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       【摘要】 
       目的建立草果种子生活力测定的方法，为种子保存、种苗生产提供依据。方法采用TTC(四唑)法测定8组不同处理的草果种子生活力。结果草果种子存在吸涨损伤，8组不同处理方法在不同程度上避免吸涨损伤;草果种子对0.5% TTC染色反应比1.0% TTC敏感。结论室温浸泡4 h，25 ℃恒温浸湿48 h的处理能有效避免吸涨损伤，0.5% TTC染色48 h以测定草果种子生活力。
       【关键词】  草果种子; 生活力; 吸涨损伤
       草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire为姜科豆蔻属多年生宿根草本植物[1，2]，果实入药，以个大、饱满、气辛香者为佳[3]。草果为芳香化湿药，入脾、胃二经，暖脾和胃，理气宽中，治心腹痛，止呕补胃，下气，消酒毒[4]。草果是云南特产的中药材和调味品，约占全国产量的百分之九十五[3]。TTC(四唑)染色方法测定种子生活力，方法简便快捷，适用范围广，新采收种子、休眠种子、储存多年种子都可以用此方法，而且结果准确[5～7]。本文采用TTC法[5～9]对草果种子生活力进行了初步研究，为快速了解种子潜在的发芽能力，为种子的保存和生产、以及药材生产提供依据[6，7]。目前，草果种子生活力测定未见相关文献报道。
       1 材料和方法
       草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire种子采自高黎贡山标坡居群，该居群位于N 24 °50.289′ E 98 °46.501′;海拔2 070 m。2007-10采收，室内自然干燥，用牛皮纸袋存放。随机抽取200粒种子，随机分为8份，每份25粒种子，分别做8种不同的处理[10](见表1)，将处理后的种子剥去假种皮，沿种脊小心地通过胚中心切成两瓣，分别放入培养皿内，注入TTC溶液浸没剖面，分别采用1.0% 和0.5% TTC溶液在30～35 ℃下进行不同染色时间的处理，观察种子切面，根据种胚各部分的染色反应，确定种子有无生活力。种胚全部染色的为有生活力种子，子叶有1/3以下不染色的也是有生活力的种子;种子完全不染色的为无生活力种子;胚染成浅红色的为染色浅、生活力弱的种子[9]。每组实验重复4次。经统计分析，确定草果种子生活力测定方法。
       2 结果与讨论
       2.1 0.5% TTC染色观察草果种子生活力用0.5% TTC溶液对各组种子染色并统计(见表2)，染色48 h，有生活力种子平均数量E组最大，为18.00，B组最小，为2.25;无生活力种子平均数量B组最大，为13.50，H组最小，为5.50;生活力弱种子平均数量A最大，为13.13，E组最小，为1.00。表1 不同处理方法48 h染色有生活力种子平均数量的比较　表2 0.5% TTC染色48 h种子生活力统计
       2.2 1.0% TTC染色观察草果种子生活力用1.0% TTC溶液染色各组种子并统计(表3)。表3 1.0% TTC染色48h种子生活力统计图1 0.5% TTC染色不同染色 图2 1.0% TTC染色不同染色时间有生活力种子平均数的变化 时间有生活力种子平均数的变化
       2.3 TTC浓度用0.5%或1.0%TTC染色，有生活力种子平均数都是E组最高(表1)。 0.5% TTC染色，各组对染色的反应时间存在差异：E组染色6 h，D组染色10 h，F组染色24 h，A组、C组、G组染色27 h，H组染色31 h，有生活力种子平均数开始缓慢增多。1.0% TTC染色，各组对染色的反应时间差异不如0.5% TTC染色的差异明显：A、E、F、G、H组染色24 h，B、C、D组染色34 h，有生活力种子平均数开始缓慢增多(图1、2)。在实验过程中，草果种子经48 h染色，0.5% TTC染色较1.0% TTC染色颜色更红，容易观察计数。可能提示草果种子对0.5% TTC染色更为敏感。
       2.4 染色时间两种不同浓度TTC染色6～48 h，有生活力种子逐渐被染成红色，被染成红色的有生活力种子数量随着染色时间的延长而增多。染色时间达到48 h时，有生活力种子数量均达到最高值，在实验中观察到继续增加染色时间，有生活力种子数无增多现象,随着时间的延长，TTC染液会在培养皿壁形成朱红色的沉积，可能也会影响染色结果，所以染色时间不宜超过48 h。
       2.5 吸涨损伤种子猛烈吸水后，吸水不均匀，产生局部坏死，这就是吸涨损伤[10]。避免吸涨损伤可以保证生活力测定更为准确，同时提示种子萌发时应考虑避免吸涨损伤，提高萌发率。
       各组实验的结果比较可看出草果种子存在吸涨损伤(表1)。A组和B组比较，室温下随着种子浸泡时间延长，吸涨损伤更加严重;C组和D组比较，室温下随着种子浸湿时间延长，吸涨损伤减轻。B组和D组比较，室温下种子浸泡48 h引起的吸涨损伤大于种子浸湿48 h;A组和C组比较，室温下种子浸泡24 h引起的吸涨损伤大于种子浸湿24 h。
       A组、B组、G组用0.5% TTC染色，有生活力种子数量均低于1.0% TTC染色的数量。0.5% TTC染色48 h有生活力种子平均数从高到低依次是E组、F组、H组、D组、G组、C组、A组、B组;1.0% TTC染色48 h有生活力种子平均数从高到低依次是E组、F组、G组、H组、A组、D组、B组、C组。这种差异的产生可能是由于部分发生吸涨损伤的种子仍有微弱的呼吸作用，会被高浓度(1.0%)TTC染成红色，表现为有生活力的种子，而不容易被低浓度的(0.5%)TTC染成红色，表现为无生活力或生活力弱的种子，导致生活力测定的误差。
       部分种子处理时间不够，染色时浸泡在染液中仍然吸水较为猛烈，也产生吸涨损伤，种子仍有微弱的呼吸作用，会被高浓度(1.0%)TTC染成红色，表现为有生活力的种子，导致生活力测定的误差。A组和C组比较，室温24 h的浸泡和浸湿处理，0.5% TTC染色时，草果种子生活力平均数量的差异反映出种子存在的吸涨损伤，1.0% TTC染色，则不能从种子生活力平均数量的差异上反映出种子存在的吸涨损伤;C组和D组比较，都是由于C组浸湿处理时间不够，浸泡在染液中产生吸涨损伤。B组和D组比较，室温48 h的浸泡和浸湿处理，0.5% TTC染色，草果种子生活力平均数量差异比1.0% TTC染色的差异大，反映出草果种子吸涨损伤差异大，1.0% TTC染色这种差异减少。同时提示0.5% TTC染色比1.0% TTC染色更能准确的反映草果种子生活力的细微变化。
       2.6 浸湿处理浸湿处理能在一定程度上避免吸涨损伤，H组和G组比较，低温时浸湿时间延长，有生活力种子平均数量下降;D组和C组比较，室温浸湿时间延长，有生活力种子平均数量上升;H组合C组比较，处理24 h，4 ℃浸湿有生活力种子平均数量高于室温浸湿的数量;D组和G组比较，处理48 h，4 ℃浸湿的有生活力种子平均数量低于室温浸湿的数量;说明在一定的时间范围内，低温浸湿比室温浸湿更能有效避免吸涨损伤，低温浸湿的时间延长，有生活力种子平均数量下降，可能是低温处理使草果种子呼吸作用减弱，生活力也随之降低。提示草果种子对低温的反应比较敏感，长期低温可能损伤种子，降低种子生活力，在种子的萌发、保存和运输过程中应该避免低温带来的影响。
       草果种子直接浸湿，比较H组、D组、G组、C组的试验结果，4℃浸湿24 h，草果种子有生活力平均种子数最高，室温浸湿24 h，有生活力种子平均数量最低。室温浸湿48 h，有生活力种子平均数量高于室温浸湿24 h，甚至高于4 ℃浸湿48 h;说明室温下缓慢湿润，种子易吸收外部水分，有效避免吸涨损伤。
       E、F组和其他组比较，表明短时间的浸泡后，再作浸湿处理，种子能更有效的避免吸涨损伤。E组和F组比较，48 h，25 ℃浸湿比4 ℃浸湿有生活力种子平均数量更大。
       低温缓慢湿润法是避免吸涨损伤的一种合理方法[10]，对于草果种子而言，长时间(48 h)低温可能对种子造成伤害。草果种子坚硬的种皮外还包裹紧密的假种皮，采用室温浸泡4 h后，25 ℃恒温箱内浸湿48 h的处理，更能有效避免吸涨损伤，对草果种子生活力的影响最小(表1)。
       3 结论
       采用TTC(四唑)法测定草果种子生活力，应该避免吸涨损伤对测量结果的影响。在实际测量中草果种子对0.5%TTC染色反应比1.0%TTC敏感，染色时间达到48 h时，有生活力种子数量均达到最高值。通过本研究，建立了草国种子生活力测定的方法：种子在室温(21～25 ℃)下浸泡4 h，25 ℃恒温浸湿48 h的处理后，用0.5%TTC染色48 h，统计分析草果种子生活力，为种子保存、种苗生产提供依据。
       【参考文献】
         　[1] 中国植物志编委会. 中国植物志 (第16卷第2分册)[M].北京：科学出版社，1981.
       
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       [4] 国家中医药管理局《中华本草》委员会. 中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999.
       
       [5] 胡文多,赵曙国, 郭成亮,等. 进境粮谷中截获的检疫性杂草种子生活力测定[J].检验检疫科学，2008,2:19.
       
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       [10] 郑智礼，任兆光，周长东，等.吸涨损伤对绿蒙古锦鸡儿种子生活力测定的影响[J].山西林业科技，1998,4:40.