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       【摘要】 
       目的观察中药天年饮对衰老大鼠肝功能的保护作用。方法40只SD大鼠随机分为4组：正常组、衰老模型组、天年饮用药组和阴性对照组，每组10只；D-半乳糖连续腹腔注射（200 mg·kg-1·d-1，连续40 d）制作亚急性衰老的大鼠模型，并给予天年饮灌胃（30 d）。分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测大鼠血清SOD活性和MDA含量， IFCC连续监测法检测大鼠血清ALT，AST，ALP和γ-GT等各项肝功能指标。结果天年饮可明显提高衰老大鼠血清的SOD活性、降低MDA含量，天年饮用药组与衰老模型组比较差异显著（P＜0.05或P＜0.01）；天年饮可明显降低衰老大鼠血清ALT、AST、ALP和γ-GT含量，天年饮用药组与衰老模型组比较差异显著（P＜0.05或P＜0.01）。结论天年饮可提高衰老机体的抗氧化能力，改善肝细胞脂质代谢、保护肝细胞的功能，具有一定延缓衰老的作用。
       【关键词】  天年饮 衰老 肝功能 大鼠
       衰老是一种在遗传和环境等多种因素作用下的正常生理过程。许多实验证实，机体的衰老与自由基生成过多有关，过多的自由基可导致生物膜功能障碍，引起肝、脑、肾等重要器官的功能障碍［1］。天年饮由何首乌、肉苁蓉、丹参等中药制成，具有补肝肾、益精血、延年益寿等功效。我们的研究已经发现天年饮可改善衰老大鼠的学习记忆功能，延缓性腺衰老［2～3］，本研究继续观察了天年饮对衰老大鼠肝功能的保护作用。
       1   材料和方法
       1.1    药品与试剂  D-半乳糖由北京化学试剂公司生产（批号：020402），用生理盐水配制成25%的溶液，按200 mg·kg-1·d-1给药。天年饮由何首乌、肉苁蓉、丹参、淫羊藿、怀牛膝、茯苓６味中药组成，经熬制后每毫升含生药1.5 g灌胃。检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的试剂盒购自北京首都医科大学临床医疗科技中心。
       1.2    动物的选择及分组  成年雌性SD大鼠40只，体重180～250 g，由河北医科大学实验动物学部提供。将40只大鼠随机分为4组：正常组、模型组、天年饮用药组和阴性对照组，每组均为10只。其中模型组、用药组、阴性对照组大鼠均采用D-半乳糖连续腹腔注射（1次/d，共40 d）制作亚急性衰老的大鼠模型，模型组大鼠造模成功后不再做任何处理；天年饮用药组大鼠于造模成功后每天用天年饮灌胃，共30 d；阴性对照组于造模成功后每天用同等剂量的生理盐水灌胃，时间同用药组大鼠。
       1.3    指标检测  大鼠经内眦取血，2 000 r/min离心10 min， 取上清液，-20℃冰箱保存待测。
       1.3.1    SOD活性及MDA含量分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测大鼠血清SOD活性和MDA含量。
       1.3.2    肝功能应用HITACHI 717全自动生化分析仪、IFCC连续监测法检测大鼠血清中的ALP和 AST。
       1.4    统计学处理  采用SPSS11.0统计软件以方差分析进行统计分析，P＜0.05为差异显著性的标准。
       2   结果
       2.1    大鼠血清SOD活性和MDA含量  见表1。
       
       与正常组大鼠比较，模型组大鼠血清SOD活性明显降低（P＜0.05）、MDA含量明显升高（P＜0.01）；与模型组大鼠比较天年饮用药组大鼠血清SOD活性明显升高（P＜0.05）、MDA含量明显降低（P＜0.01），差异显著。
       表1  大鼠血清SOD活性和MDA含量（略）
       与正常组比较，#P＜0.05，*P＜0.01；与模型组比较，##P＜0.05，**P＜0.01；n=10
       2.2    各组大鼠的肝功能  见表2。
       
       衰老模型组大鼠各项肝功能指标均明显高于正常组大鼠（P＜0.01）；天年饮可明显降低模型组大鼠各项肝功能指标，与模型组比较差异显著（P＜0.05或P＜0.01）。
       表2  各组大鼠的肝功能（略）
       与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.05，# P＜0.01；n=10
       3   讨论
       
       《灵枢·天年》中详细描述了人衰老过程中五脏功能衰退的时间顺序：“五十岁，肝气始衰，肝叶始薄，胆汁始灭，目始不明。六十岁，气始衰，苦忧悲，血气懈惰，故好卧。七十岁，脾气虚皮肤枯……”其中肝在五脏中最先出现衰老征象。天年饮方由刘河间《宣明论方》何首乌丸加味而成，何首乌丸本由何首乌、肉苁蓉、怀牛膝组成，能填精补髓、乌发延年；于此基础上加淫羊藿补肾壮阳以强筋骨，丹参活血化淤以通心脉，茯苓健脾利湿以宁心神。诸药相配通调心脾肝肾四脏，而以肾为主，气机条达，血脉流通，衰从何由。
       
       衰老是生命过程中正常的生理现象，自1956年英国学者Haman提出自由基学说以来，大量实验表明自由基及其引起的脂质过氧化反应是引起生物衰老的主要原因。在正常情况下机体内存在包括SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等在内的抗氧化物质，使体内活性氧（ROS）的产生与消除处于平衡状态。有研究表明，SOD活性下降与衰老密切相关，它的活性降低被认为是衰老的一项重要指标［4］；MDA是自由基损伤不饱和脂肪酸生成的脂类过氧化分解产物，其含量升高可间接证明自由基水平增高和反应机体活性氧损伤效应［5］。随着年龄的增长，机体抗氧化防御体系活性降低，清除自由基能力下降，ROS产生过多，过量的ROS可以攻击位于线粒体内膜上的脂类、蛋白质和mtDNA，影响线粒体的功能，导致细胞受损、衰老和疾病的发生［6］。本研究发现，中药天年饮可明显提高衰老大鼠血清SOD活性、降低MDA含量，表明天年饮可提高衰老机体的抗氧化能力，有效清除衰老机体内过多的氧自由基，减轻自由基造成的过氧化损伤。
       
       由于细胞膜富含不饱和脂肪酸，使得细胞膜成为自由基攻击的主要靶位［7］。衰老时过多的氧自由基攻击细胞膜，诱发膜上不饱和脂肪酸过氧化反应，引起膜脂质间或膜脂质与膜蛋白间的交联，导致膜的结构和功能发生改变，从而改变肝细胞膜的通透性，影响细胞内环境的稳定，导致肝细胞凋亡增加，使肝细胞内的转氨酶漏入血液中，引起外周血液循环中的酶学变化［8］。另外，衰老机体内过多的氧自由基不但可导致线粒体和微粒体的过氧化损伤，还可诱导核酸的过氧化损伤，导致肝细胞核的破坏而使肝细胞发生坏死［9］。ALT与AST迄今仍被认为是肝细胞损害的“金标准”［10］。其中ALT存在于肝、肾、胰、脾、肺、红细胞和血清中，以肝脏含量最高，主要存在肝细胞浆中，在肝细胞膜的通透性增加时即使无坏死，肝细胞内转氨酶也可由此明显的浓度梯度差而漏入血中［11］。AST也是反应肝细胞线粒体功能、肝细胞坏死的重要指标［12］。ALP和γ-GT均由肝细胞合成和分泌，自胆管排泄，是肝胆疾病的敏感指标，在慢性肝脏疾病时往往升高［13］。本研究发现，中药天年饮可显著降低衰老大鼠血清ALT，AST，γ-GT和ALP的含量，表明中药天年饮具有明显改善肝细胞脂质代谢、保护肝细胞的功能，其作用机制有待于进一步的深入研究。
       【参考文献】
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