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       【摘要】 
       目的建立高效液相色谱法测定红景天酒中红景天苷含量的方法。方法色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18(250 mm × 4.6 mm，5.0 μm)，流动相甲醇-水(18∶82)，检测波长为278 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为30 ℃。结果红景天苷进样量在0.072～1.296 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为98.90﹪，RSD为1.32﹪。结论该法灵敏度高，操作简便，结果准确可靠，可用于红景天酒中红景天苷含量的测定及其质量控制与评价。
       【关键词】  红景天酒; 红景天苷; 高效液相色谱法
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the quantitative determination of salidroside in Hongjingtian wine. MethodsThe samples were separated on a Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5.0 μm) column with the mobile phase of methanol-water (18:82) in the flow rate of 1.0 ml·min-1. The detection wavelength was set at 278 nm. column temperature was 30 ℃.ResultsThe linear range of salidroside was 0.072～1.296 μg (r=0.999 9). The average recovery of salidroside was 98.90 and the RSD was 1.32%(n=5). ConclusionThis method is sensitive, simple and accurate, which can be used to evaluate the quality control of Hongjingtian wine.
       Key words： Hongjingtian wine; Salidroside; HPLC
       红景天为景天科植物大花红景天(Rhodiola crenulata)干燥根及根茎，或以全草入药，具有清热解毒、燥湿、滋补强壮，扶正固本的功能[1]，是被康熙帝御封为“仙赐草”的高原人参。红景天酒(苏罗宝玛酒)由四川省草原研究所研制，配料有红景天、高粱白酒、纯净雪水，其中以生长在青藏高原五千米以上的红景天为主要原料，经过先进的超临界提取工艺处理后，用十年陈酿的纯高粱酒科学配制而成。现代药理研究表明，红景天苷具有抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射，保护心脑血管系统，调节神经、内分泌系统、免疫系统等药理作用[2,3]。红景天苷(Salidroside)是红景天的主要有效成分之一[4]，其含量的高低直接影响药品的疗效。中草药中红景天苷的含量测定方法已有报道[5]，但在其制剂中的含量测定报道相对较少，因此测定红景天苷的含量对控制本品的内在质量有重要现实意义。
       1 仪器与试药
       LC-2010AHT 高效液相色谱仪，包括SPD-10A型紫外检测器、SIL-20A自动进样器、LASS VP 6.12 SP4色谱工作站(日本岛津公司);KQ318 型首饰超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);BP-211D 分析电子天平(德国 Sartorius 公司，1/10万级);ZFQ85A 旋转蒸发器(上海医械专机厂有限公司)。红景天苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110818-200404);红景天酒(四川省草原研究所提供，批号：060518，060810，070312);甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5.0 μm);流动相为甲醇-水(18∶82);检测波长278 nm;流速1.0 ml/min;进样量5.0 μl;柱温30 ℃。
       2.2 对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的红景天苷对照品7.20 mg，置于50 ml容量瓶中，加入甲醇超声溶解，定容至刻度线，摇匀，制成质量浓度为0.144 mg/ml对照品溶液。
       2.3 供试品溶液的制备精密量取红景天酒20 ml，减压浓缩至无乙醇味，用甲醇少量多次超声溶解，溶解转移至10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，摇匀，再超声10 min，静置。吸取上清液，用0.45 μm有机膜过滤，取续滤液作供试品溶液。
       2.4 系统适应性试验分别取对照品溶液和供试品溶液，自动进样5.0 μl，记录色谱图。结果见图1。采用选定的色谱条件，红景天苷与体系中的其它物质能完全分离，保留时间13.592 min，理论塔板数以红景天苷计算大约5 500。a-对照品 b-供试品 1-红景天苷图1 高效液相色谱图
       2.5 线性关系考察精密吸取对照品溶液 0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，红景天苷进样量(X)为横坐标绘制标准曲线，计算，得回归方程 Y=1 177.9X-3 426.4，r=0.999 9。结果表明，红景天苷进样量在0.072～1.296 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
       2.6 精密度实验精密吸取对照品溶液5.0 μl，在同一条件下重复进样5次，按上述色谱条件进行测定，得红景天苷峰面积。结果红景天苷峰面积的RSD=0.26﹪(n=5)，表明仪器精密度良好。2.7 稳定性实验取同一供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，分别在0，2，4，8，12，16，24 h进样5.0 μl，测定红景天苷峰面积。结果结果红景天苷峰面积的RSD=0.72%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
       2.8 重复性实验取同一批号(批号：060518)样品20 ml，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液5份，每份精密吸取5.0 μl，按“2.1”项下色谱条件测定，测得红景天苷峰面积。结果，红景天苷的平均浓度为32.20 μg/ml，RSD=0.89﹪(n=5)，表明该方法的重复性良好。
       2.9 加样回收率实验取已知红景天苷含量的红景天酒18.0 ml，分别准确加入2.0 ml红景天苷对照品溶液，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液5份，测定峰面积，计算加样回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果
       2.10 样品含量测定取不同批号的3批样品，每个批号平行量取5份，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液。按“2.1”项下色谱条件测定，分别进样5.0 μl，测定供试品峰面积，用外标法计算样品含量。结果见表2。表2 样品含量测定结果
       3 讨论
       3.1 检测波长的选择取对照品适量，加入甲醇使其溶解，经紫外光谱测定，红景天苷在224 nm和278 nm处均有最大吸收峰，但由于在224 nm处检测，溶剂有一定影响，且红景天苷和酪醇不能很好的分离，故选择278 nm作为检测波长。
       3.2 流动相的选择本文考察了甲醇-水85∶15，90∶10，15∶85，16∶84，18∶82，20∶80，随甲醇比例的增加，红景天苷的保留时间减少，综合考虑后，选用甲醇-水18∶82，保留时间比一般文献[6]报道的短，且相邻峰得到良好的分离效果。
       【参考文献】
         　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业现版社，2005：106.
       
       [2] 肖 妤，李绍平，王一涛.红景天苷药理研究进展[J].实用医院临床杂志，2006，3(3):98.
       
       [3] 宋月英，闫玉仙，韩慧文，等.红景天苷药理研究进展[J].武警医学院学报，2008，17(7):635.
       
       [4] 李昱柳，苏巧娟，李灵芝.红景天苷药理活性研究进展[J].武警医学院学报，2007，16(1):98.
       
       [5] 王 洋，于 涛，阎秀峰.红景天属植物根中红景天苷及其苷元酪醇含量的HPLC分析[J].林产化学与工业，2006，26(3):51.
       
       [6] 王苏会，闫 荟，王 瑞，等. HPLC测定四珍力维胶囊中红景天苷含量[J].中国中药杂志，2008，33(5):587.