文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的对常用中药材威灵仙及其地方品种柱果铁线莲体内外的高效液相色谱(HPLC)进行比较。方法采用HPLC法分别测定威灵仙、柱果铁线莲、威灵仙含药血浆、柱果铁线莲含药血浆和空白血浆的指纹图谱，并分别进行威灵仙与柱果铁线莲、威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆指纹图谱共有峰的分析。结果威灵仙与柱果铁线莲药材HPLC指纹图谱有10个共有峰，威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆HPLC指纹图谱有5个共有峰。结论对威灵仙和柱果铁线莲体的体内外共有峰进行深入的比较分析，将有助于阐明具有相同功效的同属植物可能具有相同的药效物质基础。
       【关键词】  威灵仙; 柱果铁线莲; 含药血浆; 高效液相色谱法
       Comparative Study on Clematis Chinesis and Clematis uncinata by HPLC in vitro and in vivo
       WANG Xiangpei，QIAN Haibing，HUANG Jie，JIN Fengyun，SUN Yichun，WU Hongmei
       (Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China)
       Abstract：ObjectiveTo compare Clematis chinesis of common traditional Chinese medicine and Clematis uncinata of local variety by HPLC fingerprint in vitro and in vivo.MethodsThe fingerprints of Clematis chinesis，Clematis uncinata ， medicated plasma of Clematis chinesis, medicated plasma of Clematis uncinata and plasma of blank were determined by HPLC.The common peaks between Clematis chinesis and Clematis uncinata，medicated plasma of Clematis chinesis, medicated plasma of Clematis uncinata were analyzed. ResultsThere were 10 common peaks in Chromatographic fingerprint of Clematis chinesis and Clematis uncinata, there were 5 common peaks in Chromatographic fingerprint of medicated plasma of Clematis chinesis and medicated plasma of Clematis uncinata. ConclusionFurther studies on common peaks of Clematis chinesis and Clematis uncinata is helpful to elucidate the same generic plants which might have the same effective substance.
       Key words： Clematis chinesis; Clematis uncinata; Medicated plasma; HPLC
       威灵仙为毛茛科铁线莲属植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲Clematis hexapetala Pall.及东北铁线莲Clematis manshurica Pupr.的干燥根及根茎[1]。具有祛风除湿、通络止痛的功效，为古今中医临床常用的祛风湿止痛药，市场需求量大。经笔者调查,在贵州地区作为商品威灵仙药材的品种繁多，其中柱果铁线莲Clematis uncinata Champ. 的干燥根及根茎在贵州为商品威灵仙药材的主流品种。同时，柱果铁线莲也作为商品威灵仙药材销往南方各省[2]。柱果铁线莲与威灵仙同属于毛茛科铁线莲属植物，并且功效相同。但相同的功效，是否具有相同的药效物质基础，有待商榷。
       中药化学成分复杂，但只有进入血液的成分才有可能成为有效成分[3]。因此本实验采用HPLC法分别测定威灵仙、柱果铁线莲、威灵仙含药血浆、柱果铁线莲含药血浆和空白血浆的指纹图谱，并分别对威灵仙与柱果铁线莲、威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆指纹图谱共有峰进行分析，为进一步研究具有相同功效的威灵仙和柱果铁线莲是否具有相同的药效物质奠定基础。
       1 仪器与材料
       1.1 仪器Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD); AB104-N型电子天平(德国Mettler-Toledo Group公司);80-2B离心机(湖南星科科学仪器有限公司);WH-2微型漩涡混合仪(上海泸西分析仪器厂)。
       1.2 试药威灵仙Clematis chinesis Osbeck.产于四川峨眉山，柱果铁线莲Clematis uncinata Champ.产于贵州贵阳，均由贵阳中医学院王祥培副教授鉴定。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水。
       1.3 动物清洁级大鼠12只，雌雄各半，体重(200±20)g，由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(黔)2002-0001。
       2 实验方法
       2.1 色谱条件Dikma公司Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相：A(乙腈)-B(0.05%磷酸)梯度洗脱，0～15 min(B：99.9%→90%);15～20 min(B：90%→87%);20～50 min(B：87%→75%);50～70 min(B：75%→60%);70～90 min(B：60%→0%);90～105 min(B：0%→0%)，流速均为1 ml/min。检测波长：250 nm，柱温25℃。进样量10 μl。
       2.2 供试品溶液的制备
       2.2.1 威灵仙和柱果铁线莲灌胃液的制备分别取威灵仙和柱果铁线莲各100g，分别加水煎煮3次，煎液滤过，滤液浓缩，制成含药量1g/ml的溶液，供灌胃用。
       2.2.2 威灵仙和柱果铁线莲供试液的制备分别取威灵仙和柱果铁线莲药材粉末(过40目筛) 0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，分别加50ml 70%乙醇，称定其重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过,供高效液相色谱分析用。
       2.2.3 血浆样品的采集和处理大鼠随机分为威灵仙给药组、柱果铁线莲给药组和空白组，每组4只。给药组以药液量10 ml/kg灌胃，空白组给予同体积的蒸馏水，1次/d，连续3d。末次给药后1h，腹腔注射20%乌拉坦(1 ml/100 g)，麻醉后，从下腔静脉取血约5ml于肝素钠抗凝的具塞离心管中，离心10 min(3 000 r/min)，微量移液器吸取血浆1 ml置离心管中，加入乙腈2 ml，漩涡振荡30 s，在离心机上离心30 min(4 000 r/min)，取上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,供高效液相色谱分析用。
       2.3 高效液相色谱分析按液相色谱条件，分别测定威灵仙药材、柱果铁线莲药材、威灵仙含药血浆、柱果铁线莲含药血浆和空白血浆的高效液相色谱指纹图谱。
       3 结果
       图1(A～E)分别为威灵仙药材、柱果铁线莲药材、空白血浆、威灵仙含药血浆和柱果铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱。由图1(A，B)可见，威灵仙与柱果铁线莲高效液相色谱指纹图谱共有10个色谱峰，即1～10号峰。由图1(C，D，E)可见，与空白血浆高效液相色谱指纹图谱相比，威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱有5个共有峰，即a～e号峰。比较图1(A，B，C，D，E)可知，威灵仙药材和柱果铁线莲药材高效液相色谱指纹图谱共有峰5号保留时间与威灵仙含药血浆和柱果铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱共有峰d号相对应，说明威灵仙药材和柱果铁线莲药材可能有一个相同的原型成分吸收入血，其它可能为代谢成分。
       4 讨论
       实验中分别采用甲醇沉淀法、高氯酸沉淀法、乙腈沉淀法对血浆样品进行处理，从对待测组分的影响、干扰情况及对色谱分析条件的影响等方面进行考虑，确定采用乙腈沉淀法处理血浆样品。
       通过二极管阵列检测器分别对威灵仙药材与柱果铁线莲药材高效液相色谱指纹图谱10个共有峰、威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱5个共有峰的光谱图进行分析，其光谱图相一致。
       比较图1(A，B，C，D，E)发现，威灵仙药材与柱果铁线莲药材具有10个相同的化学成分，而威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆检出5个相同成分，其中1个为药材的原型成分，但这些共有成分是否是威灵仙和柱果铁线莲发挥相同功效的药效物质基础，有待于进一步研究。
       【参考文献】
         　　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：204.
       
       [2] 肖培根.新编中药志[M].北京：化学工业出版社，2002：679.
       
       [3] 王喜军.中药血清药物化学的研究动态及发展趋势[J].中国中药杂志，2006，31(10)：789.