，使用头、舌和前肢做出的多种动作）。
       2.3  对药物诱发抑郁模型的影响［2］实验分正常组，模型组，氟西汀组, CLMAF低、中、高剂量组, 模型组给予等量蒸馏水，用药组给予相应种类及剂量的药物。每日上午8时ig给药，连续给药7 d。
       2.3.1   5-HTP诱导的甩头实验  小鼠末次给药90 min后ip5-HTP 200 mg/kg，10 min后开始观察，记录10 min内小鼠甩头次数，比较各组小鼠甩头次数的差异。
       2.3.2  利血平拮抗实验  小鼠末次给药同时ip利血平5 mg/kg，2 h后将体温计探头插入动物肛门内1.5～2.0 cm处测量肛温，比较各组小鼠肛温变化的差异。
       2.4  对慢性应激抑郁模型的影响［3］小鼠随机分组，分组同“2.2”项。除正常组外其余各组在14 d内共接受各种不同的刺激，包括冷水游泳（4℃，5 min）、禁水（24 h）、夹尾（1 min）、电击足底（电压50 mV，1次/30 s，每次持续10 s，共15次）、禁食（24 h）、摇晃（1次/s，5min）和热应激（45℃，5 min）等刺激，平均每种刺激各2次。另设正常对照组，正常组给予等量蒸馏水。各组每日上午8时ig给药，连续14 d。第14天将动物放入穿梭箱的一端，使之先适应测试环境3 min。然后进行30次回避实验：每次实验前4 s均给予噪声信号，若此间无回避反应发生，小鼠将受到0.8 mA足部电击；若此间有逃避反应发生，则电击将终止。记录动物在整个实验中遭受电击的次数和被电击的累计时间。
       2.5  统计方法 用SPSS10.0统计软件进行统计分析。实验结果用±s表示，两个样本平均数比较用t检验。
       3  结果
       3.1  对小鼠症状模拟抑郁模型不动时间的影响见表1。连续7 d给予CLMAF 20，40，80 mg/kg能显著缩短小鼠强迫游泳、小鼠悬尾的不动时间。
       表1  CLMAF对小鼠强迫游泳和小鼠悬尾不动时间的影响（略）
       与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10
       3.2  对小鼠自发活动的影响  见表2。给予CLMAF 20，40，80 mg/kg的小鼠自主活动与正常组比较没有显著变化。
       表2  CLMAF对小鼠自发活动的影响（略）
       3.3  对5-HTP诱导的甩头行为的影响  见表3。给予CLMAF 80 mg/kg能显著增加5-HTP诱导的甩头行为，表明CLMAF具有增强5-HT能神经系统的作用。
       表3  CLMAF对5-HTP诱导甩头次数的影响（略）
       与模型组比较，*P<0.05；n=10
       3.4  对利血平拮抗的影响 见表4。一次性ip高剂量利血平后，小鼠表现为眼睑下垂，活动减少等；同时，与正常组相比，模型组小鼠体温明显下降，CLMAF 20，40，80 mg/kg给药7 d能剂量依从性地显著拮抗高剂量利血平引起的小鼠体温下降。
       3.5  对小鼠未预知慢性应激模型的影响  见表5。与正常组比较，模型组小鼠电击次数和累计电击时间明显增加；与模型组相比，CLMAF 40，80 mg/kg组小鼠受到的的电击次数明显减少，给予CLMAF 20，40，80 mg/kg小鼠受到的累计电击时间均明显小于模型组，表明CLMAF可改善慢性应激小鼠的穿梭箱逃避行为。
       表4  CLMAF对利血平引起体温下降的影响（略）
       与正常组对照比较，△△△P<0.001；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；n=10
       表5  CLMAF对小鼠慢性应激模型被动回避能力的影响（略）
       与正常组对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；n=10
       4  讨论
       
       小鼠强迫游泳实验和悬尾实验为经典的抑郁动物实验模型，小鼠的不动状态反应了行为的绝望状态以及对应激的无反应状态，CLMAF能显著缩短小鼠悬尾、小鼠强迫游泳等经典症状模拟抑郁模型的不动时间，表明其可能具有显著的抗抑郁作用。由于经典抑郁动物模型中的动物不动时间的缩短可能是由于药物的中枢兴奋性作用引起，所以我们进行了小鼠开野实验来检验CLMAF的中枢兴奋性，实验结果显示给予CLMAF小鼠的水平得分、垂直得分、清洁次数与正常组比，均无明显变化。
       
       通过利血平拮抗、5-HTP诱导的甩头行为等药物诱发的抑郁模型，初步探讨了CLMAF的作用机制。利血平是一种囊泡再摄取抑制剂，它使递质留在囊泡外，易被单胺氧化酶降解，从而使去甲肾上腺素、多巴胺和5-HT耗竭，引起行为和生理上的变化。对利血平引起的行为和生理变化的拮抗是最早发展的抑郁动物模型。经利血平处理的动物出现上眼睑下垂、体温下降及活动抑制症状。CLMAF能显著提高经利血平处理的小鼠体温，提示CLMAF的抗抑郁作用与影响单胺类递质的代谢过程有关。5-HT受体兴奋引起的甩头综合症可能通过5-HT2受体介导。CLMAF可显著增加该模型小鼠的甩头次数，其原因可能是因为CLMAF部分阻断了5-HT的再摄取，增加了突触间5-HT的浓度，引起甩头症状。
       
       为进一步验证CLMAF的抗抑郁作用，我们又进行了小鼠未预知的慢性应激实验。经过慢性应激的动物出现一系列行为变化，如活动性降低、攻击性减少及食欲和体重下降，其发病机理可能与人类的抑郁症更接近，小鼠未预知的慢性应激袭击实验中动物活动性减少和逃避行为欠缺可能与去甲肾上腺素能系统功能低下有关。实验结果显示，给予CLMAF的各组动物逃避失败次数显著减少，表明其对小鼠的逃避欠缺具有逆转效应，在这种模型上的CLMAF亦显示了显著的抗抑郁效果。然而，CLMAF的抗抑郁作用机理还有待进一步探讨。
       【参考文献】
         　　［1］ 徐叔云, 卞如濂, 陈 修, 等. 药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2003：807.
       
       ［2］ 徐 立, 魏翠娥, 赵明波, 等. 贯叶金丝桃总黄酮对小鼠抑郁症模型的实验研究［J］.中国中药杂志, 2005, 30（15）:1184.
       
       ［3］ Willer P. Validity，Reliability and utility of the chronic mild stress model of depression：a 10-year review and evaluation［J］.Psychophatmacology (Berl), 1997, 134(4): 319.