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       【摘要】 
       目的探讨藏药桑当抗痛风作用机理。方法考察藏药桑当对单胺类神经递质以及局部组织中炎性细胞因子的影响。结果藏药桑当具有提高中枢5-HT及DA含量和降低外周5-HT，DA含量的趋势，能够显著降低局部组织中TNF-α，L-1β，IL-6的含量（P<0.01）。结论藏药桑当抗痛风作用机理与其能够调整体内单胺类神经递质的含量和降低局部炎性细胞因子的含量有关。
       【关键词】  藏药桑当； 痛风性关节炎； 作用机理； 单胺类神经递质； 细胞因子
       The Anti-gout Mechanism Research of Tibetan Medicine Sangdang
       LI Huifang, CHENG Shenghui*,SUN Xiaobo, QIN Xuhua, DAI Zhuqing, LI Zulun
       （Shanxi University of Traditional Chinese Medicine, Taiyuan 030024, China;Pharmacological College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China）
       Abstract：ObjectiveTo investigate the anti-gout mechanism of Tibetan medicine Sangdang.MethodsThe influence of Sangdang on monoamine neurotransmitter and inflammation cytokine was studied.ResultsTibetan medicine Sangdang could reduce the contents of 5-HT and DA in serum and the contents of TNF-α,IL-1β ，IL-6 in joint(P<0.01); increase the contents of 5-HT and DA in nerve centre. ConclusionThe anti-gout mechanism of Sangdang is to adjust the content of 5-HT and DA, and decrease the contents of TNF-α，IL-1β ，IL-6 in joint.
       Key words：Tibetan medicine Sangdang;  Gouty-arthritis;  Monoamine neurotransmitter;  Inflammation cytokine
       
       痛风是由于嘌呤代谢紊乱导致血尿酸水平增高，和/或尿酸排泄减少而导致尿酸盐在组织沉积的疾病，其临床特点为高尿酸血症、尿酸盐沉积所导致反复发作的急、慢性关节炎和软组织损伤，尿酸性肾结石所致的痛风性肾病［1］。近年来随着人们生活水平的提高，嘌呤类食物摄入的增多,痛风的发病率逐年升高。《晶珠本草》记载藏药桑当有“干黄水”之功［2］，主要用于关节黄水增盛引起的关节红肿疼痛，是藏医药常用来治疗痛风的药物。前期研究已经表明藏药桑当具有良好的降低血尿酸和治疗痛风性关节炎作用［3，4］。本研究拟从单胺类神经递质和局部炎性细胞因子方面探讨桑当的抗痛风作用机理。
       1  材料与仪器
       1.1  动物SPF级SD大鼠，雄性，180～220 g ，四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK(111)2004-16。
       1.2  用药藏药桑当购自成都五块石药材市场，经过成都中医药大学卢先明教授的鉴定。实验用药为桑当的水提液(0.4 g/ml)和醇提液(0.4g/ml)的混合物。治疗痛风性关节炎阳性药吲哚美辛片，由江苏亚邦药业集团股份有限制造分公司生产，批号0404111。
       1.3  试剂尿酸，SIGMA公司生产，批号050K08822；标准多巴胺(DA0：FLUKA公司生产；去甲肾上腺素(NE)：SERVA公司生产；5-羟色胺(5-HT)硫酸肌酐：中国医药公司上海化学试剂采购站进口分装；其余试剂均为进口或国产分析纯。大鼠TNF-αELISA试剂盒，批号：041025，晶美生物工程有限公司进口分装；大鼠IL-1β ELISA试剂盒，上海森雄科技实业有限公司进口分装，批号141108；大鼠IL-6ELISA试剂盒，批号：041008，晶美生物工程有限公司进口分装。
       1.4  仪器960CRT荧光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；Thermo Labsystems Multikan MK3全自动酶标仪； Thermo Labsystems Wellwash 4MK2全自动洗板机。
       2  方法与结果
       
       取44只SD大鼠随机分为4组，即空白组、模型组、阳性药物（吲哚美辛片0.02 g·kg-1）组和藏药桑当组（1.2 g·kg-1），每组11只。造模前2 d各给药组开始灌胃给药，1次/d。阳性药物组和藏药桑当组按表1剂量给药，空白组和模型组灌以同体积生理盐水灌胃。除空白组外，各组双足均按照“2.1.2”项下造模。造模后各给药组连续给药3 d。
       2.1  痛风性关节炎模型制作
       
       2.1.1  尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备［5］取194 ml蒸馏水加6 ml NaOH(1M),煮沸后加1 g尿酸，用1N HCl，调pH至7.2，搅拌冷却，贮存于4℃冰箱中24 h，去上清液，用滤纸将沉淀物水份吸干，干燥即可得尿酸钠结晶。取1 250 mg尿酸钠结晶，加入45 ml生理盐水，同时加入5 ml吐温80，加热搅拌，配成50 ml尿酸钠溶液备用。
       2.1.2  模型制作用6号注射针在受试大鼠右侧踝关节背侧从45°方向插入胫骨肌腱内侧，将0.2 ml尿酸钠溶液(2.5 mg/100 ml)注入踝关节腔。
       2.2  藏药桑当对单胺类神经递质的影响［6］用药3d(72h)后，各组大鼠股动脉取血，分离血清，按化学荧光法测定单胺类神经递质。随后断头取脑，迅速在冰台上分离下丘脑，称重，锡箔折叠密封包裹，放入－80℃低温冰箱保存备测，按化学荧光法测定单胺类神经递质含量。实验结果表明：
       
       与空白组比较，模型组中枢5-HT及DA的含量有所下降，其中5-HT的含量明显降低（P<0.05）。与模型组比较，阳性药物组可以显著提高中枢5-HT及DA的含量（P<0.05）；与模型组比较，藏药桑当具有提高中枢5-HT及DA的含量的作用趋势,但无统计学意义。见表1。
       
       与空白组比较，模型组外周5-HT及DA的含量有所升高，其中5-HT的含量升高明显（P<0.05）。与模型组比较，阳性药物组可以显著降低外周5-HT的含量（P<0.05）；与模型组比较，藏药桑当具有降低外周5-HT及DA的含量的作用趋势,但无统计学意义，见表2。
       
       与空白组比较，造模前后，中枢及外用NE含量无明显变化。与模型组比较，阳性药具有提高中枢NE含量的趋势，但无统计学意义，桑当组中枢及外用NE含量未见明显变化。
       表1  藏药桑当对痛风性关节炎模型大鼠中枢单胺类神经递质的影响（略）
       与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；n=11
       表2  藏药桑当对痛风性关节炎模型大鼠外周单胺类神经递质的影响（略）
       与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；n=11
       2.3  藏药桑当对局部炎性细胞因子的影响用药3 d(72 h)后，大鼠股动脉放血处死，置于有冰块的干燥托盘内快速分离出左足踝关节周围软组织，制成匀浆，取上清液作样本测内含物TNF-α，IL-1β，IL-6的含量（ELISA试剂盒法）。实验结果表明，与空白组比较，模型组TNF-α，IL-1β ，IL-6的含量明显升高，但无统计学差异。与模型组比较，阳性药物组可以显著降低痛风性关节炎模型大鼠局部TNF-α，IL-1β ，IL-6的含量（P<0.05）；藏药桑当可以显著降低痛风性关节炎模型大鼠局部TNF-α，IL-1β ，IL-6的含量（P<0.01）。见表3。
       表3  藏药桑当对痛风性关节炎模型大鼠局部细胞因子的影响（略）
       与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；n=11
       3  结论
       
       实验结果表明藏药桑当具有升高中枢5-HT及DA含量和降低外周5-HT及DA含量的趋势，能够显著降低局部组织中TNF-α，IL-1β，IL-6的含量（P<0.01）。藏药桑当发挥抗痛风作用与其能够调整体内单胺类神经递质的含量和降低局部炎性细胞因子的含量有关。
       
       急性痛风的疼痛非常剧烈，犹如“虎咬之状”，难以忍受。神经递质作为神经系统传导的媒介，在疼痛的产生过程中均起着举足轻重的作用。与疼痛密切相关的神经递质主要有单胺类、氨基酸类、肽类等。目前研究较为成熟的是单胺类神经，所以在本次实验中，选择单胺类神经递质作为指标。单胺类神经递质主要包括5-HT，NE，DA，它们既是神经递质，又能直接致痛。在疼痛过程中参与了致痛与镇痛两方面的作用。在外周，它们均是致痛因子，通过第二信使作用于局部和旁分泌，刺激感觉神经末梢而产生疼痛。单胺类神经递质在中枢具有兴奋与抑制两种效应，但以抑制为主，故能提高痛阈。实验结果也表明，造模后，模型组中枢5-HT及DA的含量下降。藏药桑当具有提高中枢5-HT及DA的含量的作用趋势，从而可能发挥提高痛阈，中枢镇痛的作用。与空白组比较，模型组外周5-HT及DA的含量有所升高。与模型组比较，藏药桑当组5-HT及DA的含量有所降低，从而减轻致痛作用。
       
       痛风急性发作是尿酸钠结晶在关节周围组织沉积引起的急性炎症反应。尿酸钠结晶刺激局部组织产生大量TNF-α，IL-1β，IL-6等炎性细胞因子引起局部血管扩张、通透性增加、渗出、水肿、白细胞聚集、发热等炎症反应。本实验也表明造模后局部关节软组织中TNF-α，IL-1β，IL-6含量增高，而使用桑当后能显著降低痛风性关节炎模型大鼠局部TNF-α，IL-1β，IL-6的含量，从而减轻局部“红、肿、热、痛”炎症反应，发挥抗痛风的作用。
       【参考文献】
         　　［1］ 苗志敏.痛风病学［M］.北京:人民卫生出版社，2006：10.
       
       ［2］ 帝玛尔·丹增彭错.晶珠本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1986.
       
       ［3］ 孙晓波,李会芳,代竹青,等. 藏药桑当抗痛风作用的实验研究［J］. 四川中医,2005，23(6):19.
       
       ［4］ 孙晓波,李会芳,代竹青. 藏药桑当的抗炎镇痛实验研究［J］. 四川中医,2005，23(4):18.
       
       ［5］ 徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2003:905.
       
       ［6］ 陈文照,林 坚,金 策,等.痛风宁对尿酸钠致大鼠关节炎下丘脑单胺类神经递质的影响［J］.中国中医骨伤科杂志，2001，9（1）：17.