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       【关键词】  黄芩苷；,,黄芩水提物；,,三波长
       摘要：目的建立以水作溶剂的水系三波长紫外分光光度法，用于测定水提物中黄芩苷的含量，使之与水煎煮法提取黄芩苷工艺的溶剂体系相兼容，评价从黄芩中浸提黄芩苷的工艺并实现终产品的质量控制，以满足工厂大批量在线检测的需求。方法以水作溶剂的水系三波长紫外分光光度法，有别于前人以甲醇作溶剂的三波长紫外分光光度法，并进行了精密度实验，以验证方法的准确性。结果水溶黄芩苷标准溶液在0.5～12.0 μg/ml范围内，浓度与吸光度呈良好的线性关系，线性回归方程：△A＝0.032 77C0.009 08，相关系数r=0.997 08，三组样品测得的相对标准偏差RSD＜2.1。结论 以水作溶剂的水系三波长紫外分光光度法测定水提物中黄芩苷的含量是可行的，操作简便、快速、准确, 可以广泛应用于工业生产中,满足工业化需要,具有良好的应用前景。
       关键词：黄芩苷；  黄芩水提物；  三波长紫外分光光度法  
       The Determination of Baicalin in the Water Extraction of Scutellaria baicalensis Georgi
       WANG Xiaoqin， ZHAO Ying， ZHI Dejuan, LI Hongyu
       (College of Life Sciences, Lanzhou University, Lanzhou 730000,China；Gansu Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730000,China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the water dissolved method of threewavelength UV spectrophotometry to determine baicalin content in water extraction of Scutellaria baicalensis Georgi.MethodsUsing the water dissolved method of threewavelength UV spectrophotometry, which differed from previous researches, then inspecting the accuracy by precision test. ResultsThe range of linearity with concentration and absorbance of standard baicalin dissolved in water was between 0.5～12.0 μg/ml, linearity relationship △A＝0.032 77C0.009 08, correlativity was 0.997 08, RSD < 2.1. ConclusionThe water dissolved method of threewavelength UV spectrophotometry to determine baicalin content in water extraction of Scutellaria Baicalensis Georgi is advisable, simple, rapid, accurate and has bright future on analysis application.
       Key words：Baicalin;   Water extraction of Scutellaria baicalensis Georgi;   Threewavelength UV spectrophotometry
   
　　黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。性寒、味苦，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。在临床中属常用中药，用于治疗上呼吸道感染、泌尿系统感染、菌痢、肝炎、高血压等。黄芩主要的有效成分为41种黄酮类化合物，在这些黄酮类成分中，最重要的是黄芩苷（Baicalin）。 目前用于检测黄芩苷的方法有高压液相［1］，高效毛细管电泳［2］，反相高效液相［3］，但上述方法要求有较昂贵的仪器，且样品处理步骤繁琐，不能满足工厂大批量在线检测的需求，因此笔者认为最为简便、快捷的方法为三波长紫外分光光度法。三波长紫外分光光度法，是一种计算机测定方法。它在干扰组分的吸收光谱上具有线性吸收的三个波长处，对被测组分的吸光度进行测量，然后通过计算而求得被测组分的含量。此法能消除某些干扰组分的影响、溶液混浊、吸收池不洁净或不完全配对所引起的误差，还解决了随浓度不同使本底值漂移，吸收峰不对称等给定量分析带来的困难［4］。 三波长紫外分光光度法已被用于粉刺合剂［5］，愈风II号合剂［6］中黄芩苷及黄芩中总黄酮［7］含量的测定，并且以往该法对黄芩苷标准品及样品的测定均以甲醇作溶剂。水煎煮法是中药传统浸提方法之一，若测定以水煎煮法浸提的黄芩水提物中黄芩苷的含量，应选择水为溶剂溶解稀释标准品。另外，要实现对黄芩水提取工艺的研究及终产品质量的在线控制，使之能够满足工厂大批量在线检测的需求，也需要简便、快捷的三波长紫外分光光度法，然而目前对这种浸提物中黄芩苷的三波长紫外分光光度法还很少探索。鉴于以上原因，本文拟探索用三波长紫外分光光度法对水煎煮法浸提的黄芩浸提物进行检测，以解决上述问题。
       　1  仪器与材料
       仪器：TU1901紫外可见分光光度计（北京普析通用）；材料：黄芩苷提取液（甘肃农业科学院农产品储藏加工研究中心提供）；黄芩苷对照品（南京青泽医药科技有限公司提供）；甲醇。
       　　2  方法
       2.1  水溶黄芩苷对照溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的黄芩苷标准品6.0 mg，置50 ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为12.0 μg/ml的标准溶液。分别稀释至0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μg/ml。
       2.2  甲醇溶黄芩苷对照溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的黄芩苷对照品6.0 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为12.0 μg/ml的对照溶液。
       2.3  测定波长的确定对水溶和甲醇溶解稀释至12.0 μg/ml的标准溶液进行光谱扫描（200～400 nm），分别以水和甲醇为对照，用作图法求得一个主检测波长和两个参比波长。
       2.4  测定方法应用TU1901定量测定程序，在测定波长处分别测定样品的吸光度。从标准曲线上求出相应的浓度，再换算出样品中黄芩苷的含量。
       2.5  精密度实验取8.0 μg/ml的水溶黄芩苷标准溶液5份，以水为对照，在3个测定波长处测定溶液的吸光度。
       2.6  数据处理参见陶增宁等（1985）［8］相对标准偏差RSD= n     i=1(χi-)2     n-1（其中xi为每个样本数据， 为样本全部数据之平均值，n为样本数目）。
       　3  结果
       3.1  测定波长的确定
       3.1.1  水溶黄芩苷对照品的光谱扫描图谱水溶黄芩苷对照品（12.0 μg/ml），以水做对照，在200～400 nm范围的光谱扫描图谱，见图1；甲醇溶黄芩苷对照品(12.0 μg/ml)，以甲醇作对照，在200～400 nm范围内的光谱扫描图谱，见图2。
       图1  水溶黄芩苷标准品光谱扫描图谱（略）
       图2  甲醇溶黄芩苷标准品光谱扫描图谱（略）
       由图1~2可见，不论以水或甲醇作对照，黄芩苷在250～400 nm范围内均有两个吸收峰，分别是275.5 nm和316.0 nm。以水或甲醇作溶剂，黄芩苷的吸收光谱在250～400 nm范围内完全一致，这表明可用水作溶剂进行黄芩苷的三波长的测定。
       3.1.2  测定波长的确定根据上述光谱扫描结果，采用作图法求得水溶和甲醇溶的黄芩苷标准品的三个测定波长均为275.5，250.0，298.0 nm。
       3.2  水溶黄芩苷标准溶液的工艺曲线的建立将12.0 μg/ml的水溶黄芩苷标准溶液分别稀释至0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μg/ml，以水为对照，在250.0，275.5，298.0 nm处测定吸光度，TU1901程序自动给出△A值，做工作曲线。结果见图3。得出的线性回归方程为：△A＝0.03277C0.00908。由图3可见，水溶黄芩苷标准溶液在0.5～12.0 μg/ml范围内，分别在三个测定波长处测其吸光度，△A与浓度C呈良好的线性关系 (r=0.997 08) ，可按标准曲线对黄芩苷进行定量测定。
       3.3  水系三波长－紫外光谱法对供试样品的检测结果选取3组样品，检测。结果见表1（n=5）。
       表1  样品检测结果（略）
　　
　　图3  水溶黄芩苷标准品的工艺曲线（略）
       3.4  方法的精密度实验取8.0 μg/ml的水溶黄芩苷标准溶液5份，以水为空白，测定结果列于表2中。
       表2  精密度实验结果（略）
       　4  讨论
       本实验结果表明，不论选择水或是甲醇作溶剂，都不影响黄芩苷在250～400 nm的光谱峰形，也不影响黄芩苷的主峰及侧峰的吸光值，只是在远紫外处的峰形上稍有差异，但这并不影响对黄芩苷含量的测定，由此可见以水作溶剂来测定水浸提液中的黄芩苷含量原理上是可行的。以水系三波长紫外分光光度法的工作曲线定量水溶黄芩苷标准品，测定浓度与实际浓度基本吻合，且样品检测数据重复性好，表明三波长紫外分光光度法同样适用于水浸提液中的黄芩苷含量测定，较好地解决了甲醇溶剂体系与以水煎煮法浸提获得的黄芩浸提物的溶剂体系不兼容的问题，更有利于对水浸提液中黄芩苷含量的准确测定。且该方法简单，快捷，不需要价格昂贵的仪器，能够实现工厂的在线检测需求。实验中发现，以甲醇作溶剂时，比色皿易受污染，检测多个用甲醇溶解稀释的黄芩苷标准溶液后，扫描图谱峰形发生较大变化，吸光值变小，使测量数据产生较大偏差，工作曲线的线性范围变小。如果发生上述现象，可将比色皿用10％硝酸或洗液浸泡过夜。在这一点，选用水系三波长紫外分光光度法测定水煎煮黄芩苷提取液样品优于以甲醇做溶剂进行测定。
       　　参考文献：
       ［1］  李光慧，李  虹，侯晓明，等.HPLC测定御感袋泡茶中葛根素和黄芩苷的含量［J］.中国药学杂志，1996，21（11）：680.
       ［2］  高山林，刘  峻，谢小群.高效毛细管电泳法测定黄芩多倍体株系中黄芩苷的含量［J］.药物生物技术，2002，9(6) ：349.
       ［3］  刘美兰，杨立新，万元吉，等.RPHPLC法测定7种药用黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量［J］.药物分析杂志，2002，22(2)：99.
       ［4］  罗庆尧，邓延倬，蔡汝秀，等.分光光度分析［M］.北京：科学出版社，1992：233.
       ［5］  陈珍凤，焦  正，郑基蒙，等.三波长分光光度法测定粉刺合剂中黄芩苷的含量［J］.上海医科大学学报，1998，25（3）：227.
       ［6］  刘明乐，王洪军，黄德红. 三波长分光光度法测定愈风Ⅱ号合剂中黄芩苷的含量［J］.湖北中医学院学报，2003，5（1）：34.
       ［7］  俟冬岩，回瑞华，佟  健.三波长紫外光谱法测定黄芩中总黄酮的含量［J］.特产研究，1995，2：47.
       ［8］  陶增宁.定量分析,第1版［M］.上海：复旦大学出版社，1985：1.
       基金项目：甘肃省科技攻关项目（No.2GS042A4301308）
       (兰州大学生命科学学院，甘肃 兰州  730000；  甘肃省农业科学院，甘肃 兰州  730000)