文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的优选戒毒胶囊中挥发油、醇及水提取工艺。方法采用正交设计法，以挥发油得率为指标，筛选制剂中挥发油的提取工艺；以黄芩苷的含量为考察指标筛选醇提取工艺；以芍药苷的含量为考察指标优选金银花、白芍、黄芪等药味的水提工艺。结果挥发油的最佳提取工艺为当归、川芎加水10倍量，浸泡1 h，提取8 h；醇提最佳工艺为丹参、黄芩、栀子采用70%乙醇，溶媒6倍量，回流时间为1.5h，提取次数为2次；水提取的最佳工艺为将白芍、黄芪、龟甲和熟地、黄连同上述药渣，加10倍量水，煎煮2次，1.5 h/次，金银花于第2次煎煮时加入。结论通过正交实验优选出戒毒胶囊最佳制备工艺稳定可行。
       【关键词】  正交设计； 戒毒胶囊； 提取工艺
       Studies on the Extract Technology of Jiedu Capsules by Orthogonal Design
       JIN Yiran， DU Yingfeng，YUAN Zhifang， ZHANG Lantong*
       （The Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang, 050000, China；School of Pharmacology, Hebei Medical University, Shijiazhuang, 050017, China）
       Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of Jiedu Capsules.MethodsThe series of tests were carried out with orthogonal design. The conditions were evaluated with the yield of volatile oil as the index. With the yield rate of baicalin as the index, and the concentration of alcohol, solvent volume, extracting time and times as factors, the optimal extracting process for the extracting with alcohol was studied. With the yield rate of paeoniflorin as the index, and the volume of water, extracting time and times were optimized for the water extraction. ResultsThe optimal extracting process of volatile oil was as follows: 10 volumes of water were added and immersed for 1h, and then extracted for 8h. The results of alcohol extraction was defined as 85% of alcohol, 1.5 hours of refluxing time with 10 times volume of solvent and twice extraction. The best extracting process by water was defined as 1.5 hours of each extraction with 10 times volume of water and twice extraction. Flos Lonicerae was extracted at the second extraction.ConclusionThe optimum preparation technology of Jiedu Capsule is suitable and reproducible.
       Key words：Chinese traditional medicine;  Orthogonal design;   Extracting process
       
       戒毒胶囊的处方为治疗吸食阿片类成瘾者的临床经验方，由金银花、黄芩、栀子、丹参、黄芪等13味药制成。本实验根据戒毒胶囊处方组成和各药味之间的关系，在参考各药物所含成分的理化性质和药理作用的研究基础上［1，2］，根据与治疗作用相关的有效成分或有效部位的理化性质，结合制剂制备上的要求等实际情况，采用正交设计法对工艺路线的设计，筛选了工艺方法和条件，制定出方法简便、条件确定的稳定工艺。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器挥发油提取器（上海求精玻璃仪器厂）；美国Waters高效液相色谱仪，510泵，2487紫外检测器；色谱工作站（Empower色谱工作站）；TCQ-250超声波清洗器（北京医疗设备二厂）。
       1.2  试药黄芩苷、绿原酸、芍药苷对照品均购自中国药品生物制品检定所；药材均购自石家庄市药材站，经河北医科大学生药学教研室鉴定。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  挥发油的提取工艺［3］
       2.1.1    当归和川芎吸水率的考察按处方量称取当归90 g、川芎45 g，用冷水浸泡，每4 h换水1次，泡至透心，计算药材的吸水率为128.5％。
       2.1.2   正交实验设计根据药物的性质并结合生产实际，挥发油提取工艺选取了对提取率影响较大的加水量（A）、浸泡时间（B）和提取时间（C）作为考察因素，以挥发油得率为考察指标，选定L9(34)正交表进行实验。正交因素水平见表1。
       表1  挥发油得取工艺正交因素水平（略）
       2.1.3   实验方法按处方比例分别称取当归90 g，川芎45 g，适当粉碎，置圆底烧瓶中，按《中国药典》Ⅰ部挥发油测定法进行提取，到规定时间后，停止加热，放置1 h，至油呈清亮，收集挥发油蒸馏液，用等体积石油醚萃取3次，合并石油醚提取液，减压回收石油醚，用无水Na2SO4脱水后，称挥发油的重量，按下式计算挥发油得率。正交实验结果见表2。
       
       挥发油得率（%）=挥发油重量（g）原生药重量（g）×100%
       
       从挥发油的提取工艺方差分析表中可见，只有提取时间（C）对挥发油提取率影响最大，故提取挥发油时采用8 h。加水量（A）以加入10倍量挥发油收率较高。浸泡时间（B）对挥发油提取率影响不大，故选择1 h。
       2.1.4    结果分析表2中挥发油得率经方差分析，对各因素影响的显著性进行了检验。结果见表3。
       表2  戒毒胶囊挥发油提取正交实验结果（略）
       表3  挥发油提取方差结果分析（略）
       方差分析结果表明，以挥发油得率为考察指标，在提取挥发油的工艺中，提取时间（C）对挥发油量有极为显著的影响（P<0.01），故提取挥发油以8 h最佳，加水量（A）和浸泡时间（B）在选择的水平上无显著影响（P>0.05）。最后确定的提取工艺为A3B1C3，即将药材加10倍量水浸泡1 h，提取8 h较为合适。
       2.1.5    验证实验取当归、川芎，适当碎断，分别称取当归90 g，川芎45 g，按已确定加水量和浸泡时间以表4的加热时间分别提取挥发油，平行实验3次。
       表4  挥发油提取验证性实验（略）
       可见，按最佳工艺进行验证实验，挥发油得率较高，所选的工艺技术条件A3B1C3是可行的。
       2.2  醇提取工艺
       2.2.1    正交实验设计醇提取工艺选取了对提取物收率影响较大的醇浓度（A）、醇用量（B）、提取时间（C）和提取次数（D）为考察因素，以黄芩苷含量为考察指标，选定L9(34)正交表进行实验。正交因素水平表见表5。
       表5  醇提工艺的正交因素水平（略）
       2.2.2   实验方法取丹参30 g，栀子20 g，黄芩18 g，按正交设计表加水煎煮。
       2.2.3  黄芩苷的含量测定供试品溶液的制备：取提取液5 ml置100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液2 ml置100 ml的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
       
       对照品溶液的制备：取60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每毫升中约含30 μg的溶液，即得。
       
       测定方法：经过实验，采用HPLC法，选用十八烷基键合硅胶为固定相；甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）为流动相；检测波长280nm。吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μl，测定峰面积，计算，即得。正交实验结果见表6。
       表6  醇提工艺正交实验结果（略）
       从正交实验结果可见，以黄芩苷含量为考察指标，对黄芩苷提取率影响大小为醇浓度A和提取次数D对黄芩苷含量的影响较大。
       2.2.4    结果分析表6中黄芩苷含量经方差分析，对各因素影响的显著性进行了检验。结果见表7。
       表7  醇提工艺的方差结果分析（略）
       可见，在3个因素中，醇浓度A影响极为显著，故选择醇浓度为70%。提取次数以提取两次对黄芩苷的提取率较高，提取时间以1.5h时对黄芩苷的提取率最高。提取倍数B对黄芩苷含量的影响不大，故加醇倍数为6倍量即可。按已经确定的最佳工艺进行验证实验。结果见表8。
       表8  醇提工艺的验证性实验（略）
       2.3  水提取工艺因金银花中所含有效成分绿原酸受热不稳定，故金银花在所有确定进行水提的药味中，应该后下。考察提取工艺时应以绿原酸含量单独考察金银花的正交，另取当归、川芎提取挥发油后的药渣及丹参、栀子和黄芩醇提后的药渣，与黄芪、白芍、龟版、熟地进行水提，以芍药苷含量作为考察指标进行正交实验，确定以上几味药的水提工艺。
       2.3.1  金银花提取工艺
       
       正交实验设计：金银花水提取工艺选取了对提取物收率影响较大的加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以绿原酸含量为考察指标，选定L9(34)正交表进行实验。正交因素水平表见表9。
       表9  金银花水提工艺正交因素水平（略）
       实验方法：称取金银花12.5 g，按正交设计表加水煎煮。
       
       绿原酸的测定：①供试品溶液制备：取提取液1 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。②对照品溶液制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶解并稀释制成每1毫升中约含0.02 mg的溶液。精密量取1 ml，置5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。③测定方法：采用十八烷基键合硅胶为固定相；甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（18∶82∶1∶0.1）为流动相；柱温35℃；检测波长327 nm。吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μl，分别用HPLC色谱仪于波长327 nm处测定峰面积，按外标法计算绿原酸含量。实验结果见表10。
       表10  金银花水提工艺的正交实验结果（略）
       从正交实验结果可见，以绿原酸为考察指标，对绿原酸含量的影响大小依次为：加水量>提取时间>提取次数，最佳工艺为A3B3C1，即加入10倍量水，煎煮2 h，提取1次。 
       
       结果分析：表10中绿原酸含量经方差分析，对各因素影响的显著性进行了检验。结果见表11。
       表11  金银花水提工艺的方差结果分析（略）
       对正交实验结果进行方差分析，对各因素的影响大小的显著性进行了检验，在3个因素中，加水量（A）对绿原酸的提取率影响最大，以加入10倍量时得到的绿原酸含量较高。提取时间（B）对绿原酸含量影响不大，为节能及提高工效，故选择1.5 h。提取次数（C）对绿原酸含量影响也不大，选择提取1次。
       
       验证性实验：经过优选后确定的提取工艺为A3B2C1，即加入10倍量水，煎煮1.5 h，提取1次。对优选工艺和最佳工艺进行验证性实验结果发现，选取工艺A3B2C1和最佳工艺A3B3C1无显著性差别。验证实验结果见表12。
       表12  金银花水提工艺的验证性试验（略）
       2.3.2  黄芪、白芍、龟版、熟地提取［4］
       
       正交实验设计：称取白芍7.5 g，黄芪9.0 g，龟版5 g，熟地5 g及当归27 g，川芎15 g提取挥发油后的药渣与醇提工艺后的药渣，加水煎煮提取。选取了对提取物收率影响较大的（A）加水量、（B）提取时间、（C）提取次数作为考察因素，以芍药苷的含量为考察指标，按如下进行正交实验。见表13。
       表13  水提工艺正交因素水平（略）
       实验方法：取白芍7.5 g，黄芪9.0 g，龟版5 g，熟地5 g，当归27 g，川芎15 g提取挥发油后的药渣与醇提工艺后的药渣，分别加水煎煮提取。
       
       芍药苷的测定：①供试品溶液的制备：精密量取上述各药材提取液1 ml至50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。②对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每毫升中约含0.1 mg的溶液，即得。③测定方法：选用十八烷基键合硅胶为固定相；乙腈-水（17∶83）为流动相；柱温30℃；检测波长230 nm。吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μl，分别用HPLC色谱仪于波长230 nm处测定峰面积，按外标法计算芍药苷含量。实验结果见表14。方差分析见表15。
       表14  水提工艺的正交实验结果（略）
       表15  水提工艺的方差结果分析（略）
       从正交实验结果可见，以芍药苷为考察指标，对芍药苷含量的影响大小依次为：提取次数＞加水量＞提取时间。对实验结果进行了方差分析，对各因素的影响大小的显著性进行了检验，在3个因素中，加水量（A）对芍药苷含量影响较显著，以加水10倍量使芍药苷的提取率最高，提取时间（B）影响不显著，但以提取1.5 h得到的芍药苷含量较高。提取次数（C）对芍药苷含量影响最大，提取2次芍药苷的提取率最高。则最佳工艺为加水10倍量，煎煮2次，1.5 h/次。
       3  讨论
       
       按照国家食品药品监督局发布的关于中药、天然药物提取纯化工艺研究技术指导的原则，鉴于中药、天然药物所含成分的复杂性，中药、天然药物的提取、分离与纯化、浓缩与干燥等工艺的研究，是在分析处方组成和复方中各药味之间的关系，参考各药味所含成分的理化性质和药理作用的研究基础上［1，2］，根据与治疗作用相关的有效成分或有效部位的理化性质，结合制剂制备上的要求、大生产的实际情况、环境保护的要求，进行工艺路线的设计，工艺方法等条件的筛选，制定出方法简便，条件确定的稳定工艺。因此经过筛选确定的处方是可行的。
       
       当归和川芎为处方中的富含挥发油的药味，现代药理研究表明，其挥发油为发挥药效的主要成分，故在进行制剂工艺研究时，对以上两味药材提取挥发油。
       
       利用正交设计将戒毒胶囊各因素、各水平之间的组合均匀搭配，合理安排，可以用较少的、有代表性的处理组合数据，高效、快速、经济的多因素实验设计方法筛选戒毒胶囊的最佳制备工艺，找出影响制备中的主要因素、次要因素及较优组合，确定出最佳的制备工艺。
       【参考文献】
         　　［1］ 郑虎占,董泽宏，余 靖,等. 中药现代研究与应用［M］. 北京:学苑出版社, 1997.
       
       ［2］ 谢秀琼. 中药新制剂开发与应用［M］. 北京:人民卫生出版社, 2000.
       
       ［3］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］. 北京:化学工业出版社, 2000.
       
       ［4］ 章崇仪，曹解宇. 白芍中芍药甙提取的溶剂比较［J］. 中成药, 1994,16(11)：6.