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       【摘要】 
       目的研究丹皮酚不同途径给药后在清醒大鼠体内的药代动力学。方法大鼠分别灌胃（ig）和静脉注射（iv）丹皮酚10 mg/kg，于给药后不同时间采集血样，HPLC法测定血药浓度，DAS 2.0软件计算药动学参数。结果大鼠ig和iv丹皮酚后，AUC0-∞为（18.13± 4.78）和（62.70± 6.05）mg·L-1·min-1，t1/2z 分别为（23.37±8.73）和（52.01±11.70）min，MRT0-∞分别为（28.07± 8.68）和（47.37± 7.45）min；ig丹皮酚的Tmax和绝对生物利用度分别为（5.0± 0.00）min和28.92%。结论不同给药途径丹皮酚的体内药代动力学过程不同，丹皮酚口服生物利用度低。
       【关键词】  丹皮酚； 高效液相色谱； 药代动力学； 给药途径； 生物利用度
       Pharmacokinetic Features and Absolute Bioavailability of Paeonol in Conscious Rat
       MA Liyan，MIAO Jianhua，XU Xudong，TANG Binglan，ZHANG Qi
       （Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences，Beijing 100094，China；Guangxi Branch, Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences，Nanning 530023， China）
       Abstract：ObjectiveTo study pharmacokinetic features of paeonol after intragastric（ig）and intravenous（iv）administration to conscious.MethodsPaeonol was administered ig and iv in single dose(10 mg/kg).Blood samples were collected at intervals after each administration. Plasma concentration of paeonol was detected by HPLC. Pharmacokinetic parameters were calculated by pharmacokinetic program DAS 2.0 in which noncompartmental model was chosen. ResultsPharmacokinetic parameters for paeonol following intragastric and intravenous administration in conscious rat were as follows: AUC0-∞ were（18.13± 4.78） and （62.70± 6.05）mg·L-1·min-1. t1/2z were（23.37±8.73）and（52.01±11.70）min. MRT0-∞ were（28.07±8.68）and（47.37±7.45）min. After intragastric administration, Tmax and absolute bioavailability were（5.0± 0.0）min and 28.92%. ConclusionPharmacokinetic processes of paeonol are different after administered ig or iv. Absolute bioavailability of paeonol for ig is low.
       Key words：Paeonol；  HPLC；  Pharmacokinetics；  Route of administration；  Bioavailability
       
       丹皮酚(Paeonol)又称牡丹酚，化学结构为2-羟基-4-甲氧基苯乙酮，是一种具有芳香气味的白色针状结晶，熔点50℃。丹皮酚的邻位羟基可与酮的羰基形成分子内氢键，具有挥发性。近年研究发现，丹皮酚具有镇静、催眠、解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化及抗高血压病、抗心律失常、抗缺血再灌注性损伤、抗动脉粥样硬化等药理作用［1～6］。丹皮酚常被作为六味地黄丸、金匮肾气丸等中成药的质量控制标准。本文通过对不同途径（灌胃和静脉注射）给药后丹皮酚在清醒大鼠体内药动学的研究，旨在探索其在动物体内吸收、分布、代谢和排泄的规律。
       1   器材
       1.1  仪器与试剂美国Waters公司高效液相色谱仪，包括600型高压泵、Waters 717自动进样器、486多波长紫外检测器、Empower Pro色谱工作站。丹皮酚注射液（宁波天真制药有限公司，批号20060801，纯度100.6%），丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号110708-200505，纯度96．4％)，苯乙酮（国药集团化学试剂有限公司，批号W20060925，纯度≥99.5%），甲醇、乙腈(色谱纯，美国Honeywell International Inc.)，四氢呋喃（色谱淋洗，北京化学试剂公司），水为超纯水。
       1.2  动物清洁级Wistar大鼠，雄性，体重260～300 g，由中国医学科学院实验动物中心提供（合格证号：SCXK-京-2005-0013）。
       2   方法
       2.1   色谱条件Merck公司Lichrospher100 RP-18 (4．0 mm×250 mm，5 μm) 色谱柱；柱温25℃ ；流动相为甲醇-四氢呋喃-水-磷酸（62∶6∶32∶0.1）；流速0.7 ml/min；检测波长275 nm；进样量20 μl。
       2.2  溶液配制
       2.2.1  内标溶液配制用乙腈制成5 μl/ml的苯乙酮溶液，4℃避光保存。
       2.2.2  对照品溶液配制用乙腈制成1 mg/ml的丹皮酚储备液，再以乙腈稀释成各种浓度的丹皮酚对照品溶液。
       2.3  血浆样品的处理精密量取血浆样品100 μl，加入含内标苯乙酮（5 × 10-4  μl/ml）的乙腈200 μl，涡旋混匀20 s，室温静置15 min，3 000 r/min离心5 min，弃沉淀；上清液与50 mg NaCl充分混匀，室温静置20 min后以3 000 r/min离心5 min，取上层有机相约100 μl置于进样瓶中，HPLC自动进样。
       2.4  实验方案大鼠在乙醚麻醉下，分离右侧颈静脉，插管；导管经皮下从颈背部引出固定，检查血流通畅后，缝合伤口，于手术次日进行实验。大鼠禁食不禁水12 ～18 h后，采用静脉注射（iv）或灌胃（ig）途径给予丹皮酚10 mg/kg。ig的丹皮酚制剂中含0.5%羧甲基纤维素钠。分别在给药后2，5，10，15，20，30，45，60，120，180和240 min，经颈静脉插管取血250 μl于肝素化的试管中，离心分离血浆，HPLC测定各血浆样品中丹皮酚浓度。
       2.5   数据分析所有实验数据皆以±s表示。血药浓度数据用药动学软件DAS 2.0处理，估算经不同途径给药后丹皮酚在大鼠体内的药代动力学参数。生物利用度按公式F= AUC 0→∞（ig）/ AUC 0→∞(iv) × 100%计算。
       3  结果
       3.1  方法选择性见图1，丹皮酚与内标峰形尖锐，分离良好，无杂峰干扰，保留时间分别约为8.3和6.1 min。
       图1  大鼠血浆中丹皮酚色谱图（略）
       3.2  标准曲线与最低定量浓度精密量取大鼠空白血浆100 μl，于1.5 ml离心管中，分别精密加入不同量的丹皮酚对照品溶液，制成含丹皮酚浓度分别为15.63，31.25，62.50，125，250，500，1 000，2 000，4 000 ng/ml的系列溶液，按“2.3”项方法处理血浆样品，以丹皮酚峰面积对内标峰面积比值（Y）为纵坐标、丹皮酚血浆浓度(C)为横坐标进行线性回归，得直线方程Y=0.001 9C-0.009 6(r=0.999 9)。结果表明，在15.63～4 000 ng/ml范围内，血浆中丹皮酚浓度与峰面积比有良好的线性关系。以信号／噪音>10计算，丹皮酚的最低定量限为15.63 ng/ml。
       3.3  精密度实验分别制备丹皮酚浓度为62.50，500，4 000 ng/ml含药血浆，测定日内的相对标准差（RSD）和连续3 d的RSD，结果表明，低、中、高3种浓度丹皮酚的日内RSD分别为7.50%，2.59%和1.14%，日间RSD分别为9.64%，3.98%和2.57%。
       3.4   绝对回收率实验分别制备丹皮酚浓度为62.50，500，4 000 ng/ml的含药血浆进行回收实验。3种浓度的回收率分别为（104.17±4.81）%，（99.56±3.44）%和（96.60±0.70）%。
       3.5   不同途径给药后丹皮酚在大鼠体内的药动学单剂量（10 mg/kg）iv和ig丹皮酚后大鼠的平均血药浓度-时间曲线见图2，药动学参数见表1。
       图2  单剂量丹皮酚（10mg/kg）灌胃和静脉注射后大鼠血药浓度-时间曲线（略）
       表1  丹皮酚不同途径给药在大鼠体内的药动学参数（略）
       4   讨论
       
       本实验对文献报道的血浆丹皮酚HPLC检测方法［7］进行了一定的改进，该方法具有灵敏、简便、准确、特异性强、重复性好等特点。
       
       丹皮酚ig后5 min血药浓度即达峰值，与文献报道的丹皮酚在小鼠体内的药动学结果类似［8］。t1/2z和MRT0-∞分别为（23.37±8.73） min和（28.07±8.68） min，大约45 min后血药浓度降至Tmax的1/10以下，120 min时血药浓度已接近最低定量限，表明其在体内清除快。ig后丹皮酚生物利用度较低，为28.92%；其原因可能为吸收不完全和/或首过效应较强，这方面有待进一步实验研究。本实验充实了丹皮酚的动物药代动力学资料，为其临床合理应用及研究其在中药复方中药代动力学的特性提供了依据。
       【参考文献】
         　　［1］ 章灵华,肖培根,黄 艺,等.丹皮酚的药理与临床研究进展［J］.中国中西医结合杂志，1996，16(3)：187.
       
       ［2］ 江苏新医学院.中药大辞典（上册）［M］.上海:上海科学技术出版社,1986:1128.
       
       ［3］ Harada M, Yamashita A, Aburada M. Pharmacological studies on the root bark of Paeonia moutan. II. Anti-inflammatory effect, preventive effect on stress-induced gastric erosion, inhibitory effect on gastric juice secretion and other effects of paeonol［J］. Yakugaku Zasshi, 1972, 92: 750.
       
       ［4］ 吴晓慧,吴国荣,张卫明,等.丹皮酚及其磺化物体外抗氧化作用［J］.南京师大学报(自然科学版)，2005,28(3):83.
       
       ［5］ 邢国胜,房德敏,周咏梅,等.丹皮酚的制备及药理作用研究进展［J］.中草药,2006,37（11）:附2.
       
       ［6］ 孙言才,沈玉先,孙国平.丹皮酚的主要药理活性研究进展［J］．中药材,2004,26（7）:579.
       
       ［7］ Wu XN, Chen HL, Chen XG, et al. Determination of paeonol in rat plasma by high-performance liquid chromatography and its application to pharmacokinetic studies following oral administration of Moutan cortex decoction［J］. Biomed Chromatogr, 2003,17:504.
       
       ［8］ 孙言才,孙国平,沈玉先,等.丹皮酚在小鼠体内的药动学研究［J］.中国医院药学杂志,2006,26（5）：543.