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       【摘要】 
       目的从川乌植物的根和茎中分离内生真菌，并进行分类鉴定。方法经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定。结果川乌植物根和茎中分离获得61株内生真菌，归属为2纲，5目，6科，17个属。结论川乌植物不同部位内生真菌的数量、组成与种群分布存有差异； 从川乌植物中分离内生真菌尚属首次报道。
       【关键词】  川乌； 内生真菌； 分离； 分类鉴定
       Isolation and Identification of Endophytic Fungi from Radix Aconiti
       LI Zhiying，CHEN Youwei，YANG  Liyuan，LI Shaolan，WU Shaohuao
       (Yunnan Institute of Microbiology,Yunnan University,Kunming 650091,China)
       Abstract：ObjectiveTo isolate and identify some endophytic fungi from the root and stem of Radix Aconiti. MethodsIdentification of endophytic fungi from Radix Aconiti was carried out by morphology. ResultsSixty-one strains of endophytic fungi were isolated from Radix Aconiti，which belonged to seventeen genera，six families and five orders. ConclusionThe diversities made obviously a great difference in quantity, composition and distribution of the endophytic fungi from Radix Aconiti.
       Key words：Radix Aconiti；  Endophytic fungi；  Isolation；  Identification
       
       川乌（Radix Aconiti），别名鹅儿花、铁花、五毒。该植物性热，味辛、苦；具大毒。其主要成分为双酯型二萜类生物碱，如乌头碱（Aconitum）、中乌头碱（Misaconitine）、次乌头碱（Hypaconitine）等。乌头碱具有强心、镇痛、抗肿瘤、调节免疫等的作用，临床上主要用于治疗恶性肿瘤、类风湿性关节炎、风湿性关节炎、痛风等慢性疾病。现代止痛新药多含有乌头类生物碱，对慢性疼痛的止痛效果并不低于西药，说明乌头类生物碱在缓解疼痛疾病方面已经引起临床医学的关注。与此同时，药理学研究还表明乌头碱在抗肿瘤方面也具有良好的临床应用前景［1］。
       
       目前，植物内生菌的研究国内外已经成为热点领域，以往对川乌植物的研究主要针对植物化学成分的报道为多，而对该植物内生真菌的发现、种类组成、数量与分布和种群多样性及其代谢活性物质的研究报道至今未见。为此，我们对川乌植物内生真菌作了系统的研究，包括菌株分离、分类学地位、种群组成、数量与分布、代谢活性产物的分离等。本文就川乌植物内生真菌分离和分类鉴定的资源学方面研究报道如下。
       1  材料
       1.1  植物样品活体植物川乌（Radix Aconiti）采自云南省会泽县大海乡中草药种植基地，海拔高度3 150 m。
       1.2  培养基分离培养基：PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基），临用时每毫升培养基中加80单位的青霉素以抑制细菌生长。
       
       分类鉴定培养基：PDA培养基和促孢培养基（KH2PO4，MgSO4·7H2O，KNO3，KCl，葡萄糖，蔗糖）。
       2  方法
       2.1  内生真菌的分离首先用自来水冲洗净川乌植物的根、茎表面的泥沙，接着进行表面消毒［2］，切成0.3 cm×0.3 cm大小的片段种植在PDA培养基里，置于(28±1)℃的温箱中静止培养。培养3～12 d后，可见有菌丝生长，挑取植物组织周围的菌丝转接入PDA试管斜面，经纯化即得川乌植物内生真菌。
       2.2  内生真菌的分类鉴定采用插片培养方法，对分离获得的内生真菌进行显微形态特征的观察、结合形态学分类方法，鉴定检索参照文献［3,4］。
       3  结果
       3.1  川乌植物内生真菌的种群组成从川乌植物中分离获得61株内生真菌，经显微形态观察，分属于2纲，5目，6科，17属（见表1）。
       表1  川乌植物内生真菌种群组成（略） 
       从表1还可看出，在分离获得的61株内生真菌中，毛壳菌属Chaetomium最多，为12株，占菌株数的19.67%；束丝菌属Ozonium有6株，占9.84%；葡萄孢属Botrytis、匐柄霉属Stemphylium、交链孢霉属Alternaria和镰孢霉属Fusarium均为5株，占菌株数的8.20%。这6属为川乌植物内生真菌的优势属，占总数的62.30%。槲果孢属Balanium、亚黑团孢属Periconiella和枝孢属Cladosporium均只有1株，只占1.64%。
       3.2  川乌植物内生真菌在植株不同部位的分布在分离获得61株乌头植物内生真菌中，根部分离所得的内生真菌在数量和种属上都是最多的，有41株（占菌株数的67.21%）14个属（占17个属的82．35%）；其余20株在茎部获得(占菌株数的32.79%)，分属9个属（占52.94%）。见表2。
       
       从表2可以看出，毛壳菌属为川乌植物根部的内生真菌的优势菌属，有11株，占根部的26.83%；川乌植物茎部的内生真菌的优势菌属为匐柄霉属(5株占茎部的25%)；拟鞘孢属Chalaropsis、枝孢属Cladosporium、指轮枝孢属Stachylidium、茎点霉属Phoma、组丝核菌属Phacodium、丝葚霉属Papulospora和毛霉属Mucor共8个属只在根部分离得到；而匐柄霉属、槲果孢属Balanium和亚黑团孢属Periconiella仅在茎部有分布。
       表2  川乌植物内生真菌的数量与种类分布（略） 
       4  讨论
       
       鉴于川乌化学成分的特点与其它有毒植物不同，川乌植物内生真菌种群组成也表现出多样性特征。由表1～2结果表明，根部种群与茎部种群不同,前者主要由毛壳菌属、葡萄孢属、拟鞘孢属Chalaropsis、束丝菌属、毛霉属等14个属种组成,后者则由匐柄霉属、交链孢霉属、镰孢霉属等9个属种构成,造成这样的现象可能与乌头碱成分的种类有关。
       
       在数量上，川乌植物分离获得的内生真菌数量根部明显多于茎部组织，可见川乌植物内生真菌种群数量的多少与该植物有毒成分含量大小有关。
       
       研究表明,毛壳菌属和匐柄霉属不仅是川乌植物内生真菌的优势种群，同时也分别是川乌植物根部和茎部内生真菌的优势属种。在川乌植物根部和茎部分离获得的内生真菌在数量、分布和种群上都存有差异，表明川乌植物内生真菌的数量和种群的多样性特点。
       
       致谢：云南会泽县大海乡中草药种植基地提供植物样品，在此表示感谢。
       【参考文献】
         　　［1］ 符华林.我国乌头属植物的研究概况［J］.中药材，2004，27(2)：149.
       
       ［2］ 李治滢，杨丽源，周 斌，等.灯细辛内生真菌的研究Ⅰ：菌种分离及其分类鉴定［J］.云南大学学报，2003，25（1）：65.
       
       ［3］ 魏景超.真菌鉴定手册［M］.上海：上海科学技术出版社，1979.
       
       ［4］ H.L巴尼特，B.B亨特（著），沈崇尧（译）.半知菌属图解［M］.北京：科学出版社，1977.