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       【摘要】 
       目的建立辛兰芷喷雾剂的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对辛夷、连翘、白芷进行定性分析；应用高效液相色谱(HPLC)法对腺苷进行含量测定，流动相为甲醇-水(10:90)；流速1ml·min-1；检测波长260nm。结果薄层色谱法可准确地对辛夷、白芷、连翘进行定性鉴别；腺苷在0.08～4.0 μg范围内线性关系良好（r=0.999 6）；平均回收率为99.63%(RSD=1.79%,n=6)。结论该方法简便、快速、重复性好，可作为该辛兰芷喷雾剂的质量控制标准。
       【关键词】  辛兰芷喷雾剂； 质量标准； 薄层色谱法； 高效液相色谱法
       Quality Standard for Xinlanzhi Spray
       ZHAO Liangyi, SHAO Yanxin,XIE Xiaoyan, LI Dongmei, LU Yi,WEN Junxia
       （Hebei Provincial Chest Hospital,Shijiazhuang 050041,China；Hebei Institute for Drug Control,Shijiazhuang 050011,China）
       Abstract：ObjectiveTo establish quality standard for Xinlanzhi Spray. MethodsFlos Magnoliae,Forsythia Suspensa,Radis Angelicae Dahuricae were identified through TLC. The content of adenosine was assayed in Xinlanzhi Spray by HPLC.The mobile phase consisted of methanol-warter(10:90);the flow rate was 1.0 ml/min;the UV detection wavelength was 260nm.ResultsFlos Magnoliae, Forsythia Suspensa,Radis Angelicae Dahuricae could be indentified by TLC. There was good linearity of adenosine within the range of 0.08～4.0μg (r=0.999 6).The average recovery was 99.63% with of RSD=1.79%(n=6).ConclusionThe method is simple,accurate,repeatable, and can be used as the quality control of Xinlanzhi Spray.
       Key words：Xinlanzhi spray;   Quality standard;   TLC;   HPLC
       
       辛兰芷喷雾剂是由辛夷、板蓝根、白芷、连翘、薄荷等药味组成的中药复方制剂，药材经过浸泡、煎煮、蒸馏、回流、醇沉、萃取等制剂工艺，提取有效成分，制备成喷雾剂型。具有祛风发散、宣肺通窍、清热解毒等功效，对流感病毒、普通感冒病毒有明显抑制作用。用于风热感冒、流感、温病发热及上呼吸道感染等病毒感染性疾病。经长期临床应用，疗效显著。为控制本品的质量，对本复方制剂的质量标准进行了研究，采用TLC法对辛夷、白芷、连翘进行鉴别，采用HPLC法对腺苷进行含量测定。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器Waters2695高效液相色谱仪，四元泵、自动进样器、紫外检测器，Millennium32数据处理系统（美国Waters公司）；939薄层制板器(重庆贝可得公司)；AE240型电子天平（梅特勒仪器上海有限公司）。
       1.2  试药木兰脂素，连翘苷，欧前胡素，腺苷对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号分别为110882-200504，110821-200609，110826-200511，110879-200202），所用药材（购于河北省药材公司）；辛兰芷喷雾剂（河北省胸科医院制剂室自制）；硅胶G、硅胶GF254、硅胶H（青岛海洋化工厂生产）,流动相所用的试剂为色谱纯；其它试剂、试药均为分析纯；水为重蒸馏水。
       2  方法与结果
       2.1  定性鉴别
       2.1.1  辛夷的鉴别 取本品20 ml用氯仿萃取4次，15 ml/次，合并萃取液，蒸干，残渣加氯仿2 ml溶解，作为供试品液。另取木兰脂素加氯仿制成每毫升含1 mg的溶液作对照品溶液。按处方配比制得不含辛夷的样品20 ml，照供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。另取辛夷药材1g，加乙醇10 ml回流40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿2 ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯(7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100℃烘烤至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，分别显有相同颜色的斑点，阴性对照品色谱无此斑点出现。见图1A。
       2.1.2  白芷的鉴别 取本品30 ml，用乙醚萃取3次，20 ml/次，合并乙醚液，将乙醚蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml溶解，作为供试品溶液；另取欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含1 mg的溶液作为对照品溶液；再取缺白芷的阴性样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液；取白芷药材2 g，加乙醚20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml溶解，作为对照药材溶液；取上述4种溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙醚（3∶2）为展开剂，在25℃以下展开，取出晾干，置紫外灯（365 nm）下检视，在供试品色谱中，与对照品、对照药材相应的位置上，分别显相同颜色的斑点，阴性对照品无此斑点。见图1B。
       图1  薄层色谱图（略）
       2.1.3  连翘的鉴别 取本品30 ml，用醋酸乙酯萃取3次，每次20 ml，合并醋酸乙酯液，将醋酸乙酯层蒸干，残渣溶于30%乙醇溶液5 ml中，通过D101型大孔树脂(内径l cm，长25 cm)，用30%乙醇溶液100 ml洗脱，弃去洗脱液，继用50%乙醇溶液100 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；再取连翘苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液；再取缺连翘的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液；另取连翘药材2 g，加水30 ml煎煮1 h，滤过，滤液加乙醇使含醇的浓度为60% ，静置，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解后，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸（85∶10∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，与对照品、对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点，阴性无此斑点。见图1C。
       2.2  含量测定
       2.2.1  色谱条件 色谱柱Kromasil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为甲醇-水(10:90)；流速1 ml·min-1；检测波长260 nm；进样量10 μl；柱温为30℃。
       2.2.2  对照品溶液的制备 精密称定腺苷对照品20.00 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液(含腺苷400 μg·ml-1)。
       2.2.3  供试品溶液的制备 精取本品30 ml，水浴蒸干，残渣加少量甲醇溶解，滤过，滤液转移至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液。取缺板蓝根的阴性样品，依上述制备方法，制成阴性供试品溶液。
       2.2.4  系统适用性实验 在“2.2.1”项的色谱条件下，腺苷峰形良好，保留时间24 min左右，理论塔板数按腺苷峰计算，不低于3 500，与相临色谱峰的分离度大于3，不对称因子0.97～1.05。对照品、供试品和阴性供试品溶液，分别进样测定的色谱图见图2。
       图2  高效液相色谱图（略）
       2.2.5  标准曲线的制备 精密吸取腺苷对照品溶液0.2，0.5 ，1.0 ，2.0，5.0，10.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀。在选定的色谱条件下，依次吸取10 μl进样。每一浓度进样两次，求峰面积平均值。以腺苷的两次峰面积平均值(Y)为纵坐标，腺苷的进样量(X)为横坐标绘制标准曲线。回归方程为:Y= 51 638.712X -178.469 (r =0.999 6)。结果表明，腺苷的进样量(X)在0.08～4.0 μg 范围内与峰面积(Y)呈良好的线性关系。
       2.2.6  精密度实验分别精密吸取8 μg·ml-1和400 μg·ml-1两种浓度的腺苷对照品溶液，在上述色谱条件下进样10 μl，分别进样6次，记录色谱图，得两种浓度下的峰面积，其相对标准差RSD分别为2.12%和1.97%。
       2.2.7  稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别在0，1，2，4，6，8 h，进样测定，测得样品峰面积的相对标准差RSD为2.16%，表明样品溶液在8 h内稳定。
       2.2.8  重复性实验 取同一批号的样品，依“2.2.3”项下的方法制成供试品溶液，依“2.2.1”项下的色谱条件，进样6次进行测定，测得样品含量的相对标准差RSD为1.93%，说明此方法重复性良好。
       2.2.9  加样回收率实验取已知腺苷含量的样品，依法配制供试品溶液，分成6份，每份5 ml，分别加入不同浓度的腺苷对照品溶液5ml，对照品溶液的浓度分别约相当于样品含量的80%，100%，120%，每种浓度各两份，分别进样测定。结果见表1。
       2.2.10  样品含量测定 取6批样品，分别依照“2.2.3”项下的方法配制供试品溶液，依“2.2.1”项下的色谱条件，进样测定，每批样品分别进样测定6次，测得供试品溶液中腺苷的峰面积，并用外标法计算含量。结果见表2。
       表1  回收率实验结果（略）
       表2  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
       
       在定性鉴别的前期实验中，曾参考文献［2］的方法鉴别辛夷，效果不太理想，把木兰脂素作为辛夷的特征成分，通过试用多种不同的展开剂系统，以本实验所采用的方法较好，木兰脂素斑点Rf值适宜，所得色谱图比较理想，方法重现性好，且具有一定的专属性。白芷中的香豆素类物质欧前胡素和异欧前胡素是白芷药材的指标成分［3］，实验以欧前胡素为对照品，利用极性较小的有机溶剂石油醚或乙醚萃取制剂中白芷的有效成分欧前胡素，进行薄层色谱鉴别，均获得了满意的效果。连翘的功效与本制剂的功效基本一致，连翘苷为连翘的特征成分，参考文献［4］的方法，对连翘苷进行薄层鉴别，方法重复性好，结果可靠。
       
       含量测定的实验中，参考文献［5，6］，用高效液相色谱法测定板蓝根中靛蓝、靛玉红的含量，实验结果并不理想，结果重现性较差，可能是由于本制剂在制备过程中，板蓝根采用水煎煮方法提取，靛蓝、靛玉红均为脂溶性成分，制剂中靛蓝、靛玉红成分的含量不太稳定。同时考虑到板蓝根中靛蓝、靛玉红的质量分数仅为百万分之几，腺苷在板蓝根中含量较高(约0.2 mg·g-1)［7］。腺苷为水溶性成分，结合制剂的制备工艺，选择腺苷作为测定成分，此方法操作简便，专属性强，重现性好，阴性无干扰，获得了满意的效果。
       
       样品的含量测定结果中，各批之间含量相差较大，这可能与药材的来源及制剂工艺过程的质量控制有关，但含量均在30～40μg·ml-1之间，可把含腺苷的量不低于30μg·ml-1作为本制剂的含量控制标准。实验结果表明，本文所建立的定性定量方法稳定、可靠，能有效控制该制剂的内在质量，为该制剂的进一步研究开发奠定了基础。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录ⅥB.
       
       ［2］ 狄留庆,范欣生,赵晓莉,等.复方辛夷口服液的质量标准研究［J］.南京中医药大学学报,2005,21（2）:111.
       
       ［3］ 聂 红,孟兰贞,韩 海,等.HPLC测定白芷石油醚部位欧前胡素和异欧前胡素的含量［J］.中华实用中西医杂志,2005,18(10):1522.
       
       ［4］ 张军平,黄小兰,乐海平.抗病毒口服液的质量标准研究［J］.中成药,2004,26(9):附14．
       
       ［5］ 罗巍伟,贺英菊,王 凌,等.HPLC测定板蓝根提取物中靛蓝和靛玉红的含量［J］.华西药学杂志,2004,19（6）:455.
       
       ［6］ 赵志军,王连水,张 楠.高效液相色谱法测定复方板蓝根颗粒中靛玉红含量［J］.中国药业,2005,14（2）：35.
       
       ［7］ 许润春,杨 明,苏艳桃.HPLC测定板蓝根中腺苷含量［J］.中成药,2005,27（6）:742.