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       【摘要】 
       目的探讨人工养殖大鲵肉延缓果蝇衰老的作用。方法以大鲵肉浆，分别按占培养基的4%，2%，1%（g/g）含量，加入到基础培养基中，并以基础培养基为对照组，观察对果蝇寿命、生殖能力、飞翔能力、耐寒能力的影响，测量果蝇体内超氧化物歧化酶（SOD）、脂褐素（LF）活性的变化。结果大鲵肉能显著提高果蝇的寿命、生殖能力、飞翔能力、耐寒能力，体内SOD活性明显升高，而LF的活性下降。结论大鲵肉能够延缓果蝇的衰老。
       【关键词】  大鲵 果蝇 超氧化物歧化酶 脂褐素
       Studies on Anti-aging Effect of Artificial Breeding Andrias davidianus Meat in Drosophila
        YANG Zhiwei1，2，        GUO Wentao1，HUANG Shiying1，2，AO Mingzhang1，WANG Jianwen1，3，YU Longjiang1*
        (1.Institute of Resource Biology and Biotechnology College of Life Science and Technology，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan ，Hubei 430074，China； 2.Hubei Vocational and Tedchincal College, Xiaogan 432000, China; 3.Andrias Davidianus Breeding Base in Hunan Sangzhi,  Zhangjiajie，Hunan 427400，China)
        Abstract：ObjectiveTo study the antiaging action and its mechanism of the Andrias davidianus meat.  MethodsAndrias davidianus meat was separated into three groups(high, middle and low group)according to its dosage(4%,2% and 1%,respectively),and was put into different cultures. The pure culture was made as control group. The life-span, reproduction，flying and cold-resistance abilities of drosophila were observed. The contents of SOD and LF  in drosophila liver were measured. ResultsAndrias davidianus meat could prolong the life-span, reproduction, flying and cold-resistance abilities of drosophila. The content of SOD  in drosophila liver was obviously increased, but the LF activity was reduced after treatment.ConclusionAndrias davidianus meat has the ability to delay the senile process of drosophila.
        Key words：Andrias davidianus；  Drosophila；  SOD；  LF
        大鲵是中国特有的珍稀两栖动物，人们利用大鲵已经有几千年的历史，大鲵肉细嫩，味道鲜美。含有优质蛋白质和丰富的氨基酸、微量元素［1～3］。中医认为，经常食用鲵肉可以聪明延智、延缓衰老、提高造血和免疫功能，对防止心血管疾病、贫血和肿瘤有一定的作用［4］。但是到目前为止大鲵的研究仅仅只局限在养殖、形态方面［5］，对药用研究几乎是空白。为了探讨大鲵在延缓衰老方面的作用，本实验将人工养殖大鲵的肉浆加入到基础培养基中，观察其对果蝇寿命的影响。
       1  材料
        大鲵肉来自张家界桑植大鲵繁殖基地，经搅肉机捣碎的大鲵肉浆。受试动物Oregon K野生型黑腹果蝇，来自华中科技大学实验中心。所有果蝇均饲养于盛有1 cm厚培养基的2 cm×9 cm的培养管中，以灭菌棉塞封口，每支培养管装25只果蝇，每3 d更换一次新鲜培养基。SHH-3生化培养箱，UNICO-2100紫外可见分光光度计，SOD，LF测定试剂盒。
       2  方法
        2.1  果蝇生存实验［6］大鲵肉按占培养基的1%，2%，4%（g/g）制成大鲵肉和基础培养基，分装于2 cm×9 cm的培养管中，每管约装1 cm。选取6 h内孵出的未交配的雌、雄果蝇各400只，用乙醚麻醉，然后按性别随机分为对照组和大鲵低、中、高剂量组，每组雌雄各100只，每管25只果蝇，置于温度(25±1)℃，湿度55%～65%，12 h光照交替的培养箱中进行培养。每日定时观察各组果蝇死亡数目，直至全部自然死亡。最后统计各组果蝇平均寿命和最高寿命。每组最后死亡的20只果蝇存活天数的平均数为该组最高寿命。
        2.2  生殖力测定 取24 h内际工资羽化的果蝇成虫，区别雌雄，每管放入雄蝇20只，雌蝇30只，每组各设8个重复管。指管规格仍为2 cm ×9 cm，内盛培养基约1 cm高，每3 d更换培养基1次。从第2次更换开始收集和计算子代数，连续8次。
        2.3  飞翔实验 果蝇分组、饲养方法同生存实验“2.1”项，饲养50 d后逐个试验尚存果蝇的飞翔能力。凡能起飞者，计入“能飞翔”项，计算各组飞翔百分率。
        2.4  耐寒能力 果蝇分组、饲养方法同生存实验“2.1”项，饲养30 d后，将果蝇移入空管，放置于-5℃ 恒温箱4.5 h，取出后在室温14℃中放置6 h，计算果蝇存活数。
        2.5  超氧化物歧化酶(SOD)和脂褐素(LF)水平的测定将各组进行生殖力测定的果蝇随机分为两批，分别在给药饲养第20天和第30天用乙醚麻醉，每30只果蝇作为一个标本，称重，加入9倍的生理盐水制备10%组织匀浆，再加入等量氯仿/甲醇=2/1的混合液，充分混匀，3 000 r/min离心10 min，吸上层液体进行SOD测定，下层液体用荧光法进行LF测定。
        2.6  统计方法实验数据做方差分析，用SPSS统计软件处理。
       3  结果
        3.1  果蝇生存实验结果  大鲵肉对黑腹果蝇平均寿命、最高寿命的影响见表1。
        大鲵肉能够明显的延长果蝇的寿命，其平均寿命比对照组延长14%以上，差异具有显著性。其最高寿命比对照组延长10%以上，差异具有显著性。不同剂量的大鲵肉有具有延缓衰老的作用，以中剂量作用最强，大剂量作用最弱。
        3.2  生殖力测定  大鲵肉对果蝇生殖力的影响见表2。大鲵肉能增强果蝇的繁殖能力，与对照组相比，差异均具有显著性，说明大鲵肉具有增强性活力，提高生殖功能的作用，其中中剂量的作用最强。表1  大鲵肉对黑腹果蝇平均寿命、最高寿命的影响 表2  大鲵肉对黑腹果蝇生殖力的影响与空白对照组比较，＊P＜0.05，＊＊P<0.01
        3.3  飞翔试验与耐寒试验  大鲵肉对黑腹果蝇飞翔能力、耐寒能力的影响见表3。大鲵肉能够增强果蝇的飞翔能力和耐寒能力，其中，以中剂量组的作用最为明显。说明大鲵肉能够增强果蝇的生存能力和适应环境的能力，且以中剂量为佳。
        3.4  大鲵肉对果蝇超氧化物歧化酶(SOD)和脂褐素(LF)的影响  各组果蝇超氧化物歧化酶(SOD)和脂褐素(LF)的含量见表4，大鲵肉能显著的提高果蝇SOD的水平，显著降低LF的水平。其中中高剂量最为显著。
        表3  大鲵肉对果蝇飞翔能力、耐寒能力的影响表4  大鲵肉对果蝇超氧化物歧化酶(SOD)和脂褐素(LF)含量的影响与空白对照组比较,＊P＜0.05，＊＊P<0.01
       4  讨论
        衰老是生物体在生命周期中随着年龄增长而发生的全身各组织器官功能衰退和稳态功能下降的过程，是机体各种生化反应的综合表现。人体衰老与机体细胞凋亡、免疫功能状态有着密切关系［7,8］。在衰老与抗衰老研究中，果蝇以其自身的诸多优势如高度纯种，生存期短，繁殖能力强，观察指标明显，因而是研究抗衰老的好材料［9］。
        本研究显示大鲵肉对果蝇的寿命、生殖能力、飞翔能力、耐寒能力均有明显的作用，说明大鲵具有良好的延缓衰老作用。从实验分组效果来看，大、中、小剂量组均有延缓衰老的作用，与对照组相比，差异具有显著性。但是以中剂量组的作用最为明显，说明其延缓衰老的作用并不随着剂量的增加而增强。
        自由基反应也是引起衰老的重要原因之一［10］。随着年龄的增长，体内抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)活性降低，导致自由基反应增强而诱发了过多的有毒性的过氧化物堆积而加速衰老。SOD是体内的有重要的清除自由基的作用。根据衰老的自由基学说，氧化与抗氧化系统失衡的直接后果是脂质过氧化反应的发生，反应产物与生物大分子发生交联反应，交联产物在溶酶体中聚集，最终形成LF。随年龄增长，LF除在细胞内含量增加外，还有密集和增大的趋势。长期以来，LF被认为是可靠而明显的衰老标志。实验证实，大鲵肉能显著提高体内的SOD的含量，SOD含量的增加，导致体内的自由基减少，从而延缓衰老。LF含量的减少，证实了果蝇衰老的延缓。可以推测大鲵肉可能通过促进自由基的清除来达到延缓衰老的作用。
       【参考文献】
         ［1］ 杨代勤.大鲵可食部分水解游离氨基酸的初步研究［J］.水生生物学报，1990，3： 286.
       
       ［2］ 杨红生，杨干荣.大鲵六种组织中游离脂肪酸的分析［J］.河南师范大学学报(自然科学版)，1992，1： 115.
       
       ［3］ 杨代勤.大鲵肌肉及其天然饵料营养成分的比较研究［J］.水产学报，1990，4：32.
       
       ［4］ 张神虎.大鲵药用价值及人工养殖 ［J］.广西农业生物科学，2001,4：84.
       
       ［5］ 陈云祥，吴仲春，白洪清.无公害商品大鲵工厂化流水养殖关键技术［J］.中国水产，2006，11：27.
       
       ［6］ 卫生部法制与监督司．保健食品功能学评价程序及检验方法［M］.1999：20.
       
       ［7］ 许承水．枸杞子提取物对果蝇寿命的影响［J］.泰山医学院学报，2000，21 (3)：184.
       
       ［8］ Hindra JS著，肖德桢．老年生物学与医学［M］.北京：科学出版社，1980：112．
       
       ［9］ 王厚德．老年学实验用果蝇饲养方法的研究［J］.老年学杂志，1987，7 (2)：44.
       
       ［10］ 朱赓伯．促进人体衰老的凶恶敌人—自由基［J］.生命的化学，1983，3(1)：16．