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       【摘要】 
       目的测定土党参中党参炔苷的含量，为土党参的质量控制及引种栽培等提供科学依据。方法采用高效液相色谱法分析，依利特-ODS 2（250 mm×4.6 mm,5 μm），以乙腈-水（20∶80）为流动相，检测波长为270 nm。结果测定了贵州11个不同产地的土党参中党参炔苷的含量，其范围为0.686～4.035 mg·g-1。结论该方法快速简便，重复性好，可用于土党参的质量评价。
       【关键词】  (贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
       Determination of Lobetyolin in Radix Campanumoeae by HPLC
       SUN Qingwen，HUANG Min， HE Shunzhi *
       （Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang，Guizhou 550002,China）
       Abstract：ObjectiveTo determine lobetyolin in Radix Campanumoeae . MethodsHypersil ODS 2（250 mm×4.6 mm,5 μm）was used with acetonitrile- water (20∶80) as the mobile phase and DAD detection was at 270 nm.ResultsRadix Campanumoeae from 11 habitats in Guizhou were analyzed.The content of lobetyolin ranged from 0.686～4.035 mg·g-1.ConclusionThe method is simple, quick and reproducible. It can be used to control the quality of Radix Campanumoeae.
       Key words：Radix Campanumoeae;  Lobetyolin;  Campanumoea;  HPLC
       
       土党参又名“柴党参”“野党参”“奶浆根”等，为桔梗科金钱豹属植物大花金钱豹Campanumoea javanica Bl.或金钱豹C.javanica Bl.subsp. japonica (Makino)Hong的干燥根。《贵州省中药材民族药材质量标准》［1］2003年版收载，其入药具有健脾益气、补肺止咳、下乳等功能，主要用于气虚乏力、肺虚咳嗽、脾虚泄泻、小儿疳积、乳少等症。土党参也是苗族、水族及侗族用药，其原植物金钱豹在贵州、四川、云南、广东、广西、安徽等地广泛分布。在贵州及其它一些地区，民间将土党参作为党参入药使用，其实为党参伪品。鉴于2005年版《中国药典》新增加了以党参炔苷为对照品薄层鉴别党参［2］，而土党参是党参的伪品之一。本课题对贵州11个产地的土党参中党参炔苷的含量进行了测定，以此了解土党参中党参炔苷的含量情况，为土党参的品质评价及引种栽培等提供科学依据。
       1   器材
       1.1   仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器；CSF-1B超声波清洗仪（上海超声波仪器厂）；AG135型电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。
       1.2   试剂党参炔苷（lobetyolin）对照品（购于江西本草天工科技有限责任公司，纯度＞98%）；乙腈为色谱纯；甲醇为分析纯；水为重蒸水。
       1.3   供试药材所有供试药材均由作者亲自到产地进行采挖，并由贵阳中医学院何顺志教授鉴定为金钱豹Campanumoea javanica Bl.subsp. japonica (Makino)Hong，采回后洗净，晒干。药材来源见表1。
       2   方法与结果
       2.1  检测波长的选择取适量党参炔苷对照品，加入甲醇配制成一定浓度的对照品溶液，进样，用DAD检测器在190～400 nm进行检测。党参炔苷在270 nm处具有最大吸收值，因此选择270 nm作为检测波长。
       2.2   色谱条件色谱柱为依利特-ODS 2（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为乙腈-水（20∶80）；流速1 ml·min-1；检测波长270 nm；柱温25℃；进样量10 μl。
       2.3   溶液的制备
       2.3.1   对照品溶液的制备取党参炔苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含党参炔苷0.1 mg的对照品溶液，即得。
       2.3.2   供试品溶液的制备
       
       提取条件的确定：以甲醇为溶剂，分别采用水浴回流提取、超声提取、索氏提取、冷浸过夜等提取方法进行比较。结果表明，以甲醇超声提取和水浴回流提取最为完全，但两种提取方法并无显著差异，故选择超声提取。并对超声提取时间进行考察，结果为超声提取60 min与120 min亦无明显差异，因此选择超声提取60 min。
       
       供试品溶液的制备：取供试药材粉末1 g（过3号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声提取60 min，放冷，加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，以甲醇溶解并定量转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
       2.4  线性关系考察取党参炔苷对照品约12 mg，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液适量，分别制成618，247.2，98.88，39.55，15.82，6.33，2.53μg·ml-1。将上述对照品溶液分别进样，进样量10μl，测定峰面积。以对照品质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=9.370 07X＋7.206 03，r=0.999 99，党参炔苷在0.0253～6.18μg与峰面积呈良好线性关系。
       2.5   精密度实验取浓度为247 μg·ml-1的对照品溶液，连续进样6次，进样量10 μl，测定。以党参炔苷峰面积为考察指标，RSD为0.48%，表明精密度良好。
       2.6   稳定性实验取1号供试药材粉末1 g，精密称定，按“2.3.2”项下的方法制备，得供试品溶液，室温放置，分别在0，2，4，8，16，24，48 h进样测定，以党参炔苷吸收峰面积为考察指标，RSD为0.61%，表明供试液中的党参炔苷在48 h内基本稳定。
       2.7   重复性实验取1号供试药材粉末6份，各1g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下的方法制备，依法测定，计算样品含量，RSD为2.45%，表明重现性良好。
       2.8   加样回收率实验取7号供试药材粉末6份，各1g，精密称定，分别加入一定量的党参炔苷对照品，按“供试品溶液的制备”项下的方法制备，依法检测，计算回收率，结果平均回收率为98.36%，RSD为0.61%。
       2.9  样品测定按“供试品溶液的制备”项下的方法制备供试品和对照品溶液，对采集的13个土党参药材样品中的党参炔苷进行含量测定。结果见图1及表1。
       图1  党参炔苷（a）、金钱豹根（b）、茎（c）和叶（d）HPLC色谱图（略）
       3  讨论
       
       本文首次报道应用HPLC法测定土党参中党参炔苷的含量，结果表明所测土党参根中党参炔苷的含量范围为0.686～4.035mg·g-1。另据报道党参炔苷对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保护作用，是党参保护胃黏膜的活性成分之一［3］。因此，土党参在治疗胃溃疡等疾病方面具有较高的开发利用价值。实验同时表明土党参中党参炔苷的含量与产地有关，因此，引种栽培土党参，产地的优选应作为一个重要考虑因素。
       表1  土党参中党参炔苷的含量（略）
       对贵阳产土党参根、茎及叶中党参炔苷的含量测定结果显示，根的含量为4.035 mg·g-1，茎为1.736 mg·g-1，叶为0.686 mg·g-1。表明党参炔苷主要集中在根部，其次为茎叶，证明了传统以根入药具有一定的合理性，但茎叶中的含量亦较高，如果能充分利用，不但能缓解资源紧缺，而且可以带来一定社会效益和生态效益。
       【参考文献】
         　　［1］ 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材民族药材质量标准（2003年版）［S］.贵州：贵州科技出版社,2003:280.
       
       ［2］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005.
       
       ［3］ 贺 庆,朱恩圆,王峥涛,等.党参中党参炔苷HPLC分析［J］.中国药学杂志，2005，40（1）：56.