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       【摘要】 
       目的对六味地黄方不同剂型中多糖含量进行测定及比较。方法采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果六味地黄方不同剂型中多糖含量为0.26%～15.41%。结论六味地黄方不同剂型中多糖含量具有一定的差异。
       【关键词】  六味地黄方; 剂型; 多糖
       Abstract：ObjectiveTo determine and compare the content of polysaccharides in Liuwei Dihuang prescription with different dosage forms.MethodsThe content of polysaccharides was measured by phenol-sulfuric acid method.ResultsThe content of polysaccharides in Liuwei Dihuang prescription with different dosage form varied from 0.26% to 15.41%. ConclusionThe polysaccharide content in Liuwei Dihuang prescription with different dosage forms are obviously different.
       Key words：Liuwei Dihuang prescription; Dosage form; Polysaccharide
       随着中药制剂技术、方法的不断创新和设备的不断完善，六味地黄方现已拥有传统与现代多种剂型品种，如汤剂、蜜丸、浓缩丸、胶囊等。由六味地黄方不同剂型药典标准或部颁标准可知，各剂型制备工艺不同，则药效活性成分的种类和含量存在一定的差异。现代药理研究表明，多糖具有改善机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗菌等生物活性[1～4]。六味地黄方不同剂型中多糖含量是否有显著性差异目前未见报道，故本实验进行多糖的含测及比较，旨在建立多糖的含量测定方法，以更好地表征该方制剂的内在质量。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器UV-2550紫外分光光度计(日本岛津公司);AUW220D型电子分析天平(日本岛津公司); AB104-N型电子分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]; HHS型电热恒温水浴锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);0406-1离心机(上海手术器械厂)。
       1.2 试药葡萄糖(广东汕头市西陇化工厂;分析纯);苯酚等试剂均为分析纯;六味地黄汤剂、蜜丸、浓缩丸、胶囊、片剂(本实验室自制);熟地黄、山茱萸(制)、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓均购自樟树中药饮片厂。
       2 方法与结果
       2.1 六味地黄方不同剂型成品的制备按六味地黄处方称取药材，参照《中国药典》或部颁标准分别制成六味地黄丸、六味地黄浓缩丸、六味地黄胶囊和六味地黄片;按经典六味地黄处方比例称取药材，加10倍量水煎煮3次，40 min/次，合并滤液，定容，制成浓度为0.03 g/ml的六味地黄汤。
       2.2 标准品溶液与供试品溶液的制备
       2.2.1 葡萄糖对照品溶液精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖60.10 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得葡萄糖对照品溶液(0.601 0 mg/ml)。
       2.2.2 供试品溶液称取“2.1”项下制备的六味地黄丸、浓缩丸、胶囊和片剂以及市售六味地黄方不同剂型成品各约3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水80 ml，沸水浴2 h，冷却至室温，用蒸馏水定容置100 ml容量瓶中，混匀，过滤，精密吸取续滤液和“2.1”项下制成的六味地黄汤制剂1 ml置10 ml具塞刻度玻璃试管中，分别加入无水乙醇4ml，离心(4 000 r/min) 10 min，弃上清液，沉淀用80%乙醇溶液洗涤2～3次，再用蒸馏水溶解并定容至100 ml容量瓶中，摇匀，备用。
       2.3 标准曲线的绘制精密吸取葡萄糖对照品溶液(0.6010 mg/ml)1.0，3.0，5.0，8.0，10.0，12.0，15.0ml置50ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液2.0 ml置10 ml具塞刻度玻璃试管中，各加1.0 ml 5%苯酚溶液，混匀，迅速滴加5.0ml浓硫酸，放置10 min，置沸水浴中加热10 min，取出后冷却至室温。另以2.0 ml蒸馏水同上平行操作为空白对照，于波长490nm处测定。以吸收度(A)对浓度(C)进行线性回归，得标准曲线回归方程为A=13.472C+0.030 8，r=0.999 5;结果表明，葡萄糖60.10～180.30 μg与吸光度具有良好的线性关系。
       2.4 稳定性实验精密吸取对照品溶液(0.601 0 mg/ml)，照“2.3”项下的方法测定，每隔10 min测定1次，至2 h，RSD=0.88% (n=12)，说明吸收度在120 min内稳定。
       2.5 精密度实验取按“2.2.2”项下处理的六味地黄汤制剂样品溶液1份，参照“2.3”项下的方法测定，连续测定6次，测得RSD为0.30% (n=6)。
       2.6 重复性实验取按“2.2.2”项下处理的六味地黄汤制剂供试品液5份，按 “2.3”项下操作，分别测定， 计算得5份六味地黄汤制剂样品中多糖平均含量为6.68%，RSD=3.87%。
       2.7 加样回收率实验精密吸取6份已知含量为2.02%的六味地黄汤制剂样品溶液1.0 ml，准确加入葡萄糖标准品6.40 μg，按“2.3”项下操作测定。结果表明，六味地黄汤制剂平均回收率为99.45%，RSD=2.12%(n=6)。
       2.8 样品含量测定精密吸取“2.2.2”项下的供试品溶液、葡萄糖对照品溶液及蒸馏水各2.0 ml。按“2.3”项下操作测定。计算样品中多糖的含量 (以葡萄糖量计算)。结果见表1～2。表1 六味地黄方自制不同剂型多糖含量测定结果表2 六味地黄方不同厂家不同剂型多糖含量测定结果
       3 讨论
       根据六味地黄汤等制剂的规格，本试验将样品取样量折算成为相同生药量进行多糖含量(以葡萄糖%计，为多糖含量/生药量)测定结果的计算及比较，以期所得结果更具科学性和合理性。由测定结果表1～2可知，六味地黄方各剂型成品多糖含量存在一定的差异，其中自制样品片剂与大蜜丸含量最高，二者较为相近;而胶囊含量最低。市售样品多糖测定结果呈现出相似的规律。分析原因为：①市售样品各厂家采用的原药材不尽相同，制备过程中工艺参数控制有别;②六味药材在各剂型的生产工艺中处理各有千秋;③规格为0.3 g/粒的胶囊采用了大孔吸附树脂(大孔树脂不吸附多糖)进行有效成分的提取分离，而规格为0.5 g/粒的胶囊未过大孔吸附树脂柱，所以两种胶囊多糖含量差异较大。比较结果表明，在制备工艺中满足代表成分含量达标时需兼顾多糖的含量，为今后该方剂型的改革和质量评价提供参考。
       据报道，六味地黄多糖CA4-3是免疫活性多糖，B 细胞是其直接作用的主要靶细胞之一，提示六味地黄汤中的酸性多糖是该复方发挥免疫调节作用的重要物质基础之一[5，6]。本实验表明六味地黄方各剂型成品多糖含量参差不齐，那么它们之间的免疫调节能力是否存在差异，并且差异性如何将有待于进一步研究。
       【参考文献】
         　[1] 陈洪亮,李伯涛,张家祥,等.免疫活性多糖的免疫调节作用及机制研究进展[J].中国药理学通报,2002,18(1):249.
       
       [2] 王统一,赵 兵,王玉春.多糖免疫调节和抗肿瘤研究进展[J].过程工程学报,2006,6(4):674.
       
       [3] 章栋梁,郭向莹,余南静,等.多糖生物活性及应用研究新进展[J].湖北农业科学,2009,48(9): 2282.
       
       [4] 陈晓青,蒋新宇,刘佳佳.中草药成分分离分析技术与方法[M].北京:化学工业出版社,2006：210.
       
       [5] 付艳荣.六味地黄汤来源多糖CA4-3的免疫药理学研究[D].中国人民解放军军事医学科学院硕士学位论文,2001：6.
       
       [6] 齐春会,付艳荣,张永祥,等.六味地黄多糖CA4-3对小鼠B细胞功能的作用[J].中国药理学通报,2001,17 (4): 964.