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       【摘要】 
       目的研究赤雹果水提物的抗炎作用，并探讨其作用机制。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型，观察赤雹果水提物对急性炎症的作用;采用小鼠棉球肉芽肿实验模型，观察其对慢性炎症的作用;通过测定角叉菜胶致足跖肿胀小鼠血清及足爪中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)及前列腺素E2(PGE2)的含量，足爪中总蛋白含量，评价其抗炎作用的可能机制。结果赤雹果水提物3.2，1.6，0.8g·kg-1剂量组可显著抑制小鼠耳肿胀、小鼠足趾肿胀及小鼠棉球肉芽的增生(与NS组比较P<0.01～0.05)，降低角叉菜胶致足趾肿胀小鼠血清和足爪中NO、MDA及PGE2含量，减少炎症组织总蛋白的渗出(与NS组比较P<0.01～0.05)。结论赤雹果水提物具有显著的抗炎作用，其作用机制可能与抑制NO、PGE2合成及脂质过氧化有关。
       【关键词】  赤雹果; 抗炎; 机制; 一氧化氮; 丙二醛; 前列腺素
       Abstract：ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory effect and its mechanism of the water extract of the fruit of Thladiantha dubia Bunge(FTDB). MethodsThe model of mouse ear swelling was induced by xylene;the model of mouse paw edema was induced by carrageenin, and the model of mouse cotton pellet granuloma was used to analyze the effect of the water extract of FTDB on inflammation.The contents of NO,MDA ,PGE2 in serum and swelling hind paw were determined to investigate the antiinflammatory mechanism of the water extract of FTDB. ResultsThe water extract of FTDB could significantly improve the symptoms of inflammation in the model of ear swelling, mouse paw edema and cotton pellet granuloma.It could also reduce the contents of NO,MDA and PGE2 in serum and paw. Conclusion The results suggested that the water extract of FTDB has significant antiinflammatory effects. Its mechanism is related to inhibiting the produce of NO, PGE2 and MDA.
       Key words：Thladiantha dubia Bunge; Anti-inflammation; Mechanism; NO; MDA; PG
       赤雹果(The fruit of Thladiantha dubi Bunge, FTDB)是葫芦科多年生蔓性草本植物赤雹的干燥成熟果实[1]，是满族民间长期应用的药材。主要分布于华北、东北、内蒙等地区，多为民间自种备用。主要用于治疗腰腿痛、风湿痛、痛经、软组织损伤等，疗效显著且无明显毒副作用[2]，具有巨大的研究开发价值。本文首次对赤雹果水提物的抗炎作用及其机制进行了探讨，为该药的进一步研究开发及临床应用提供实验基础。
       1 材料与仪器
       1.1 药品与试剂赤雹果水提物(WFTD)由承德医学院中药研究所药理毒理研究室制备(出膏率为40.6%);阿斯匹林(Asp)(批号：090226)，石家庄康力药业有限公司生产;角叉菜胶(批号：090116)，上海如吉生物科技发展有限公司生产;NO检测试剂盒，MDA测定试剂盒，总蛋白液体试剂盒(批号均为：20090417)，均购自南京建成生物工程研究所。其他试剂均为分析纯。
       1.2 动物昆明种小鼠，体质量20～22 g，由河北医科大学实验动物中心提供，合格证号：903015。
       1.3 仪器惠普HP-8453型紫外可见分光光度计;AG-245型电子分析天平(瑞士Mettler公司);XHF-1型高速分散器(上海金达生化仪器厂)。
       2 方法
       2.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[3]取小鼠50只，雌雄各半，随机分为模型组，WFTD高、中、低(剂量分别为3.2，1.6，0.8 g·kg-1)3个剂量组及阿斯匹林组(100 mg·kg-1)，每组10只，给药组按0.2 ml·(10g)-1容积ig给药，模型组给予同体积生理盐水。每日灌胃1次，连续3 d，末次给药30 min后，于小鼠右耳两面涂二甲苯0.1 ml致炎，左耳不涂为正常耳。1h后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径6 mm打孔器在同一部位取下耳片，称重，以左右耳片重量差值表示炎性肿胀程度，观察药物作用。
       2.2 对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响[4]取小鼠50只，雌雄各半，分组情况同“2.1”项，每日灌胃给药一次，连续3 d，末次给药后30 min，于每只小鼠右后肢足趾注射1%角叉菜胶50 μl， 4 h后，摘眼球取血，3 000 r/min离心10 min得血清，-20℃保存待测。脱颈椎处死小鼠，于踝关节处剪下左右后肢，称重，以左右后肢重量之差作为炎症肿胀程度。将剪下的上述致炎足剪碎，放入盛有2ml生理盐水的离心管中，用高速分散器捣碎，离心，取上清。
       2.3 对小鼠棉球肉芽肿的影响[3]取小鼠50只，雌雄各半，用10%水合氯醛ip麻醉，在无菌条件下，切开腹部皮肤，将已称重的棉球(5 mg/个)高压灭菌后，用适量青霉素液浸泡片刻，50℃烘干，分别植入小鼠两侧腋下。将术后小鼠随机分为5组，分组及给药情况同“2.1”项。术后第2天开始给药，连续7 d。末次给药24 h后，将小鼠脱颈椎处死，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重后，减去原棉球净重即为肉芽肿净重。比较组间肉芽肿重量。
       2.4 角叉菜胶致足趾肿胀小鼠血清、足爪中PGE2、NO、MDA及总蛋白含量的测定取“2.2”项中得到的血清和组织上清液各0.25 ml，加0.5 mol·L-1KOH-甲醇溶液2ml，在50℃下异构化20 min，加入5 ml甲醇稀释，混匀后于278 nm处测定吸光度A值(组织中的PGE2含量以每克炎症组织相当的A值表示)。血清和足爪中NO和MDA含量的测定，以及足爪中渗出总蛋白的含量测定，分别采用硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸法和考马斯亮兰法，按试剂盒说明书进行操作。
       3 结果
       3.1 WFTD对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 实验结果显示，与NS组比较，WFTD各剂量组均能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P<0.01)，表明其对急性炎症有明显的抗炎作用，且作用效果优于阿斯匹林组(P<0.05～0.01)。结果见表1。表1 赤雹果水提物对二甲苯诱发小鼠耳肿胀度的影响
       3.2 WFTD对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响 注射角叉菜胶后，NS组小鼠足趾肿胀明显，实验结果表明，与NS组比较，WFTD各剂量组均能显著抑制小鼠足趾肿胀(P<0.01)，且作用效果优于阿斯匹林组(P<0.05～0.01)。结果见表2。
       3.3 WFTD对小鼠棉球肉芽肿的影响 实验结果显示，与NS组比较，WFTD各剂量组均能明显抑制肉芽增生(P<0.01)，提示其对慢性炎症有显著的抗炎作用，且作用效果优于阿斯匹林组(P<0.05)。结果见表3。表2 赤雹果水提物对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀度的影响表3 赤雹果水提物对棉球诱导小鼠肉芽肿的影响
       3.4 PGE2、NO、MDA及总蛋白含量的测定 由表4～5结果可见，与模型组比较，WFTD各剂量组均使血清和足爪中PGE2和MDA的含量显著降低(P<0.01)，高、中剂量组可使血清和足爪中NO的含量显著降低(P<0.05～0.01)，WFTD高剂量组作用优于阿斯匹林组，两组比较有显著性差异(P<0.05～0.01)。由表5结果可见，WFTD各剂量组均能抑制足爪中总蛋白的渗出，与模型组比较有显著差异(P<0.01)，高剂量组作用优于阿斯匹林组，两组比较有显著性差异(P<0.05～0.01)。　　表4 赤雹果水提物对角叉菜胶致足趾肿胀小鼠血清中PEG2，NO，MDA含量的影响
       4 讨论
       炎症是在致炎因素作用下，由炎症细胞及其释放的炎症介质参与引起的一系列病理生理过程。在炎症反应中，致炎因素引起毛细血管扩张，通透性增加，中性粒细胞趋化、游走至炎症反应灶，释放炎症介质参与炎症反应[5]。本研究表明，赤雹果水提物各剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀、角叉菜胶所致小鼠足趾肿胀，以及小鼠棉球肉芽增生具有显著的抑制作用，表明其对急性和慢性炎症均有很强的抗炎作用。
       PGE2作为一种炎症介质，可与缓激肽、白三烯等炎症介质起协同作用，引起血管扩张，加强组胺和缓激肽升高血管通透性的作用。通过抑制PGE2的合成，可以减轻炎症反应[6]。在本研究中，赤雹果水提物能够显著减少角叉菜胶所致足趾肿胀小鼠血清中和炎症组织中的PGE2含量，推测其可能通过抑制COX活性，减少PGE2合成，减轻了炎性渗出和水肿。NO是一种重要的信使物质，同时也是一种重要的炎症介质，在炎症反应的许多环节发挥复杂的调节作用，其促炎症反应包括促进血管扩张，增强血管通透性，激活前列腺素合成酶等，研究认为急慢性炎症的发生均与NO有关系[7]。本实验表明，赤雹果水提物能够显著减少炎症小鼠血清中和炎症组织中的NO含量，因此抑制NO的生成可能是赤雹果水提物抗炎作用机制之一。在炎症过程中，炎症部位的中性粒细胞活化，发生呼吸暴发产生O2-·等活性氧自由基，这些氧自由基不仅能增加血管通透性，而且攻击生物膜磷脂中的多聚不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，造成生物膜损伤，尤其脂质过氧化产物MDA毒性更强，能进一步加重炎症反应[8]。赤雹果水提物显著降低了炎症小鼠血清和炎症组织中的MDA含量，表明赤雹果水提物的抗炎作用可能与抑制炎症过程中脂质过氧化产物形成有关。
       本研究表明，赤雹果水提物具有显著的抗炎作用，其抗炎机制可能与抑制PGE2合成，降低血清和炎症组织中NO水平，以及抑制炎症过程中脂质过氧化产物生成有关。至于其更深入的抗炎机制有待进一步研究。
       【参考文献】
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