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       【摘要】 
       目的对地龙的脂肪酸成分进行研究。方法采用皂化法提取地龙中脂肪酸，并采用气相色谱法对其进行分析。结果皂化法提取地龙中肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈烯酸和次亚油酸相对含量较高。二十碳五烯酸(EPA)/花生四烯酸(AA)的相对含量比值为1.78，地龙中多不饱和脂肪酸(PUFA)相对含量为20.07%。结论该研究为地龙的药用价值发展提供科学依据。
       【关键词】  地龙; 脂肪酸
       Abstract：ObjectiveTo analyze the fatty acid composition of earthworm.MethodsThe samples of earthworm were extracted by the saponification and the contents of fatty acids were determined by GC. ResultsEarthworm had higher relative amount of myristic acid,hexadecanoic acid,palmitoleic acid and linoleic acid. The ratio of relative amount between Eicosapentaenoic acid(EPA) and arachidonic acid(AA)was 1.78 and the relative amount of Polyunsaturated fatty acids (PUFA) was 20.07% in the earthworm.ConclusionThis study can provide scientific reference for the development of medicinal value of earthworm.
       Key words： Earthworm; Fatty; Aacid
       地龙也称蚯蚓、曲蟮、广地龙等，属于环节动物门，性咸寒，归肝、脾、膀胱经，具有平喘、降压、抗血栓、解热消炎、抗肿瘤、抗癌的作用[1]。临床应用于治疗高热神昏、惊痫抽搐、关节痹痛、肢体麻木、半身不遂、肺热喘咳、尿少水肿、高血压。地龙含有氨基酸、核苷酸、纤溶酶、纤溶酶原激活剂等活性成分，还含有丰富的脂肪酸及微量元素。人们对脂肪酸特别是不饱和脂肪酸的营养价值及生理功能进行了很多的研究，结果表明，不饱和脂肪酸特别是多元不饱和脂肪酸具有许多重要的生理功能，能降低胆固醇、预防动脉硬化、预防老年痴呆症,改善大脑机能以及预防视力下降等。而地龙中脂肪酸化学成分的研究未见报道，因此本文运用气相色谱法对地龙的脂肪酸进行了研究，为地龙资源的充分利用提供依据。
       1 仪器与材料
       1.1 仪器GC-14C型气相色谱仪(SHIMADZU，日本);DZF-6050型真空干燥箱(上海-恒科技有限公司);IJK 10T匀浆机(德国);XW-80A旋涡混合器(上海精科实业 有限公司);电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);低速大容量多管离心机(上海安亭科学仪器厂)。
       1.2 材料地龙为环节动物门钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum (Perrier)(购自北京同仁堂长春药店有限责任公司，生产批号：07031077)，石油醚、甲醇、氯仿、醋酸乙酯、正己烷均为色谱纯。
       2 方法
       2.1 两种方法提取地龙中脂肪酸
       2.1.1 有机溶剂法提取地龙中脂肪酸称取地龙粉末0.5 g，精密称定。加入内标液100 μl，生理盐水5 ml，氯仿匀浆5 min，离心，取出上层液，加入氯仿、生理盐水2.5 ml离心，取出下层液，用氮气吹干;加入甲基化试剂，100℃水浴加热1 h，冷却后加入去离子水、石油醚离心，收集上层液，氮气吹干，正己烷溶解，气相色谱法测定脂肪酸含量。结果见表1。
       2.1.2 皂化法提取地龙中脂肪酸称取地龙粉末0.3 g，精密称定。加入内标液100 μl，生理盐水5 ml，匀浆3 min，加入皂化试剂，80℃水浴加热30 min，冷却，加入生理盐水、硫酸溶液、醋酸乙酯-正己烷(1∶6 V/V)离心，分取有机层，氮气吹干;加入甲基化试剂，100℃水浴加热1h，冷却，加入去离子水、石油醚离心，收集上清液，氮气吹干，正己烷溶解，采用气相色谱法测定脂肪酸含量。结果见表1。
       2.2 脂肪酸成分分析样品加入100 μl正己烷溶解，使用GC-14C气相色谱仪分析。工作条件：毛细管柱DB-23，进样口温度220℃，程序升温：色谱柱起始温度170℃，以4℃/min程序升温至210℃，恒温10 min。使用StatView软件分析25种脂肪酸相对含量，运用统计学方法处理数据。结果见图1及表1～2。
       3 结果
       从表1～2可知，皂化法提取的饱和脂肪酸占51.20%，单不饱和脂肪酸占28.71%，多不饱和脂肪酸占20.07%;有机溶剂提取法提取的饱和脂肪酸占60.25%、单不饱和脂肪酸占24.43%，多不饱和脂肪酸占16.21%，因此，皂化法较有机溶剂提取法提取的不饱和脂肪酸含量高，收率好。地龙中含有大量的肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈烯酸和次亚油酸， EPA/AA的相对含量比值较大，提示地龙中脂肪酸可能具有药效作用。图1 地龙中脂肪酸测定的色谱图表1 两种方法提取分离的脂肪酸种类和相对含量比较表2 地龙中脂肪酸的相对含量比
       4 讨论
       目前脂肪酸的研究是许多学者的研究热点，常用脂肪酸的提取方法有皂化法和有机溶剂提取法，本实验采用两种方法作为比较，结果为皂化法提取的不饱和脂肪酸含量高于有机溶剂提取法。 脂肪酸是脂肪的主要组成部分，与维生素、氨基酸一样是人体最重要的营养素之一。随着各国学者对脂肪研究的深入，人们渐渐发现，脂肪中的不饱和脂肪酸成分，尤其是多不饱和脂肪酸才是脂肪的主要活性物质，它对机体炎症反应、血栓形成、过敏、哮喘等慢性疾病及大脑发育等都起着十分重要的作用。如土鳖虫中脂肪酸具有抗肿瘤的作用[2];龟板中脂肪酸不仅具有调节类脂化合物的代谢作用，还能增强信使RNA的稳定性[3]等等。研究结果为地龙药用价值的开发提供科学依据,并且其脂肪酸种类及含量与地龙药理活性之间的关系有待进一步研究。
       【参考文献】
         　[1] 吕金胜，吴 畏，孟德胜，等.地龙醇提物抗炎及镇痛作用的研究[J].中国药剂师，2003，6(1)：16.
       
       [2] 邹 玺，刘宝瑞，钱晓萍，等.土鳖虫脂肪酸乳剂的制备及体内抗肿瘤作用[J].肿瘤，2007，27(4)：333.
       
       [3] 陈 薇，曾和平，王春燕，等.中药龟板提取物化学成分及其调控鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)增殖[J].化学学报，2007，65(3)：265.