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       【摘要】 
       目的对海南裂叶山龙眼叶超临界提取物进行分析，为进一步开发利用该资源提供依据。方法采用CO2超临界流体萃取海南裂叶山龙眼叶的脂溶性部位，气相色谱-质谱联用（GC-MS）法鉴定化学成分，归一化法测定各成分相对含量。结果从海南裂叶山龙眼叶超临界提取物中共分离出55个组分，鉴定了其中20个化合物，占萃取物总量的89.78%，其中含量高于5%的有7个，主要为邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（15.42%）；百秋里醇(13.86%)；二十九碳烷（11.37%）；1-脱氢睾酮（7.83%）；3,5-二烯豆甾烷（6.79%）；3-甲基二环［4.1.0］庚烷（5.18%）；(1.α.,2.β.,5.α.)-2,6,6-三甲基二环［3.1.1］庚烷（5.09%）。结论海南裂叶山龙眼叶的提取物中含有萜类、酯类、烷烃、激素、甾类、维生素、生物碱等各类化学成分，为海南裂叶山龙眼的开发奠定了研究基础。
       【关键词】  海南裂叶山龙眼； 叶； 二氧化碳超临界流体萃取； 气相色谱-质谱
       GC-MS Analysis of Extracts from the Leaves of Heliciopsis lobata by Supercritical Fluid
       JIN Dejun，FU Naiguang, LIANG Zhenyi，LIU Mingsheng*
       （Hainan Medical College, Haikou 571101, China; Hainan University, Haikou 570228, China）
       Abstract：ObjectiveTo analyze the constituents extracted from the leaves of Heliciopsis lobata by supercritical fluid CO2 (SFE-CO2) .MethodsThe constituents were extracted by supercritical fluid CO2 extraction method, then separated and identified by GC-MS. Relative content of each component was determined by area normalization.  Results20 among the 55 separated constituents were identified , which constituted 89.78% of the total amount , the contents of 7 compounds were over 5% . The main constituents in extracts were Bis(2-ethylhexyl) phthalate (15.42%), Patchouli alcohol (13.86%), Nonacosane (11.37%), 1-Dehydrotestosterone (7.83%), Stigmastan-3,5-dien (6.79%), Bicyclo［4.1.0］heptane, 3-methyl- (5.18%), Bicyclo［3.1.1］heptane, 2,6,6-trimethyl-,(1.alpha.,2.beta.,5.alpha.)- (5.09%).ConclusionThere are terpenoid, ester, hydrocarbon, hormone, steroid, vitamin and alkaloid in the constituents extracted from the leaves of Heliciopsis lobata . The study established a good method for further study and development of Heliciopsis lobata.
       Key words：Heliciopsis lobata (Merr.) Sleum;   Leave;   Supercritical fluid CO2;   GC-MS
       
       海南裂叶山龙眼Heliciopsis lobata (Merr.) Sleum，又名调羹树、那托和定朗，是山龙眼科（Proteaceae）假山龙眼属Heliciopsis植物，广泛分布于海南中南部山区。海南裂叶山龙眼的根皮与叶入药，药性味淡、涩，性凉，小毒，有清热解毒之功效，民间主要用于治疗腮腺炎与皮炎等［1］，海南中部山区群众则长期用来治疗肿瘤。关于山龙眼科植物研究的报道并不多,未见有海南裂叶山龙眼的研究报道。为了开发民间药用资源，本课题组对海南裂叶山龙眼叶的化学成分进行了研究并从该植物中首次分离得到8个化合物［2，3］。为了进一步确定其物质基础，本研究采用CO2超临界流体萃取出其叶部的脂溶性部位，用人肝细胞株（HepG2），人乳腺癌细胞株（MCF7）以及人宫颈癌细胞株（Hela）体外筛选抗肿瘤活性，平均IC50值分别为70.07，27.34，48.39 μg/ml，显示了一定的细胞毒活性，并用GC-MS联用技术对其挥发性成分进行分离鉴定，为进一步研究与开发提供科学依据。
       1   器材
       
       HL-2L/50MPa-ⅡAQ型超临界CO2流体萃取仪（杭州华黎泵业有限公司），HP6890/HP5973MS联用仪（美国安捷伦公司）。乙醚为分析纯，天津化学试剂一厂产品。海南裂叶山龙眼叶于2006-09采于海南省乐东县尖峰岭，经中国医学科学院药用植物研究所海南分所陈伟平研究员鉴定为海南裂叶山龙眼Heliciopsis lobata (Merr.) Sleum 叶片。
       2   方法与结果
       2.1   提取物的制备  采集海南裂叶山龙眼叶片，自然阴干粉碎，过20目筛，称取500 g置入萃取釜中萃取，采用的CO2超临界流体萃取条件为：萃取釜压力7.2 MPa，萃取温度35 ℃，分离釜压力5 MPa，分离釜温度30 ℃，CO2 流量28 kg/h，夹带剂为无水乙醇，流量2 ml /min，萃取时间120 min，从分离釜收集萃取物，回收乙醇后得14 g，收率2.8%。吸取萃取物100 μl，乙醚溶解完全，微孔滤膜过滤，备用。
       2.2   提取物的GC-MS分析
       2.2.1   GC-MS条件 HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）弹性毛细管柱，采用程序升温，即80 ℃（3 min，4 ℃/min） →150 ℃ （6 ℃/min）→250 ℃（4 min）；气化室温度250 ℃；柱前压为63 kPa；载气为高纯氦气（99.999%），流量为1.0 ml/min；进样量为0.4 μl；分流比为80：1。离子源为电子轰击源（EI）；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；电子能量70 eV；电子倍增器电压1 382 V；接口温度270 ℃；溶剂延迟时间3 min；扫描范围40～550 amu。
       2.2.2   提取物化学成分分析  对总离子流图中各峰经质谱扫描后得质谱图，通过HPMSD化学工作站检索NIST98标准质谱图库进行确认各化合物；通过HPMSD化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算各化合物在提取物中的百分含量。见表1。
       表1  海南裂叶山龙眼叶分析结果（略）
       3  讨论
       
       从海南裂叶山龙眼的叶中共检出55个色谱峰，鉴定出20个化合物，占叶萃取物总量的89.78%，其中萜类6个，酯类5个，占萃取物总量的50.47%，其余有烷烃，激素、甾类、维生素、生物碱类等，含量超过5%的成分主要有邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（15.42%）；百秋里醇(13.86%)；二十九碳烷（11.37%）；1-脱氢睾酮（7.83%）；3,5-二烯豆甾烷（6.79%）；3-甲基二环［4.1.0］庚烷（5.18%）；(1.α.,2.β.,5.α.)-2,6,6-三甲基二环［3.1.1］庚烷（5.09%）。
       
       海南裂叶山龙眼叶超临界提取物体外多种细胞株筛选具有一定的细胞毒作用，其毒性来源的物质基础是什么还需要对其化学成分进行进一步研究。海南裂叶山龙眼叶超临界提取物中含量较高的萜类化合物中百秋里醇具有Ca2+拮抗作用［4］，含量次之的其它类化学成分的药理活性变化较大，如脱氢睾酮属于蛋白同化激素类，具有蛋白同化作用［5］，以及3,4-二氢-2,8-二甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)-2H-1-苯并吡喃-6-醇和维生素E具有的生育酚样作用等。因此进一步开发海南裂叶山龙眼时还要对其药理活性进行深入研究。（未完待续）
       【参考文献】
         　　［1］ 丘华兴,林有润. 中国植物志，第24卷［M］. 北京：科学出版社,1979：24.
       
       ［2］ 刘明生,何泉泉,靳德军,等. 海南裂叶山龙眼的化学成分研究［J］. 中国药学杂志,2005,40(12):893.
       
       ［3］ HE Q.-Q., LIU M.-S., JIN D.-J.，et al. Phenolic glycosides from leaves of Heliciopsis lobata［J］. J Asian Nat Prod Res ，2006，8(4)：373.
       
       ［4］ Kazuo I, Takeshi K. The screening of Chinese crude drugs from Ga2+ antagonist activity : identification of active principles from the aerial part of Pogostemon cablin and the fruits of Prunus mume ［J］. Chem Pharm Bull , 1989, 37(2): 345.
       
       ［5］ 李 凯,岑 瑛.蛋白同化激素及其应用［J］. 现代临床医学,2006, 32(4):306.