人工栽培盐生肉苁蓉环烯醚萜苷类成分的研究
作者：杨建华 胡君萍 热娜·卡斯木 堵年生
作者单位：新疆医科大学附属肿瘤医院，新疆 乌鲁木齐 830011；新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830054
《时珍国医国药》 2009年 第3期
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【摘要】
目的研究人工栽培盐生肉苁蓉中的环烯醚萜苷类化学成分。方法采用大孔树脂、活性碳、Sephadex LH-20等柱色谱技术分离纯化，根据理化性质和波谱学数据鉴定化合物结构。结果分离得到2个环烯醚萜苷类化合物，分别鉴定为8-表马钱子苷酸（8-Epiloganic acid，Ⅰ）、益母草苷（Leonuride，Ⅱ）。结论首次对人工栽培盐生肉苁蓉的化学成分进行了研究，分离得到2个环烯醚萜苷类化合物，均为首次从该种植物中分离得到，其中8-表马钱子苷酸含量较高，可以作为肉苁蓉生药及其制剂质量控制的参考指标。
【关键词】 盐生肉苁蓉 环烯醚萜苷 化学成分 人工栽培
中药肉苁蓉Herba Cistanches为列当科Orobanchaceae肉苁蓉属植物Cistanche Hoffmg. Et Link干燥带鳞叶的肉质茎，具补肾阳、益精血、润肠通便等功效。肉苁蓉在历代补肾阳方剂中出现的频度最高，在抗老防衰类中药处方中的几率仅次于人参位居第二，有“沙漠人参”之美誉。肉苁蓉属植物含有苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、糖醇类等化学成分，其中苯乙醇苷被认为是肉苁蓉中的主要功效物质［1］。近年来随着肉苁蓉市场需求量的不断增大，使得原植物遭到掠夺式采挖，肉苁蓉野生资源濒于枯竭。为解决药源紧缺的状况，大面积的引种栽培工作在我国的西北地区得以迅速发展。经学者考证，历代本草记载的肉苁蓉原植物为荒漠肉苁蓉Cistanche deserticola和盐生肉苁蓉Cistanche salsa G.Beck两种。目前对该属植物的研究主要集中于被2005版《中国药典》收载的荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉Cistanche tubulosa Wight，对盐生肉苁蓉的化学成分研究报道较少，对其栽培品的研究尚为空白。为了合理有效地利用盐生肉苁蓉栽培品资源，为其深层次开发提供科学依据，笔者对在新疆原生态环境下人工种植的盐生肉苁蓉药材进行了化学成分的研究（其中苯乙醇苷类化合物已另文报道［2］），分离得到了2个环烯醚萜苷类化合物，均为首次从该种植物中获得。
1 仪器与材料
核磁共振波谱仪（Jeol Al 300 and Bruker Drx 400）；X4型显微熔点测定仪（北京第三光学仪器厂，温度计未校正）；RE-52型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；AB104-N型电子天平［Mettler-Toledo Instr.（Shang Hai）Ltd.］；冷冻干燥机（美国Edwards Pirani 1001）。
SP825大孔吸附树脂(Mitsubish corporation)；Sephadex LH-20（Amersham Pharmacin Biotech AB SE-751 84 uppsala sweden）；反相硅胶板20 cm×20 cm（德国默克公司）；颗粒活性碳（上海三浦化工有限公司）；所用试剂均为分析纯。
原料采集于新疆吉木萨尔地区盐生肉苁蓉人工种植基地，经新疆中药民族药研究所李佳政研究员鉴定为Cistanche salsa肉质茎。
2 方法与结果
2.1 提取与分离干燥的盐生肉苁蓉生药10.0 kg，粉碎后以70%乙醇回流提取3次，合并滤液，减压浓缩后得乙醇浸膏，以适量的水混悬，依次用醋酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶媒，得醋酸乙酯、正丁醇和水层三部分萃取物。
正丁醇萃取物（424 g）经SP825大孔吸附树脂柱层析，依次以H2O及30%，50%，70%，95% EtOH梯度洗脱，考察薄层行为合并流份，减压浓缩后，冷冻干燥。将30% EtOH洗脱流份经Sephadex LH-20柱层析，以水-甲醇体系梯度洗脱，得58个流份（Fr.1～58），其中Fr.2～4合并，在H2O中放置，有白色晶体析出，以H2O重结晶得化合物Ⅰ（约2.1 g）。
水层萃取物放置过夜，析出晶体，过滤，剩余部分经SP825大孔树脂、活性碳、Sephadex LH-20反复柱层析，以水-甲醇体系梯度洗脱，得化合物Ⅱ（77.8 mg）。
2.2 结构鉴定
2.2.1 化合物Ⅰ白色针晶，mp：147～149 ℃。1HNMR δ：1.18 (3H，d，J= 7.2 Hz)提示CH3的存在，5.44 (1H，d，J = 8.0 Hz)为Glc端基H信号，5.95 (1H，d，J= 3.2 Hz)表明可能为双键H或该H邻位有强吸电基存在，7.96 (1H, s)提示为双键H，且该H处于一较强的去屏蔽区化学环境。13CNMR给出β-D-Glc的6个C信号，δ 114.6、150.9信号表明双键C的存在，δ 169.5为羰基C信号。综合以上分析并结合文献［3］，确定化合物为8-表马钱子苷酸。其H谱、C谱数据归属如下：1HNMR (C5D5N) δ：1.18 (3H, d, J= 7.2 Hz, H-10), 2.2～2.4 (2H, m, H-6), 2.65 (1H, m, H-8), 3.10 (1H, m, H-9), 3.58 (1H, m, H-5), 4.0～4.7 (7H, Gluconsylic 2"～6"H, H-7), 5.44 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-1"), 5.95 (1H, d, J= 3.2 Hz, H-1), 7.96 (1H, s, H-3)。13CNMR (C5D5N) δ：14.4 (C-10), 30.5 (C-5), 41.4 (C-8), 42.3 (C-6), 44.8 (C-9), 62.7 (C-6"), 71.5 (C-4"), 74.8 (C-2"), 78.2, 78.6, 79.0 (C-3", 5", 7"), 95.8 (C-1), 100.5 (C-1"), 114.6 (C-4), 150.9 (C-3), 169.5 (C-11)。
2.2.2 化合物Ⅱ白色无定形粉末，1HNMR δ 1.30（3H，s）提示CH3的存在，4.63（1H，d，J= 8.1 Hz）为Glc端基H信号，5.45（1H，d，J= 1.8 Hz）表明可能为双键H或该H邻位有强吸电基存在，6.16（1H，dd，J= 2.1，6.6 Hz）提示双键H的存在； 13CNMR给出β-D-Glc的6个C信号，δ 105.9、140.4为双键C信号。综合以上分析该化合物可能为一环烯醚萜苷，结合文献［4］，最终确定化合物为益母草苷。其H谱、C谱数据归属如下：1HNMR (CD3OD-d4) δ：1.30 (3H, s, H-10), 1.7～2.1 (2H, m, H-7), 2.5～2.8 (2H, m, H-5, 9), 3.1～4.2 (6H, Gluconsylic 2"～6"H), 4.63 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-1"), 4.8～5.0 (H-4, convered by solvent signals), 5.45 (1H, d, J= 1.8 Hz, H-1), 6.16 (1H, dd, J= 2.1, 6.6 Hz, H-3)。13CNMR (CD3OD) δ：25.5 (C-10), 41.2 (C-5), 50.0 (C-7), 51.8 (C-9), 62.8 (C-6"), 71.7 (C-4"), 74.8 (C-2"), 77.7, 78.0, 78.2 (C-6, 3", 5"), 79.4 (C-8), 93.7 (C-1), 99.4 (C-1"), 105.9 (C-4), 140.4 (C-3)。
3 讨论
环烯醚萜苷是肉苁蓉属植物主要化学成分类别之一，此类化合物广泛存在于植物界中，因在植物分类学上的重要作用及多种生物活性，近年来研究发展迅速。前人已从荒漠肉苁蓉和管花肉苁蓉中分离得到8-表马钱子苷酸和益母草苷，但尚未见有其存在于盐生肉苁蓉中的文献报道。目前对肉苁蓉或肉苁蓉制剂多以苯乙醇苷类化合物作为质量控制的指标成分，由于本研究从盐生肉苁蓉中制备8-表马钱子苷酸的量较大，为此我们以它作为指标成分，建立了市场上主要流通的3种肉苁蓉药材中8-表马钱子苷酸的含量测定方法［5］，为肉苁蓉药材质量控制的研究提供了重要的补充资料。
【参考文献】
［1］ 成喜雨, 郭 斌, 倪 文, 等. 肉苁蓉研究进展 ［J］. 天然产物研究与开发, 2005, 17(2): 235.
［2］ YANG Jang-hua, DU Nian-sheng, RENA·Kasimu. Phenylethanoid glycosides from cultivated Cistanche salsa［J］. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2005, 14 (4): 242.
［3］ 张 松, 格桑索朗, 达娃卓玛, 等. 绵参化学成分的研究 ［J］. 中国中药杂志, 2007, 32 (9): 824.
［4］ Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T, et al. Studies on the constituents of Cistanchis herba (Ⅵ) ［J］. Chem Pharm Bull, 1985, 33(9): 3645.
［5］ 杨建华, 堵年生, 热娜·卡斯木. 高效液相法测定肉苁蓉中8-表马钱子苷酸的含量 ［J］. 药物分析杂志, 2006, 26(10):1395.