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       【摘要】 
       目的研究蒙成药沏其日甘-5的抗氧化作用。方法通过建立氧自由基（O-2·），羟自由基（·OH），脂质过氧化物（LPO）生成体系研究和探讨沏其日甘-5对自由基的清除和抑制作用。结果沏其日甘-5对O-2·的清除率（S%）是86.0，抑制率（I%）是82.9，对·OH的S%是84.1，I%是78.9。对LPO的生成也有一定抑制作用。结论沏其日甘-5在体外有很强清除和抑制自由基作用,是良好抗氧化剂。
       【关键词】  氧自由基； 羟自由基； 脂质过氧化物； 沏其日甘-5
       Scavenging and Inhibitory Effects of Mongolian Medicine Qiqirigan-5 Extract on Free Radicals
       WU Rina, XU Liang, SUN Fuxiang,WANG Zhimin, NA Renhua,LI D ali, DUAN Yunzhi
       （Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao ,Inner Mongolia 028042, China；Medical College, Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao 028041, China; The Railroad Hospital in Tongliao 028000,China）
       Abstract：ObjectiveTo evaluate the scavenging and inhibitory effects of Qiqirigan-5 extract on free radicals. MethodsThe O-2·, ·OH, and LPO formation systems were established,  to evaluate the scavenging and inhibitory effects of the extract.Results The scavenging and inhibiting effects of the medicineon free radical O-2 · were 86.0% and 82.9%, respectively; and the rates on ·OH were  were 84.1% and 78.9%, respectively. In addition, the medicine also has the above effects on the free radical LPO to some extent. ConclusionMongolian medicine Qiqirigan-5 has good scavenging and inhibitory effects on free radicals.It is one of good antioxidants.
       Key words：Oxygen free radical;   Malondialdehyde;   Hydroxyl radical;   The extract of Qiqirigan-5
       
       沏其日甘-5是蒙医常用药，主要功能是清热化痰，止咳。主治肺热痰多，久咳，喘促。主要成分是沙棘、木香、栀子、甘草、白葡萄干组成。临床上用予治疗肺部疾患，对缺氧性疾患疗效显著。本实验对其抗氧化作用进行研究。［1］
       1   材料与方法 
       1.1  药品和试剂沏其日甘-5由内蒙古蒙药股份有限公司生产，批号060810  1231。符合蒙成药制剂通则标准。经蒙药师鉴定为正品。抗坏血酸（Vit.C）,硫酸铜（CuSO4），硫脲，蛋氨酸（Net），核黄素（Vit.B2），四硝基唑兰（NBT），均为国产生化试剂。核糖核酸（DR），四乙氧基丙烷（TEP），硫代巴比妥酸（TBA）均为Sigma公司提供。
       1.2  沏其日甘-5提取液的制备取沏其日甘-5，烘干。称其一定量，在60～100℃温度下，用10倍量的蒸馏水提取2次，提取时间为120min/次，将提取液合并过滤。水定容至100ml计算出含量（μg/L）冰箱保存备用。
       1.3   羟自由基（·OH）生成体系的建立终体积为1.5 ml，其中磷酸盐缓冲液PB（pH 7.4）1.05 ml，1 mmol/L Vit.C 0.15 ml，1 mmol/L CuSO4 0.15 ml，1 mmol/L Cyt.C 0.15 ml，不同体积的沏其日甘-5提取液。标准对照加 0.5 mmol/L 硫脲10 μl。25℃水温25 min。于紫外分光光度计上，550 nm处读取光密度（OD）值。由Vit.C，PB，Cyt.C组成的体系的OD值为Cyt.C基础量（A1），在上述体系中加CuSO4的OD值为·OH氧化后剩余Cyt.C的量（A2），A1-A2为·OH氧化掉Cyt.C的量，可称·OH的生成量（C1）。上述体系加沏其日甘-5提取液后OD值（A3），A1-A3为经沏其日甘-5提取液作用后的·OH的量（C2），C1- C2/ C1×100%即为清除率（S%）［2］。
       1.4   O-2自由基生成（VB2-Met-NBT）体系的建立利用VB2光照后产生O2-·，使NBT变色的原理。取Met-NBT溶液3.8 ml，加VB20.1 ml，不同体积的沏其日甘-5提取液混合。在40瓦日光灯下，距离35 cm，光照30 min 测定光密度（OD），用同法制备的未经光照的做空白调零，用超氧化物歧化酶（SOD）做标准对照。这就是静态法测定清除率（S%），用动态法测定抑制率（I%）［3～4］。
       1.5    脂质过氧化物（LPO）生成体系的建立根据Fenton原理，采用Fe2+/H2O2体系产生的·OH自由基，诱导DR过氧化物的生成，加入沏其日甘-5提取液后，观察其抑制LPO的生成作用。用TBA显色，TEP做标准，计算过氧化物（丙二醛）的生成量［5］。
       2  结果
       2.1  沏其日甘-5 提取液对O-2·的清除和抑制作用在VB2-Met-NBT体系中，有清除和抑制O-2·的作用。存在剂量依赖性，随着沏其日甘-5提取液加入量的增加，而清除和抑制作用增强。当加入300 μg/ml时S%达86.0%。I%达82.9%。 见表1。
       2.2    沏其日甘-5提取液对·OH的清除和抑制作用在·OH自由基生成（Vit.C- CuSO4-Cyt.C）体系中加入沏其日甘-5提取液后，显示有很强的清除和抑制·OH的作用。当加入沏其日甘-5提取液达150 μg/ml时其清除和抑制· OH分别达84.1%，78.9%。见表1。
       2.3    沏其日甘-5提取液对LPO生成的抑制作用在实验中加入沏其日甘-5提取液0.05 ，0.1，0.15，0.2 ml，LPO生成量随着沏其日甘-5加入量的增加而减少。说明沏其日甘-5有抑制脂质过氧化物反应的作用。
       表1  沏其日甘-5提取液对O-2，·OH的清除和抑制作用（略）
       3  讨论
       
       人体内自由基种类很多，但是最重要的是O-2·，·OH，产生途径多、作用大。当体内O-2·和·OH产生和清除失衡时，造成自由基的堆积，引起抗氧化酶活性下降。过多的自由基攻击生物大分子，使细胞膜的结构和功能发生改变。这在心肌缺血、缺氧、再灌注损伤病理过程中表现最为明显。沏其日甘-5含有丰富的维生素、多种氨基酸，超氧化物歧化酶（SOD）以及黄酮类等生物活性物质。具有医疗和保健双重作用。沏其日甘-5提取液在VB2-Met-NBT体系抗O-2·自由基的清除率86.0%，抑制率为82.9%，显示了该药抗自由基作用。沏其日甘-5提取液在Vit.C- CuSO4-Cyt.C体系中对·OH的清除率为84.1%，抑制率为78.9%，清除率作用大于抑制作用。细胞有氧代谢过程中产生大量活性氧，如O-2·和H2O2，H2O2经铁离子介导的Haber-Weiss反应生成·OH，·OH是体内损伤最为严重的自由基。·OH的大量堆积，可促进衰老、肿瘤、辐射损伤等病理过程［6］。因此沏其日甘-5通过抗氧化作用达到治疗目的。
       
       LPO的生成是自由基损伤最重要的产物，作者利用Fe2+/H2O2诱导DR产生LPO的终产物——丙二醛，来研究沏其日甘-5抗LPO的作用，实验结果显示当沏其日甘-5提取液加150 μg/ml时抑制率可达64%。
       
       综合上述，沏其日甘-5提取液在体外有很强清除和抑制自由基作用，是良好抗氧化剂。但确切的药理作用及作用机制需要进一步的实验。
       【参考文献】
         　　［1］ 内蒙古卫生厅.内蒙古蒙成药标准［S］.赤峰:内蒙古科技出版社,1989：210.
       
       ［2］ 王成莲,刘 莉.比色法测定抗坏血酸体系产生的·OH［J］.生物化学与生物物理学进展，1989,16(6):433.
       
       ［3］ 陈 奇.中药药理学研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社,1993:953.
       
       ［4］ 鲁纯素,赵会英,陈雅研,等.异喹啉生物碱类化合物对羟自由基的清除作用［J］.北京医科大学学报,1998,20（6）:45.
       
       ［5］ Agil A.Fuler CJ.Jdial Susceptibility of Plasma no Ferrous Iron/Hydrogen Peroxide-mediated oxidation; Demanstitration of a Possible Fenton recto on Cline ［J］.Chem.1995:41/222.
       
       ［6］ 莫 简.医用自由基生物学导论［M］.北京:北京出版社,1991:21.